ARRB2基因在新疆哈萨克族患者食管癌中的表达及其与临床病理特征的关系

李晓苗¹^,, 刘伊宁¹, 来雯婷¹, 吉别克·瓦提别克¹, 美丽吾尔提·达吾列提汗¹, 沙亚哈提·别尔克哈之¹, 王海峰², 范志勤², 李卉³, 李惠武²^,

1.新疆医科大学基础医学院,乌鲁木齐 830000

2.新疆医科大学附属肿瘤医院,乌鲁木齐 830000

3. 新疆医科大学中心试验室,乌鲁木齐 830000

通信作者李惠武(1961-),男,山西人,教授,博士生导师,研究方向:肿瘤的早期诊断。E-mail:huiwuli1234@163.com。

作者简介李晓苗(1992-),女,新疆人,在读硕士,研究方向:食管癌的发病机制。E-mail:li7777@sina.cn。

基金资助: 国家自然科学基金资助项目(81350021)

中图分类号: R735.1 文献标识码: B 文章编号: 1004-0781(2016)08增-0046-02

摘要:

目的探讨新疆哈萨克族患者食管鳞状细胞癌中基因ARRB2 mRNA的表达情况及其与临床病理特征之间的关系。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测ARRB2基因在40例哈萨克族食管癌患者组织及其对应的远端无癌组织中的表达。结果 ARRB2基因在癌组织和远端无癌组织中的表达阳性率分别为62.5%,60.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。ARRB2的表达与组织分化、TNM分期有关(P<0.05)。T_内参/N_内参≤0.5阳性表达差异率为42.5%(17例),T_内参/N_内参≥2阳性表达差异率为25.0%(10例)。结论新疆哈萨克族食管癌患者肿瘤组织ARRB2阳性表达率与组织分化、TNM分期有关。

关键词: 癌 ; 食管 ; 癌 ; 鳞状细胞 ; ARRB2 ; 基因表达 ; 哈萨克族

Abstract:

ARRB2是ARR基因家族的成员之一,广泛表达于不同组织来源的细胞中。ARRB2最初作为G蛋白耦联受体(guanosine-binding protein coupled receptor,GPCR)信号抑制蛋白被发现,它的经典功能是介导GPCR的脱敏和内吞^[1]。近年来更多研究发现,ARRB2作为接头分子可以介导新的GPCR信号,参与一些非GPCR类跨膜受体的信号调控,例如Wnt通路,受体酪氨酸蛋白激酶IGF-1通路等的调节^[2-3],还参与GPCR和其他信号通路的对话,例NF-κB信号通路,从而参与其他信号通路的调节中。ARRB2通过干预Wnt信息传导通路在肠道肿瘤的发生发展的过程中起着非常重要的作用,通过诱导阻断腺瘤性结肠息肉(adenomatous polyposis coli,APC)突变,可提高Wnt通路的活性,从而识别早期肿瘤的异质性分子。本研究采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测40例新疆哈萨克族食管鳞癌患者的癌组织及其对应的远端无癌组织中ARRB2 基因mRNA的表达,分析该基因与新疆哈萨克族食管癌发生、发展的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2008-2009年在新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科手术切除食管鳞癌组织及其对应的远端无癌组织标本40份。40例患者均为新疆哈萨克族,男25例,女15例,年龄37~67岁。高分化19例,低分化6例,侵润深度T₁+T₂ 2例。T₃+T₄ 23例;有淋巴结转移15例;Ⅰ~Ⅱ_a7例, Ⅱ_b~Ⅲ 18例。经病理检查证实全部为鳞癌,所有病例术前未进行放疗、化疗。

1.2 主要试剂与仪器

RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司,反转录试剂盒购自Promega公司,PCR即用试剂盒购自上海生工生物工程公司,琼脂糖、溴化乙锭(EB)、三氯甲烷、异戊醇、无水乙醇、异丙醇由新疆医科大学基础医学院科研中心提供,PCR扩增仪iCycler型(Bio-Rad,美国),Gel Doc凝胶成像分析仪(Bio-Rad,美国)。

1.3 RT-PCR检测ARRB2基因的表达

标本取出后做好标记,立即放入-170 ℃液氮中保存。每100 mg组织加Trizol液1 mL,充分混匀,严格参照说明书操作。紫外-可见分光光度计测定总RNA浓度和纯度。所得总RNA用于反转录合成cDNA,取其为模板,加入引物,扩增目的基因片段,反应体系为20 μL。反应结束后,产物经2%琼脂糖凝胶电泳,紫外凝胶仪成像,将可见目的条带判断为ARRB2基因表达阳性,无目的条带判断为ARR基因表达阴性。扩增引物序列及条件见表1。

基因	引物序列(5'→ 3')	Tm/℃	扩增产物/bp
ARRB2	上游:CTTCAGCACCGCCCAGTA	60	228
	下游:ACCAGGATTCCCAGCACCG
APDH	上游:GGGAAACTGTGGCGTGAT	60	309
	下游:AAAGGTGGAGGAGTGGGT

表1 基因扩增引物序列

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0版统计软件进行分析,计数资料组间比较采用χ²检验或Fisher确切概率法,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ARRB2基因mRNA的表达

ARRB2基因在癌组织和远端无癌组织中的表达阳性率分别为62.5%(25/40),60.0%(24/40),其差异无统计学意义(χ²=0.053,P=0.818)。

2.2 不同临床病理特征ARRB2 mRNA表达比较

不同组织分化程度、TNM分期ARRB2 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),临床分期、有无淋巴结转移组织ARRB2 mRNA表达差异无统计学意义,见表2。

临床病理特征	例数	ARRB2	χ²	P
组织分化			4.235	0.04
高中分化	34	19
低分化	6	6
TNM分期			6	0.014
T₁+T₂	8	2
T₃+T₄	32	23
临床分期			0.615	0.443
Ⅰ~Ⅱ_a	13	7
Ⅱb~Ⅲ	27	18
淋巴结转移			0.00	1.00
有	24	15
无	16	10

表2 不同临床病理特征ARRB2 mRNA表达比较

2.3 ARRB2在癌组织和远端无癌组织之间的阳性表达差异率

ARRB2 在癌组织和远端无癌组织中,T_内参/N_内参≤0.5阳性表达差异率为42.5%(17例),T_内参/N_内参≥2阳性表达差异率为25.0%(10例)。

3 讨论

ARRB2是G蛋白耦联受体的调控蛋白,广泛存在于各种类型的细胞中^[4]。ARRB家族参与G蛋白耦联受体介导的脱敏调节,也可在细胞受刺激时抑制细胞神经递质、激素、感官信号的应答。ARRB2在神经中枢系统中呈现高表达,可能参与突触受体的调节。

孙慧伶等^[5]研究表明:实验性肝纤维化小鼠肝组织中ARRB2明显升高,且其升高水平与NF-κB的升高成直线相关,提示ARRB在小鼠肝纤维化中起到重要的作用, 且其作用途径可能与NF-κB 信号通路有关。ARRB2基因敲除小鼠会出现严重的胰岛素抵抗,而敲入ARRB2基因则能有效提高胰岛素敏感性,缓解胰岛素耐受^[6] 。JIANG等^[7]发现,ARRB2参与阿尔茨海默病的发生,探讨ARRB2变化及晚发性阿尔茨海默病(LOAD)的风险之间的关联,证明ARRB2的t核苷酸能够增加中国汉族患晚发性阿尔茨海默病的风险。研究发现,ARRB2mRNA在PBC患者C $\begin{matrix} D_{4}^{+} \end{matrix}$ T细胞、C $\begin{matrix} D_{8}^{+} \end{matrix}$ T细胞,与单核细胞中表达均明显低于健康对照者,而在PBC 患者B细胞中的表达却与健康对照者没有明显差异,表明ARRB2可能参与C $\begin{matrix} D_{4}^{+} \end{matrix}$ T细胞、C $\begin{matrix} D_{8}^{+} \end{matrix}$ T细胞或单核细胞的调控机制^[8]。GAFFAL等^[9]发现,ARRB2缺陷的角质细胞培养物能够分泌更高水平的中性粒细胞趋化因子,包括来源于体外体细胞的细胞因子CXCL1 / KC。ARRB2可抑制促炎症趋化因子,从而限制了骨髓免疫细胞的募集,从而减弱过敏性皮肤炎。另外,尹旭明等^[10]研究发现,在ARRB2 缺失的小鼠中可促进并增强中等和高等剂量下可卡因诱导的条件性位置偏爱,抑制可卡因诱导的自主活动性的增加,表明ARRB2 在奖赏行为的形成中起重要作用。 BONNANS等^[11]研究结果表明,ARRB2通过干预Wnt信号传导通路在肠道肿瘤的发生发展过程中起着非常重要的作用,通过诱导阻断APC突变,可提高Wnt通路的活性,识别早期肿瘤的异质性分子。这项研究具有临床意义,可在侵润性大肠癌的早期检测发挥其重要作用。

本研究共选择术前并未进行过放、化疗的40例哈萨克族食管鳞癌组织及其对应的远端无癌组织,检测ARRB2基因在这些标本中的表达情况,结果发现ARRB2基因的阳性表达率在哈萨克族食管癌患者中并无统计学意义。而哈萨克族食管癌患者肿瘤组织中ARRB2的阳性表达率与组织分化、TNM分期有关,表明它可能在哈萨克族食管癌的中晚期有意义。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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β-Arrestin acts as a clathrin adaptor in endocytosis of the β-adrenergic receptor

1996

... ARRB2是ARR基因家族的成员之一,广泛表达于不同组织来源的细胞中.ARRB2最初作为G蛋白耦联受体(guanosine-binding protein coupled receptor,GPCR)信号抑制蛋白被发现,它的经典功能是介导GPCR的脱敏和内吞^[1].近年来更多研究发现,ARRB2作为接头分子可以介导新的GPCR信号,参与一些非GPCR类跨膜受体的信号调控,例如Wnt通路,受体酪氨酸蛋白激酶IGF-1通路等的调节^[2-3],还参与GPCR和其他信号通路的对话,例NF-κB信号通路,从而参与其他信号通路的调节中.ARRB2通过干预Wnt信息传导通路在肠道肿瘤的发生发展的过程中起着非常重要的作用,通过诱导阻断腺瘤性结肠息肉(adenomatous polyposis coli,APC)突变,可提高Wnt通路的活性,从而识别早期肿瘤的异质性分子.本研究采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测40例新疆哈萨克族食管鳞癌患者的癌组织及其对应的远端无癌组织中ARRB2 基因mRNA的表达,分析该基因与新疆哈萨克族食管癌发生、发展的关系. ...

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