柴葛疏表颗粒药效学研究
杨雅婷, 吕晓君, 周素文, 潘望平, 何开勇
湖北省食品药品监督检验研究院,武汉 430064

作者简介: 杨雅婷(1979-),女,湖北武汉人,主管药师,学士,主要研究方向:药理毒理。电话:027-87271327,E-mail:yangtan3814@2008.sina.com.cn

通信作者: 吕晓君(1983-),女,湖北钟祥人,主管药师,硕士,主要研究方向:药理毒理。电话:027-87271327,E-mail:1012814506@qq.com

摘要

目的 观察柴葛疏表颗粒的解热、抗炎、镇痛作用。方法 动物按体质量随机分为模型对照组、吲哚美辛组(给予吲哚美辛)、风热感冒颗粒组(给予风热感冒颗粒)及柴葛疏表颗粒大、中、小剂量组(分别给予相当于生药26,13,6.5 g·kg-1),灌胃给药,连续5 d。通过酵母致大鼠发热模型观察其解热作用,通过1%角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型及二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型观察其抗炎作用,通过0.6%醋酸致小鼠急性腹膜炎模型及小鼠足部接触热板观察其镇痛作用。结果 与模型对照组比较,柴葛疏表颗粒大剂量组在酵母造模后0.5 h,中剂量组在酵母造模后4~6 h可抑制大鼠体温升高;柴葛疏表颗粒大剂量组在角叉菜胶造模后1,2,3 h,柴葛疏表颗粒中剂量组在角叉菜胶造模后2,3,4 h能较好抑制大鼠足趾肿胀度;柴葛疏表颗粒大、中、小剂量组对二甲苯所致小鼠耳部炎症的抑制率分别为58.2%,52.0%,53.9%;柴葛疏表颗粒大、中、小剂量组对醋酸所致小鼠扭体次数的抑制率分别50.5%,68.8%,58.1%;热板法中柴葛疏表颗粒大、中、小剂量组均可延长小鼠痛阈值。结论 柴葛疏表颗粒具有较好的解热、抗炎及镇痛作用。

关键词: 柴葛疏表颗粒; 解热作用; 抗炎作用; 镇痛作用
中图分类号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:1004-0781(2016)02-0137-04 doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2016.02.007
Pharmacodynamic Study on Chaige Shubiao Granules
Yating YANG, Xiaojun LYU, Suwen ZHOU, Wangping PAN, Kaiyong HE
Hubei Institute for Food and Drug Control,Wuhan 430064,China
Abstract

Objective To study the antipyretic,anti-inflammatory and analgesic effects of Chaige Shubiao granules.Methods Animals were randomly divided into 6 groups:model control group,indomethacin group, Fengre Ganmao granules group and the high,the medium and the low dosage groups of Chaige Shubiao granules(26,13,6.5 g·kg-1).Each group was administered via intragastric administration once a day for 5 days.Rat model suffering from fever by dried yeast,relieving fever of Chaige Shubiao granules was investigated;Rats with toe swelling by 1% carrageenin and mice with ear swelling by dimethylbenzene were applied to observe anti-inflammatory effects of Chaige Shubiao granules were observed;The pain models induced by 0.6% acetic acid and the hot-plate tests in mice were used to observe the analgesic effects of Chaige Shubiao granules.Results Compared with model control group, Chaige Shubiao granules in high dosage could obviously decrease the temperature of rat with fever induced by dried yeast 0.5 h later,and the medium dosage group decreased 4-6 h later.Moreover, Chaige Shubiao granules in high dosage could inhibit inflammatory reaction of rat with toe swelling caused by albumen at 1 h,2 h,3 h,when the medium dosage group inhibited at 2 h,3 h,4 h.The inhibition ratio of the mice with ear swelling induced by dimethylbenzene was 58.2%,52.0% and 53.9%,respectively at the high,medium and low dose groups.And the inhibition ratio of retortion of mice by 0.6% acetic acid was 50.5%,68.8%,58.1%,respectively, at the high,medium and low dose groups.In addition,the high,medium and low dose groups reduced the pain reaction latency of mice in the hot-plate tests.Conclusion Chaige Shubiao granules have antipyretic,anti-inflammatory and analgesic actions.

Keyword: Chaige Shubiao granule; Antipyretic; Anti-inflammatory; Analgesic

柴葛疏表颗粒由柴胡、连翘、葛根、黄芩、桔梗、板蓝根、羌活等7味中药组成,柴胡、连翘为主药,辛凉解表,清热解毒,葛根解肌退热,黄芩清泄里热,板蓝根清热解毒消肿,桔梗利咽化痰,羌活解表邪,宣痹痛。柴葛疏表颗粒具有疏表清热,解肌止痛功效,临床上可用于风热感冒。笔者在本实验根据其组成,选用不同实验模型,分别进行解热、抗炎、镇痛实验,验证其解热、抗炎、镇痛作用。

1 材料与方法
1.1 实验动物

无特定病原体(SPF)级Wistar大鼠,体质量160~200 g,湖北省实验动物研究中心,实验动物生产许可证:SCXK(鄂)2008-0005。SPF级昆明小鼠,体质量18~22 g,由武汉生物制品研究所有限责任公司动物中心提供,实验动物生产许可证:SCXK (鄂)2008-0003。湖北省食品药品监督检验研究院实验动物使用合格证号:SYXK (鄂)2008-0009。饲养条件:昼夜明暗交替各12 h,室温20~26 ℃,相对湿度40%~70%,笼具及垫料定期清洗更换,饲料为全价纯鼠颗粒,饮水为纯化水。

1.2 药物和试剂

柴葛疏表颗粒干浸膏,批号:20130603,规格:每克浸膏相当于生药3.51 g,由武汉双龙药业有限公司提供。人拟临床最大用量为生药52 g·(60 kg)-1(相当于0.87 g·kg-1),前期工艺学筛选实验[1]表明按人临床使用量15倍设计时效果较好,故本次实验设定大、中、小剂量为临床用药的30,15,7.5倍(相当于生药26,13,6.5 g·kg-1),临用前用纯化水配制成浓度为0.74,0.37,0.185 g·mL-1(相当于生药2.6,1.3,0.65 g·mL-1)的溶液用于大鼠灌胃给药;配制成浓度为0.3,0.15,0.075 g·mL-1 (相当于生药1.05,0.53,0.26 g·mL-1)的溶液用于小鼠灌胃给药。吲哚美辛片,批号:1102071,规格:每片25 mg,临汾奇林药业有限公司生产,临用前研钵研细,用纯化水配制成0.938 mg·mL-1(大鼠)及0.375 mg·mL-1(小鼠)混悬液备用,相当于人临床用药的7.5倍。风热感冒颗粒,批号:130109,规格:每袋10 g,吉林长白山药业集团股份有限公司生产,临用前研钵研细,用纯化水配制成0.75 g·mL-1(大鼠)及0.3 g·mL-1(小鼠)溶液混悬液备用,相当于人临床用药的15倍。干酵母,批号:20110808,安琪酵母股份有限公司生产;角叉菜胶,批号:20100520,上海华蓝化学科技有限公司生产;二甲苯,批号:20120208,冰醋酸,批号:20121116,均由国药集团化学试剂有限公司生产。

1.3 仪器

ML303型电子分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司,感量:1 mg];MJ5102电子秤(余姚纪铭称重校验设备有限公司);DS-671型电子秤(上海寺冈电子有限公司)。XB8656电子体温计(英国新贝婴儿用品有限公司);足趾容积测定仪(自制);GJ-8402小鼠热板仪(山东医科院设备维修站)。

1.4 酵母致大鼠发热实验

参照文献[2,3]。取Wistar大鼠90只,雌雄各半,实验前测定体温,连续2次,选取体温差不超过0.3 ℃的大鼠供实验用。选取60只合格大鼠按体质量随机均分6组,每组10只,分别为模型对照组,吲哚美辛组,风热感冒颗粒组,柴葛疏表颗粒大剂量、中剂量、小剂量组。各组每天灌胃给药1次,连续5 d,给药体积为10 mL·kg-1,给药浓度按“1.2”项。模型对照组给予等体积纯化水,吲哚美辛组最后2 d给药,第5天给药后各组大鼠立即于背部皮下注射20%酵母悬液10 mL·kg-1,测定并记录0.5,1,2,4,6,8,10 h大鼠体温。

1.5 二甲苯致小鼠耳廓肿胀法

参照文献[4,5]。取昆明种小鼠72只,雌雄各半,按体质量随机分为6组,每组12只,分组及给药方法同“1.4”项。给药体积为25 mL·kg-1。模型对照组给予等体积纯化水,吲哚美辛组最后2 d给药,末次给药后1 h,将二甲苯 0.05 mL涂在各组小鼠右耳前后两面致炎,致炎后30 min将小鼠处死,用直径9 mm打孔器在小鼠左右相同部位打下耳片,用电子天平称定质量。记录左右耳片质量,计算肿胀度。肿胀度(mg)=右耳片质量-左耳片质量,耳廓肿胀抑制率(%)=(模型对照组耳廓肿胀度均值-给药组耳廓肿胀度均值)/ 模型对照组耳廓肿胀度均值×100%。

1.6 角叉菜胶致大鼠足趾肿胀法

参照文献[6,7]。取Wistar大鼠60只,雌雄各半,按体质量随机分为6组,每组10只,分组及给药方法同“1.4”项。第5天给药前先测定各大鼠正常足趾容积,给药30 min后各组大鼠右后肢足趾皮下注射1%角叉菜胶0.1 mL,随后每隔1 h测足趾容积,连续6次并记录造模后1,2,3,4,5,6 h肿胀度。

1.7 醋酸致小鼠扭体实验

参照文献[2,8]。取昆明小鼠72只,雌雄各半,按体质量随机分为6组,每组12只,分组及给药方法同“1.4”项。末次给药后1 h每只小鼠均腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL,注射后立即观察15 min内其扭体次数。抑制率(%)=(模型对照组扭体均值-给药组扭体均值)/模型对照组扭体均值×100%。

1.8 热板法

参照文献[2,8]。 取经挑选痛阈值在5~30 s内的小鼠72只,雌性,按体质量随机分为6组,每组12只,分组及给药方法同“1.4”项。各组给药前测其痛阈值作为基础痛阈值。末次给药后30,90,150 min分别测定小鼠痛阈值,如60 s无反应者,以痛阈值为60 s计。

1.9 统计学方法

采用SPSS15.0版统计软件分析数据,所有数据用均数±标准差( x¯ ±s)表示,统计方法采用ONE-WAY ANOVA,方差齐性采用Dunnett多重分析,方差不齐采用Dunnett's T3多重分析。以 P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 对酵母所致大鼠发热的影响

结果表明,柴葛疏表颗粒大剂量组在造模后0.5 h,便可较好抑制大鼠体温升高,时间持续至造模后6 h,柴葛疏表颗粒中剂量组在造模后4~6 h抑制体温的作用较好。与模型对照组比较,柴葛疏表颗粒大剂量、中剂量组差异均有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)。柴葛疏表颗粒小剂量在造模后4~8 h也有抑制作用,但差异无统计学意义( P>0.05)。结果见表1

表1 6组酵母所致发热大鼠不同时间的体温值 Tab.1 Body temperature of six groups of fever rats induced by dried yeast at different time points ℃, x¯ ±s, n=10
2.2 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

各组数据剔除反应最高值及最低值后计算 P值。结果表明,与模型对照组比较,柴葛疏表颗粒大剂量、中剂量组耳廓肿胀度明显降低,差异有统计学意义( P<0.01);吲哚美辛组、风热感冒颗粒组与模型对照组比较,差异有统计学意义( P<0.01),柴葛疏表颗粒小剂量组有一定抑制作用,但差异无统计学意义。结果见表2

表2 6组二甲苯致小鼠耳廓肿胀测定值 Tab.2 Determination on dimethylbenzene-induced ear swelling in six groups of mice x¯ ±s, n=10
2.3 对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响

结果见表3表3可见,柴葛疏表颗粒大剂量、中剂量组,吲哚美辛组,风热感冒颗粒组大鼠足趾肿胀度在不同时间点均低于模型对照组。柴葛疏表颗粒大剂量组在造模后1~3 h,柴葛疏表颗粒中剂量组在造模后2~4 h时,吲哚美辛组在造模后1~6 h,风热感冒颗粒组在造模后2~5 h,与模型对照组比较,差异均有统计学意义( P<0.05 或 P<0.01),柴葛疏表颗粒小剂量组差异无统计学意义。

表3 6组角叉菜胶致大鼠足趾肿胀测定值 Tab.3 Determination on carrageenin-induced toe swelling in six groups of rats mL, x¯ ±s, n=10
2.4 对醋酸致小鼠扭体的影响

各组剔除反应最高值及最低值后计算 P值。结果柴葛疏表颗粒大剂量、中剂量、小剂量组,吲哚美辛组、风热感冒颗粒组与模型对照组比较,均能减少小鼠扭体次数,差异有统计学意义( P<0.01)。结果见表4

表4 6组醋酸致小鼠扭体次数与扭体抑制率 Tab.4 Times and inhibitory ratio of acetic acid-induced twisting in six groups of mice x¯ ±s, n=10
2.5 对热板所致疼痛的影响

各组剔除反应最高值及最低值后计算 P值。结果见表5。由表5可见,柴葛疏表颗粒大剂量、中剂量、小剂量组及吲哚美辛组、风热感冒颗粒组与模型对照组比较,均可延长小鼠痛阈时间,差异有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)。

表5 6组小鼠对热板所致痛阈时间 Tab.5 Pain threshold of six groups of mice by hot-plate method min, x¯ ±s, n=10
3 讨论

笔者在本实验中根据柴葛疏表颗粒组成,选用不同实验模型,分别进行解热、抗炎及镇痛实验。结果表明,与模型对照组比较,本品解热、抗炎、镇痛效果均有统计学意义,柴葛疏表颗粒对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有显著抑制作用,且呈量效关系;角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验证明,柴葛疏表颗粒大剂量组在造模后1,2,3 h能明显抑制大鼠足趾肿胀度,柴葛疏表颗粒中剂量组在造模后2,3,4 h能较好抑制足趾肿胀度,说明本品有良好的抗炎作用;小鼠扭体实验及热板实验表明本品有良好的镇痛作用,与模型对照组比较,柴葛疏表颗粒大剂量、中剂量、小剂量组差异均有统计学意义;热板实验表明,柴葛疏表颗粒中剂量组在各时间点都有较好的镇痛作用,说明本品有良好的镇痛作用;大鼠解热实验中,柴葛疏表颗粒大剂量、中剂量、小剂量均有较好的降低体温的作用,大剂量柴葛疏表颗粒在0.5 h抑制体温上升,并持续>6 h,中剂量柴葛疏表颗粒在4~6 h可抑制体温升高,差异均有统计学意义。小剂量柴葛疏表颗粒在4~8 h也有抑制作用,但差异无统计学意义,可能与个体差异引起的误差较大有关。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 吕晓君, 杨雅婷, 周素文, . 不同工艺柴葛疏表颗粒主要药效学筛选[J]. 医药导报, 2014, 33(7): 885-886. [本文引用:1]
[2] 陈奇. 中药药理研究方法学[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2006: 294-297, 366-368. [本文引用:3]
[3] 郭晓颖, 马新焕. 防风感冒颗粒解热抗炎作用的药效学研究[J]. 西部中医药, 2014, 27(7): 16-19. [本文引用:1]
[4] 彭成. 中医药动物实验方法学[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2008: 975-982. [本文引用:1]
[5] 王晓, 杨艳平. 清瘟败毒合剂解热抗炎抗菌作用的实验研究[J]. 医药前沿, 2013, 5(13): 110-111. [本文引用:1]
[6] 魏伟, 吴希美, 李元建. 药理实验方法学[M]. 4版. 北京: 人民卫生出版社, 2010: 742-745. [本文引用:1]
[7] 杨超燕, 陈艳芬, 陶曙红, . 光叶娃儿藤解热抗炎作用实验研究[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(4): 274-276. [本文引用:1]
[8] 崔殿波, 李薇, 王莹, . 狭叶荨麻提取物抗炎镇痛药理作用研究[J]. 中医药学报, 2014, 42(4): 61-63. [本文引用:2]