VEDENG贝登L-861型旋涡混合器(南京贝登机电设备有限公司),SHHW.21-420恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器有限公司)。

注射用阿奇霉素磷酸二氢钠(样品):齐鲁制药有限公司,规格:每支0.25 g,批号:102024ck,111004ck,120224ck。鲎试剂(TAL):湛江博康海洋生物有限公司(批号:1103172),福州新北生化工业有限公司(批号:10040812),规格均为每支0.1 mL,灵敏度(λ)均为0.125 EU·mL^-1(经灵敏度复核均符合规定)。 细菌内毒素检查用水(bacterial endotoxin test water,BET):湛江博康海洋生物有限公司(批号:1112290,规格:每瓶50 mL)。细菌内毒素工作标准品:中国食品药品检定研究院(批号:150601-201072,规格:每支120 EU)。

根据药品说明书,本品的临床每日最大使用剂量为500 mg,静脉滴注在(60±10) min内完成,则M=500 mg/(60 kg·h) =8.3 mg·kg^-1·h^-1 。由于本品是静脉内给药,因此K为5 EU·kg^-1·h^-1,依据L=K/M,则L=5 EU·kg^-1·h^-1/8.3(mg·kg^-1·h^-1)=0.6 EU·mg^-1。C=25 mg·mL^-1,供试品最大有效释释倍数(maximum effective dilution ratio ,MVD)=CL/λ,采用灵敏度为0.50~0.03 EU·mL^-1鲎试剂,则注射用阿奇霉素磷酸二氢钠的最小有效稀释浓度(λ·L^-1)在0.83~0.05 mg·mL^-1之间,MVD在30~500倍之间。

取注射用阿奇霉素磷酸二氢钠样品0.25 g,加BET 10 mL,使其完全溶解后作为备用液即原液(稀释0倍),取此溶液用BET制成5,10,20,30,40,50倍稀释浓度的样品溶液,各取0.1 mL,分别加入鲎试剂(批号:1103172)0.1 mL,每一浓度平行做2次,作为供试品阴性对照溶液(negative control of the test solution,NPC);同时用各浓度样品溶液加入细菌内毒素工作标准品制成浓度2.0λ的溶液,各取0.1 mL,分别加入鲎试剂(批号:1103172)0.1 mL,每一浓度平行做2次,作为供试品阳性对照溶液(positive control of the test solution,PPC)。另取鲎试剂(批号:1103172)0.4 mL(4支),其中2支各加入BET 0.2 mL作为阴性对照(negative control,NC);2支各加入BET 0.1 mL和2.0λ细菌内毒素工作标准品溶液0.1 mL,作为阳性对照(positive control,PC),混匀,用封口膜封口,置(37±1) ℃水浴中60 min观察,结果见表1。

结果表明,将注射用阿奇霉素磷酸二氢钠(备用液)稀释20倍时,即浓度为1.25 mg·mL^-1时,对鲎试剂无干扰作用,可用作细菌内毒素检查。

取细菌内毒素工作标准品120 EU,加入BET 1 mL溶解,混匀后,用备用液稀释20倍的样品溶液和BET,分别将细菌内毒素工作标准品稀释成2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ(EU·mL^-1)的系列溶液,混合均匀;各取0.1 mL,分别加入鲎试剂0.1 mL,每一浓度平行做4管,共32管。另取鲎试剂0.4 mL(4支),2支加入BET 0.1 mL作为阴性对照,另2支加入样品稀释液0.1 mL作为样品阴性对照,混匀,用封口膜封口,置(37±1) ℃水浴中60 min,测试20倍实验浓度下对鲎试剂的干扰情况(如用BET或样品释释液制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值,即Es或Et)。结果见表2。

结果表明,当注射用阿奇霉素磷酸二氢钠(备用液)稀释20倍时,最大浓度2.0λ管均为阳性,最低浓度0.25λ管均为阴性,阴性对照管均为阴性。其Es=0.125 EU·mL^-1,Et=0.25 EU·mL^-1,且Es在2.0λ~0.5λ之间,Et在2.0Es~0.5Es之间,样品在该浓度下不干扰实验,可在该浓度下对此样品进行细菌内毒素检查。

取注射用阿奇霉素磷酸二氢钠(备用液)3批,用BET稀释成20倍溶液,按上述方法进行检查,结果3批样品均合格,见表3。