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医药导报, 2016, 35(增刊): 91-92
doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2016.z1.041
反相高效液相色谱法测定乳癖胶囊中阿魏酸的含量*
陈亚飞, 唐伟革, 苏永林, 虞晓兵, 龙四海

摘要:

目的 建立反相高效液相色谱(HPLC)法测定乳癖胶囊中阿魏酸含量。方法 色谱柱为Agilent HC-C18(2)(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-1%醋酸溶液(27:73),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为321 nm,进样体积20 μL。结果 阿魏酸的进样量在0.272 4~0.681 0 μg范围内与峰面积线性关系良好(r=1.000 0);平均回收率为100.30%,RSD=1.12%(n=6)。结论 该法简便、准确、灵敏、重复性好,可用于乳癖胶囊的质量控制。

关键词: 乳癖胶囊 ; 当归 ; 阿魏酸 ; 色谱法 ; 高效液相 ; 含量测定

Abstract:

乳癖胶囊系解放军第四十二医院传统配方,经过数十年的临床验证,疗效确切,一直沿用至今。其方由黄芪、当归、柴胡、香附等34味中药组成,具有理气活血、清热解毒、疏肝解郁、化痰散结之功效,主治乳腺增生、乳腺纤维瘤、乳腺纤维囊性病[1]。乳癖胶囊中的主药当归为伞形科植物当归[Angelica sinensis(Oliv.)Diels]的干燥根。收载于《中华人民共和国药典》2010年版一部[2]。具有补血、活血,调经止痛、润燥滑肠之功效。目前有关文献报道控制当归中阿魏酸含量的方法主要有高效液相色谱法,荧光法,毛细管电泳法等[3-5]。为有效控制乳癖胶囊的质量,笔者采用反相高效液相色谱法(HPLC)测定乳癖胶囊中主药当归的阿魏酸含量,为建立新的质量标准提供参考。

1 仪器与试药
1.1 仪器

安捷伦Agilent 1100高效液相色谱仪;KQ5200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸易有限公司);DK-S26恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司);BT25S电子分析天平(德国赛多利斯,感量:0.01 mg);BSA2245电子天平(德国赛多利斯,感量:0.1 mg)。

1.2 试药

乳癖胶囊[解放军第四十二医院药剂科制剂室自制,批准文号:成制字(2011)F11001,规格:每粒0.35 g];阿魏酸对照品(纯度:99.6%,中国食品药品检定研究院,批号:110773-201313);甲醇(Fisher Scientific,色谱纯);超纯水(自制),其他试剂为分析纯。

2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性实验

色谱柱:Agilent HC-C18(2)(4.6 mm×250 mm,5 μm) ,以甲醇-1%醋酸溶液(27:73)为流动相;流速为1 mL·min-1,柱温:室温,检测波长为321 nm,进样量:20 μL。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸对照品14.25 mg,置25 mL棕色量瓶中,加70%甲醇溶解稀释,定容摇匀后作为储备液。再精密量取储备液1 mL,置25 mL棕色量瓶中,加70%甲醇溶解稀释,定容摇匀制得每毫升含22.8 μg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品内容物约5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇20 mL,密塞,称定质量,加热回流30 min,放冷,再称定质量,用70%甲醇补足减失的质量,摇匀,静置,取上清液,滤过,取续滤液,用微孔滤膜(孔径0.45 μm)过滤,即得。

2.4 专属性实验

按处方比例,取除当归外药材,按规定工艺制备不含当归的阴性样品,按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。按上述色谱条件进样分析,供试品溶液在与阿魏酸对照品溶液相应保留时间处有相同色谱峰出现,且主峰与相邻色谱峰能完全分开,峰形良好,在与阿魏酸峰相应的位置上,阴性对照无干扰。由于实验条件所限,无柱温箱,供试品溶液和对照品溶液中阿魏酸峰的保留时间略有差别。见图1。

图1 阴性样品、对照品和供试品HPLC图 A.阴性样品;B.对照品;C.供试品;1.阿魏酸

2.5 精密度实验

精密吸取同一对照品溶液20 μL,按上述色谱条件连续重复进样5次,依法测定阿魏酸含量,RSD为1.60%(n=5),表明精密度良好。

2.6 稳定性实验

取供试品溶液,分别在0,0.5,2,5,8,12,24 h进样,测定峰面积RSD=1.40%,表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 线性范围的考察

取对照品溶液(22.8 μg·mL-1),通过系统自动进样器,分别进样12,16,20,25,30 μL,以对照品进样量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),进行线性回归,得回归方程Y=5686.2X-3.3076,r=1.000 0(n=5)。结果表明阿魏酸的进样量在0.272 4~0.681 0 μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.8 重复性实验

取同一批乳癖胶囊样品,按供试品制备方法平行处理6份样品,测定峰面积,以峰面积/称样量的比值计算RSD=0.48%(n=6),表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率

采用加样回收法,精密称取已知含量的供试品6份(阿魏酸含量为68.5921 μg·g-1),用100~1 000 μL移液枪精密加入阿魏酸储备液(567.72 μg·mL-1)320 μL,按“2.3”项方法制备供试品溶液,精密吸取20 μL,按色谱条件进样,测得平均回收率为100.30%,RSD=1.12%(n=6),表明本法回收率良好,测定结果见表1。

表1 阿魏酸加样回收率考察结果
称样量/
g
原含量 加入量 测得量 回收率/
%
mg
3.200 64 0.219 5 0.181 7 0.404 2 101.65
3.200 58 0.219 5 0.181 7 0.398 8 98.68
3.199 80 0.219 5 0.181 7 0.400 4 99.56
3.199 83 0.219 5 0.181 7 0.402 6 100.77
3.199 70 0.219 5 0.181 7 0.403 5 101.27
3.199 81 0.219 5 0.181 7 0.401 0 99.89

表1 阿魏酸加样回收率考察结果

2.10 含量测定

取供试品3批次,按“2.3”项制备供试品溶液,按上述色谱条件进样分析,记录峰面积,采用外标法计算阿魏酸的平均含量,结果批号为20150201,20150204,20150212样品,每粒含阿魏酸分别为24.039,24.017,23.958 μg,平均为24.005 μg。

3 讨论
3.1 提取溶剂的选择

选用70%甲醇、70%乙醇作为提取溶剂进行了比较,提取方法及含量测定方法相同,但70%甲醇作为提取溶剂测得含量较高,因此选择70%甲醇作为提取溶剂。

3.2 提取方法的选择

以70%甲醇作为提取溶剂,提取方法分别采用超声提取30 min,加热回流提取30,60 min;测定方法相同,加热回流提取30,60 min含量相当,且测得含量较超声提取30 min高,因此选择加热回流提取30 min作为提取方法。

3.3 流动相比例的选择

在阿魏酸测定的HPLC方法学考察中,选择的甲醇-1%醋酸溶液(27:73)流动相系统能使乳癖胶囊中当归的阿魏酸得到良好的分离,阴性无干扰。通过调整甲醇和1%醋酸溶液的比例(21:79,24:76,27:73),经比较发现,甲醇-1%醋酸溶液(27:73)作为流动相时供试品色谱分离最好,保留时间适宜。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

[1] 谭祖春,汪宗发. 乳癖丸治疗乳腺增生症60例疗效报告[J].中华现代医学与临床,2005,(7): 80.
[本文引用:1]
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:124.
[本文引用:1]
[3] 翟淮敏. 毛细管电泳法测定当归及其制剂中阿魏酸的含量[J].解放军药学学报,2004,20(2):103-105.
[本文引用:1]
[4] 王莹,罗红群,念兵. 荧光法测定当归中阿魏酸的含量[J].西南大学学报:自然科学版,2007,29(1):15-19.
[本文引用:0]
[5] 顾民,张亮. HPLC测定消遥散及当归中阿魏酸的含量[J].中成药,2000,22(5):342-344.
[本文引用:1]
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