引用本文
钟璐, 纪宏宇, 庄宇婷, 王树圆, 陈博, 孙玉阳, 吴琳华. 乳癖消颗粒对小鼠体外子宫收缩的抑制作用* [J]. 医药导报, 2016,35(2): 129-131
Lu ZHONG, Hongyu JI, Yuting ZHUANG, et al. Inhibition Effects of Rupixiao Granules on Contractility of Uterus of Mice in Vitro [J]. HERALD OF MEDICINE,2016,35(2): 129-131  
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乳癖消颗粒对小鼠体外子宫收缩的抑制作用*
钟璐1, 纪宏宇2,3,4, 庄宇婷2,3,4, 王树圆2,3,4, 陈博2,3,4, 孙玉阳2,3,4, 吴琳华2,3,4
1.哈尔滨医科大学附属肿瘤医院药学部,哈尔滨 150086
2.哈尔滨医科大学附属第二医院药学部,哈尔滨 150086
3.哈尔滨医科大学药学院,哈尔滨 150086
4.黑龙江省高校重点实验室,哈尔滨 150086

作者简介: 钟璐(1989-),女,满族,黑龙江哈尔滨人,硕士,专业方向:药物新剂型与新制剂。电话:(0)13703654110,E-mail:13703654110@126.com。

通信作者: 吴琳华(1958-),女,黑龙江哈尔滨人,教授,硕士生导师,专业方向:药物新剂型与新制剂。电话:0451-86605835,E-mail:wlhqkj@126.com。

收稿日期: 2014-12-31 修回日期: 2015-03-13
基金: *黑龙江省科技攻关重大项目(GA13C101);
摘要

目的 探讨乳癖消颗粒对小鼠体外子宫平滑肌收缩活动的影响。方法 采用小鼠体外子宫收缩实验,将经过雌激素化的小鼠处死,取出子宫。用生物机能系统记录体外子宫平滑肌收缩曲线,并观察终浓度10,20,30,40,50,60 mg·mL-1乳癖消颗粒溶液对雌激素化小鼠体外子宫的影响和对缩宫素(5 U·L-1)引起的体外子宫痉挛收缩幅度、频率、活力的抑制作用,计算抑制率。结果 与基础值相比,乳癖消颗粒溶液在10~60 mg·mL-1终浓度时能显著降低小鼠子宫收缩能力( P<0.01);其在10~50 mg·mL-1终浓度时显著抑制缩宫素诱导的体外子宫痉挛性收缩( P<0.01)。结论 乳癖消颗粒能显著松弛小鼠正常子宫并能拮抗缩宫素引起的子宫平滑肌痉挛。

关键词: 乳癖消颗粒; 缩宫素; 子宫收缩; 抑制作用; 痛经; 原发性
中图分类号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:1004-0781(2016)02-0129-03 doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2016.02.005
Inhibition Effects of Rupixiao Granules on Contractility of Uterus of Mice in Vitro
Lu ZHONG1, Hongyu JI2,3,4, Yuting ZHUANG2,3,4, Shuyuan WANG2,3,4, Bo CHEN2,3,4, Yuyang SUN2,3,4, Linhua WU2,3,4
1.Department of Pharmacy,Cancer Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150086,China
2.Department of Pharmacy,the Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University,Harbin 150086,China
3.College of Pharmacy,Harbin Medical University,Harbin 150086,China
4.Key Laboratory of Drug Research,College of Heilongjiang Province,Harbin 150086,China
Abstract

Objective To study effects of Rupixiao granules on contraction of uterus of mice in vitro.Methods Mouse model with isolated uterine contraction was established.The mice pretreated with estradiol benzoate were sacrificed and then the uteri were taken out.The normal contractions were recorded by the biological function system.Effects of 10,20,30,40,50,60 mg·mL-1 Rupixiao granules on spontaneous and oxytocin-induced (5 U·L-1) uterine contractions were recorded,inhibition of Rupixiao granules on mean constriction amplitude,constriction frequency and contraction activity of pitocin-pretreated uterus was observed and the inhibition rates were calculated.Results Compared with the baselines,the amplitude,frequency,activity of spontaneous uterine contraction were significantly down-regulated by Rupixiao solution at a range of 10-60 mg·mL-1,as well as it could inhibit oxytocin-induced spasmodic contraction of isolated uterus at 10-50 mg·mL-1 ( P<0.01).Conclusion The Rupixiao granules inhibits spontaneous contraction of isolated mouse uteri and oxytocin-induced spasm of uterine smooth muscle in vitro.

Keyword: Rupixiao granules; Oxytocin; Uterine contraction; Inhibition effects; Dysmenorrheal; primary

原发性痛经是青春期少女最常见的妇科疾病,常见症状为下腹部疼痛、恶心、呕吐等,不同程度地影响着患者的生活质量。其发病的主要原因是子宫强烈收缩,治疗该病的一线药物为非甾体类抗炎药[1],虽然起效快、疗效较好,但伴有消化道损伤及肝、肾损伤等不良反应,而传统的中药治疗成为治疗痛经的更好选择[2]。本课题组前期实验结果已表明乳癖消颗粒具有抗炎镇痛活性[3],本研究旨在通过探讨乳癖消颗粒对小鼠体外子宫平滑肌收缩作用的影响,进一步证明乳癖消颗粒对原发性痛经的治疗作用。

1 材料与方法
1.1 实验动物

清洁级ICR雌性小鼠,体质量(20±2) g,由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供,实验动物生产许可证号:SCXK(黑)2013-001。动物在室温(20±2) ℃,相对湿度40%~60%条件下饲养,自由摄食与饮水,光照与黑暗时间各12 h。所有的动物实验和处理均遵照实验动物的护理和使用指导原则[4]。

1.2 试药

乳癖消颗粒(哈尔滨泰华药业股份有限公司,批号:20131008);苯甲酸雌二醇注射液(天津金耀氨基酸有限公司,批号:1007081);缩宫素注射液(上海禾丰制药公司,批号:130805);其他试剂均为市售分析纯。

1.3 仪器

BL-420生物机能实验系统,HW-400S恒温平滑肌浴槽、张力换能器(成都泰盟科技有限公司);AEL-40SM电子天平(日本岛津,感量:0.01 mg)。

1.4 制备小鼠体外子宫标本

参照文献[5]。ICR雌性小鼠20只,于实验前连续3 d腹腔注射苯甲酸雌二醇10 mg·kg-1·d-1,以同步化子宫并增加子宫对缩宫素的敏感性。第4 天处死小鼠,取出小鼠子宫(子宫肌条约1 cm),立即置于Locke’s液( 氯化钠 9 g、氯化钾 0.42 g、氯化钙 0.24 g、碳酸氢钠 0.5 g、葡萄糖1.0 g,加双蒸水至1 000 mL,pH 值7.2~7.4)中清洗,用3号细线分别扎住子宫两端,子宫颈端固定于浴槽底部,卵巢端连接在张力换能器上,置于含有Locke's液20 mL的恒温浴槽药筒中,温度为(37 ± 0.1) ℃,通入95%氧气(O2)+5% 二氧化碳(CO2)混合气体。通过调节张力传感器加0.009 8N前负荷,平衡约40 min,待子宫收缩稳定,恢复自发节律后,制模成功开始进行实验。

1.5 给药方法

1.5.1 乳癖消颗粒对小鼠体外子宫自发收缩的影响 乳癖消溶液配制:精密称取乳癖消颗粒13.33 g,研磨成细粉,溶于双蒸水20 mL中,超声溶解,配制成浓度为0.5 g·mL-1(含生药量)的溶液。待子宫收缩稳定后,预先记录10 min正常收缩曲线,采用累计加药法,向药筒中依次加入乳癖消溶液终浓度为10,20,30,40,50,60 mg·mL-1,每一浓度作用10 min。用Locke's液冲洗3次后,进行下一次实验[6]。

1.5.2 乳癖消颗粒对缩宫素诱导的小鼠体外子宫收缩的影响 待平衡约40 min,子宫恢复自发节律后,加入缩宫素注射液5 U·L-1,并记录15 min收缩曲线,采用累积加药法使药筒中乳癖消溶液终浓度依次达到10,20,30,40,50 mg·mL-1,每一种浓度作用10 min,观察药液对缩宫素引起的子宫痉挛收缩的抑制作用。

1.6 观察指标

子宫的收缩可以用收缩幅度、频率、子宫活动力(以幅度和频率乘积表示)3种指标进行描述。计算给药前10 min及每个给药浓度10 min内子宫收缩幅度、频率及活力,并计算三者抑制率。抑制率(%)=(给药前参数-给药后参数)/给药前参数×100%。

1.7 统计学方法

采用GraphPad Prism 5软件进行统计学分析,实验数据以均数±标准差( x¯ ±s)表示,采用 t检验,以 P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 乳癖消颗粒对小鼠体外子宫自发收缩的影响

结果见图1,2。浓度10~60 mg·mL-1乳癖消颗粒溶液显著地抑制小鼠子宫自发收缩,并呈浓度依赖性。子宫自发收缩的幅度、频率及活力抑制率均显著下调,与加药前比较,差异有统计学意义( P<0.01),浓度达到60 mg·mL-1时,子宫收缩幅度、频率及活力抑制率均>80%。

图1 不同浓度乳癖消溶液对小鼠体外子宫收缩的作用(示意图)Fig.1 Effect of Rupixiao granules at different concentration on the contraction of isolated uterus of mice in vitro

图2 不同浓度乳癖消颗粒溶液对小鼠体外子宫自发收缩对的幅度、频率及活力的抑制作用( x¯ ±s, n=10)Fig.2 Inhibitory effect of Rupixiao granules at different concentration on the amplitude, frequency and activity of spontaneous contraction of isolated uterus of mice in vitro( x¯ ±s, n=10)

2.2 乳癖消颗粒对缩宫素诱导的小鼠体外子宫收缩的影响

图3所示,加入缩宫素后,子宫收缩显著增强。图4所示,10~50 mg·mL-1乳癖消溶液显著地抑制了缩宫素诱导的子宫痉挛性收缩,与加药前比较,差异有统计学意义( P<0.01),随着药物浓度的增加,抑制率也随之增大,当浓度达50 mg·mL-1时,子宫收缩活力几乎完全被抑制,抑制率约为97.46%。子宫收缩的幅度、频率及活力抑制率均显著下调( P<0.01)。

图3 乳癖消溶液对缩宫素诱导小鼠体外子宫收缩的作用(示意图)Fig.3 Effect of Rupixiao granules on oxytocin-induced contraction of isolated uterus of mice in vitro(original tracing example)

图4 不同浓度乳癖消颗粒溶液对缩宫素诱导的小鼠体外子宫收缩幅度、频率及活力的抑制作用( x¯ ±s, n=10)Fig.4 Inhibitory effect of Rupixiao granules at different concentration on the amplitude, frequency and activity of oxytocin-induced contraction of isolated uterus of mice in vitro( x¯ ±s, n=10)

3 讨论

缩宫素是一种九肽激素,刺激子宫平滑肌收缩,模拟正常分娩的子宫收缩作用,导致子宫颈扩张。在分娩过程中,子宫收缩的幅度和频率与缩宫素的分泌呈正相关[7]。原发性痛经的主要发病机制是子宫的异常收缩,导致子宫平滑肌缺血,从而引起子宫肌层痉挛性收缩,产生疼痛并诱发痛经[8]。其与子宫肌肉活动增强所导致的子宫张力增加和过度痉挛收缩有关[9]。

缩宫素诱导的体外子宫收缩是国内外广泛采用的原发性痛经模型,缩宫素作为该模型的工具药,可引起子宫强烈而持久的收缩,类似于患者痛经时子宫的病理

状态。缩宫素可与子宫平滑肌细胞上缩宫素受体结合,直接作用于子宫肌细胞,通过磷酸肌醇合成,引起细胞内钙释放,从而诱导子宫平滑肌收缩。此外,缩宫素与受体结合后由第二信使介导,通过肌细胞膜上电压或激素调控细胞外钙内流产生宫缩作用[10,11]。该模型模拟痛经周期雌激素增多,导致缩宫素受体增多[12],使机体对缩宫素更敏感。实验证明乳癖消颗粒可抑制缩宫素诱导小鼠体外子宫收缩。

本研究证明乳癖消颗粒能抑制正常小鼠子宫收缩和缩宫素诱发性收缩,且呈剂量依赖性。这一结果提示,乳癖消颗粒可有效抑制正常及痛经情况下子宫平滑肌收缩,缓解子宫痉挛。本研究为乳癖消颗粒在妇科疾病治疗的应用提供依据,其治疗原发性痛经的作用及其机制还需进一步研究。

The authors have declared that no competing interests exist.

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