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美国《化学文摘》《国际药学文摘》
《乌利希期刊指南》
WHO《西太平洋地区医学索引》来源期刊
日本科学技术振兴机构数据库（JST）
第七届湖北十大名刊提名奖
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, 杜光
目的 建立复方金沙利胆颗粒中芍药苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱(HPLC)法对芍药苷进行定量研究;色谱柱条件为Welch Utimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为:乙腈-纯水(17:83);流速:1.0 mL·min-1;检测波长230 nm;柱温:室温(20 ℃);进样量:20 μL。结果 芍药苷在浓度3.92~98 μg·mL-1范围内呈现良好的线性关系(
复方金沙利胆颗粒处方来源于武汉市黄陂区人民医院临床应用30余年的中医治疗胆囊炎及胆囊结石的有效经验方,疗效显著,原剂型为煎剂。由金钱草、茵陈、白芍、黄芩、柴胡、枳壳、大黄等14味中药组成,由于原剂型存在服用量大、味苦及患者顺应性较差等问题,为方便用药和提高药物稳定性,在原有剂型的基础上对其进行改进,精制成现代复方颗粒剂,本课题从制备工艺、质量控制、急性毒性实验和主要药效学实验方面进行研究。该组方中金钱草、茵陈具有清热疏肝、利胆排石的功效。白芍理气止痛,枳壳理气和中,柴胡能疏肝清热,黄芩燥湿清热、抗菌消炎,佐以大黄可增加利湿消黄、通里攻下,起到清热消炎、利胆排石的作用。其中白芍为君药,芍药苷为其主要指标成分,白芍性凉,味苦酸,微寒,具有补血柔肝、平肝止痛、清热利尿、补脾止泻作用[1]。在心血管系统,可以通过上调葡萄糖调控蛋白来对抗缺血应激损伤[2],此外,白芍提取物还可抗幽门螺杆菌和溃疡[3]。综上所述,白芍在多个系统和领域中具有重要作用。笔者在本实验中采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)对处方中主要成分芍药苷进行含量测定和方法学考察,以确保产品的质量稳定可控,为该课题的制备工艺、质量标准、药效学等研究奠定基础。
美国Waters高效液相色谱仪、486UV检测仪。Welch Utimate XB-C18色谱柱。BL-610电子天平(德国赛多利斯公司),DHG-9071A电热鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司),L04-2型低速离心机(北京医用离心机厂),DK-S26电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司),SK250LHC超声波清洗仪(上海科导超声仪器)。
处方中中药饮片均购自华中科技大学同济医学院附属同济医院中药房(均附有质量合格报告单),并按照《中华人民共和国药典》(2010年版)一部进行检验,结果符合标准。芍药苷标准品(中国食品药品检定研究院,含量:96.5%,批号:110376-201337);黄芩苷标准品(中国食品药品检定研究院,含量:95.2%,批号:110715-201117);复方金沙利胆颗粒(由华中科技大学附属同济医院药学部药理实验室自制,批号:20131206,20131207,20131208),乙腈、甲醇(默克公司)为色谱纯,水为纯化水;其他试剂均为分析纯。
色谱柱为Welch Utimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相:乙腈-水(17:83);流速:1.0 mL·min-1;柱温:室温(20 ℃);检测波长230 nm;进样量:20 μL。
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在60 ℃减压干燥4 h的芍药苷对照品19.6 mg,置100 mL量瓶中,加入流动相适量,超声(功率300 W,频率40 kHz)30 min,加入流动相至刻度,摇匀,得浓度为0.196 mg· mL-1的贮备液。精密量取芍药苷贮备液2 mL,流动相稀释定容至10 mL量瓶中,摇匀,得浓度为39.2 μg﹒ mL-1芍药苷对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10 g,研细,精密称取0.5 g至10 mL量瓶中,加流动相定容,摇匀,超声(功率300 W,频率40 kHz)30 min,放冷至室温,取1 mL至离心管,离心(3 000 r·min-1)5 min,取上清液,过孔径0.45 μm微孔滤膜,取续滤液,即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方量称取不含白芍的其他13味药材,按本品制备工艺制备成颗粒剂样品,按“2.2.2”方法制备阴性对照溶液。
分别量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL,按照上述色谱条件进行测定,结果表明阴性样品对芍药苷测定无干扰,该方法专属性良好。色谱图见
芍药苷标准曲线绘制:分别精密吸取芍药苷对照品贮备液(196 μg·mL-1) 0.2,0.5,1.0,2.0,5.0 mL至10 mL量瓶中,加流动相至刻度,定容。摇匀备用,即得一系列不同浓度的对照品溶液。分别吸取各浓度对照品溶液适量,进样20 μL,按上述色谱条件测定,以芍药苷对照品的浓度(μg· mL-1)为横坐标(
精密吸取“2.2.1”项对照品溶液(19.6 μg·mL-1)20 μL,重复进样5次,连续测定,其峰面积RSD为0.78%,结果表明该方法精密度良好。
精密称取供试品5份(批号:20131207),按照上述“2.2.2”项下供试品溶液制备方法配制成供试品溶液,按上述色谱条件测定芍药苷含量,其RSD为0.93%,结果表明该方法重复性良好。
精密吸取“2.2.2”项下供试品溶液(批号:20131207)20 μL,分别在0,2,4,8,24 h按上述色谱条件进行测定,测得的峰面积RSD为1.98%,结果表明样品在24 h内稳定性良好。
精密称取已知含量的复方金沙利胆颗粒细粉(批号:20131206)6份,每份0.5 g,精密称定,置10 mL量瓶中,分别精密加入浓度为196 μg· mL-1的芍药苷对照品溶液2 mL,加流动相定容,摇匀,超声(功率300 W,频率40 kHz)30 min,放冷至室温,取1 mL至离心管,离心(3 000 r·min-1)5 min,取上清液过孔径0.45 μm微孔滤膜,取续滤液按上述色谱条件测定含量并计算回收率,结果见
表1
芍药苷加样回收实验考察结果
精密吸取3批供试品溶液,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定。结果批号为20131206,20131207,20131208的样品,含量分别为0.915 5,0.873 9,0.893 7 mg·g-1,平均含量0.894 3 mg·g-1,RSD=2.32%。考虑到药物的来源、生产、贮藏等原因,将含量下浮20%,暂定本颗粒芍药苷含量不得少于0.7 mg·g-1。
白芍中主要有效成分芍药苷具备独特的药理作用,为了获得安全、有效、稳定的药物,本实验根据文献报道测定白芍中芍药苷含量的方法液相色谱法 [4],将芍药苷作为该产品内在质量的控制指标,并参考相关文献[5-8],釆用高效液相色谱法对复方金沙利胆颗粒中的芍药苷进行含量测定。本实验通过筛选色谱条件,分别考察了不同厂家的色谱柱型号和流动相比例,结果不同型号的色谱柱对实验检测结果影响不大,故选用乙腈-水(17:83)作为流动相[9],芍药苷与其他组分分离完全;各峰分离效果较好且峰型对称性好;中药复方制剂,药味多成分较复杂,干扰较大,某一成分不易测定。本实验采用高效液相色谱法对处方中白芍主要有效成分芍药苷进行含量测定,并进行方法学考察的质量控制,具有一定的代表性[10-11 ] 。在样品处理过程中,分别对提取方法、提取溶媒、提取时间进行了考察。在芍药苷提取过程中,以流动相为提取溶媒,提取时间考察5,10,15,20,25,30 min,分别以静置、超声、温浸作为提取方法进行考察,结果发现采用超声提取30 min时,效果较好。方法学研究表明,本实验高效液相测定方法定量分析方法简便、重复性好、回收率高,可作为本品中芍药苷的含量测定方法,能有效地控制该产品内在质量,保证制剂质量稳定可控。
The authors have declared that no competing interests exist.
