川芎嗪对胶原性关节炎大鼠血清炎性因子与关节滑膜组织的影响<sup>*</sup>

引用本文

芦琨, 蒋建平, 郭辉, 李宜川. 川芎嗪对胶原性关节炎大鼠血清炎性因子与关节滑膜组织的影响^* [J]. 医药导报, 2016,35(2): 144-148
Kun LU, Jianping JIANG, Hui GUO, et al. Effect of Tetramethylpyrazine on Inflammatory Cytokines in Serum and Joint Synovial Tissues in Rats with Collagen-induced Arthritis[J]. HERALD OF MEDICINE,2016,35(2): 144-148 复制到剪切板

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《医药导报》编辑部

川芎嗪对胶原性关节炎大鼠血清炎性因子与关节滑膜组织的影响^*

芦琨, 蒋建平, 郭辉, 李宜川

商丘医学高等专科学校生物化学与分子生物学教研室,商丘 476100

作者简介: 芦琨(1984-),女,满族,河南商丘人,讲师,硕士,主要从事生物化学方面的研究。电话:(0)15937022900,E-mail:lukun198410208@163.com。

收稿日期: 2015-09-16 修回日期: 2015-11-15

基金: ^*河南省商丘市2013年科技发展计划项目(20135006);

摘要

目的观察川芎嗪(TMP)对胶原性关节炎(CIA)大鼠血清白细胞介素(IL)-8、IL-12、IL-33水平和关节滑膜组织基质金属蛋白酶10(MMP-10)、核因子κB(NF-κB)的影响,探讨其对类风湿关节炎可能的治疗机制。方法将大鼠随机分为正常对照组( n=10)、模型对照组、地塞米松组、川芎嗪小剂量组和川芎嗪大剂量组,每组9只。除正常对照组外,其他组采用Ⅱ型胶原诱导CIA大鼠模型。地塞米松组肌内注射地塞米松2 mg·kg^-1,川芎嗪小剂量组和大剂量组分别给予川芎嗪50,100 mg·kg^-1。采用足趾容积、关节炎指数评价关节炎症;酶联免疫吸附法测定各组血清IL-8、IL-12、IL-33的水平;Western-blot检测关节滑膜组织MMP-10、NF-κB的表达。结果与模型对照组比较,川芎嗪大剂量组和地塞米松组大鼠足爪肿胀度和关节炎指数明显下降,大鼠血清IL-8、IL-12、IL-33水平和关节滑膜组织MMP-10、NF-κB的表达显著降低,差异有统计学意义( P<0.01)。川芎嗪小剂量组除对足爪肿胀度和血清IL-8、IL-33水平明显抑制外,其他指标差异无统计学意义( P>0.05)。结论大剂量川芎嗪对大鼠CIA有明显的抑制作用,其机制可能是通过平衡促炎细胞因子和抗炎细胞因子的效应,改善大鼠免疫功能障碍,降低关节滑膜炎症,减轻关节软骨的破坏,从而发挥治疗作用。

关键词: 川芎嗪; 关节炎; 胶原性; 细胞因子; 基质金属蛋白酶10; 白细胞介素

中图分类号:R965.5 文献标志码:A 文章编号:1004-0781(2016)02-0144-05 doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2016.02.009

Effect of Tetramethylpyrazine on Inflammatory Cytokines in Serum and Joint Synovial Tissues in Rats with Collagen-induced Arthritis

Kun LU, Jianping JIANG, Hui GUO, Yichuan LI

Department of Biochemistry and Molecular Biology,Shangqiu Medical College,Shangqiu 476100,China

Abstract

Objective To observe the effect of tetramethylpyrazine (TMP) on serum interleukin 8 (IL-8),interleukin 12 (IL-12) and interleukin 33 (IL-33) levels and MMP-10 and NF-κB protein expression in joint synovial tissues in rats with collagen-induced arthritis (CIA),and further to investigate the mechanism for treating rheumatoid arthritis.Methods Rats were randomly divided into normal control group( n=10),model control group,dexamethasone group,low-dose of TMP and high-dose of TMP groups ( n=9 each).The CIA model was established in all the groups except for the normal control group.Rats of dexamethasone group were given 2 mg·kg^-1 of dexamethasone;Rats of low-dose and high-dose of TMP group were given 50,100 mg·kg^-1 of TMP, respectively.The toe volume and arthritis index (AI) were used to evaluate joint inflammation.The levels of IL-8,IL-12 and IL-33 in the serum of rats were detected by ELISA.The expression levels of MMP-10 and NF-κB in joint synovial were detected by Western blotting.Results Compared with model control group,the toe volume and AI were significantly reduced in high-dose of TMP groups and dexamethasone groups,and levels of IL-8,IL-12 and IL-33 and the expression levels of MMP-10 and NF-κB were decreased significantly ( P<0.01).TMP (50 mg·kg^-1) could obviously decrease the toe volume and the levels of IL-8 and IL-33.There was no statistical difference in other indices ( P>0.05).Conclusion TMP at 100 mg·kg^-1 showed obvious inhibition on CIA rats.The mechanism may be correlated to balancing the effect of proinflammatory factor and anti-inflammatory cytokines,improving immune function in rats,reducing joint synovial inflammation,and alleviating the destruction of the articular cartilage.

Keyword: Tetramethylpyrazine; Arthritis; collagen-induced; Cytokines; Matrix metalloproteinase 10; Interleukin

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类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA )是一种以对称性多关节炎为主要临床表现的系统性自身免疫性疾病,其基本病理改变为关节滑膜炎症、滑膜细胞增生、炎症细胞大量浸润、血管翳形成、软骨及骨组织破坏等,最终导致关节破坏和功能障碍^[1,2]。目前,对于RA的治疗,传统的西药不能根治,主要起到改善症状、缓解病情,并伴有严重的胃肠道、肝肾功能损害等不良反应^[3]。川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)是中药川芎的有效成分之一,有抗肿瘤血管生成、抑制血管内皮细胞的增殖、抗血小板聚集和抗炎等作用,目前已广泛应用于临床,取得突出的疗效^[4]。笔者在本实验成功建立大鼠胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型的基础上,观察川芎嗪对胶原性关节炎大鼠的治疗作用,探索其可能机制,为临床上治疗RA提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康Sprague-Dawley(SD)大鼠50只,鼠龄3个月,雌雄各半,体质量(180±20) g,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,实验动物生产许可证号:SCXK(鄂)2010-0009。实验动物使用许可证号:SYXK(鄂)2010-0057,大鼠分笼饲养,自由摄食和饮水,环境温度22~24 ℃,相对湿度40%~60%。

1.2 试药

磷酸川芎嗪片(无锡市第七制药厂生产,规格:每片50 mg,批号:030201);地塞米松盐酸注射液(河南确山龙渊药业有限公司,批号:10063001,规格:5 mg·mL^-1);弗氏完全佐剂、鸡Ⅱ型胶原(上海本草生物医学工程所提供);多聚赖氨酸(美国Sigma公司,批号:ISP8920);冰醋酸(广州化学试剂二厂);白细胞介素(IL)-8、IL-12和IL-33试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;基质金属蛋白酶10(matrix metalloproteinase 10,MMP-10)小鼠单克隆抗体免疫组化试剂盒、核因子(NF-κB)小鼠单克隆抗体免疫组化试剂盒(北京中山公司),辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的兔抗鼠二抗、细胞裂解液均为碧云天生物技术研究所产品。

1.3 仪器

80-2离心机(上海手术器械厂);大鼠足容积测量仪(自制);METILER AE240型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器公司,感量:0.1 mg);A200-12G高速分散均质匀浆机(南京比朗仪器有限公司);DYY-7C 型电泳仪(北京六一仪器厂);紫外-可见分光光度计(日本岛津);凝胶成像分析系统(美国 GE Healthcare 公司)。

1.4 动物分组、模型制备与给药方法

1.4.1 CIA大鼠模型的制备将50只SD大鼠随机分为正常对照组10只和CIA模型制作组40只。模型的具体制作方法参照文献^[5]。将鸡Ⅱ型胶原15 mg溶于预先配制好的0.1 mol·L^-1醋酸7.5 mL中,使鸡Ⅱ型胶原浓度为2 mg·mL^-1,于4 ℃过夜充分溶解。次日,与弗氏完全佐剂等体积于冰浴中混合,并使之充分乳化,制成稳定的乳化剂(Ⅱ型胶原含量为1 mg·mL^-1,置4 ℃冰箱保存备用)。在大鼠的左后肢足跖皮下注射0.1 mL致炎,第7天在大鼠尾、背多点皮下注射该胶原乳剂0.1 mL作为激发注射。正常对照组在同一部位同样方法注射0.9%氯化钠溶液0.1 mL。造模后,发现36只大鼠左足红肿明显,体积增大,说明造模成功,成功率为90.0%。

1.4.2 分组及给药将造模成功36只大鼠随机分为模型对照组、地塞米松组、川芎嗪小剂量组及川芎嗪大剂量组,每组9只。川芎嗪溶液于实验前新鲜配制,将川芎嗪500 mg溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS,pH值7.4)50 mL中,配制成10 mg·mL^-1。川芎嗪小剂量组和大剂量组大鼠于实验第7~35天,分别灌胃给予川芎嗪 50和100 mg·kg^-1,每天用药1次;地塞米松组肌内注射地塞米松2 mg·kg^-1,每天1次;正常对照组和模型对照组静脉注射0.9%氯化钠溶液2 mL·kg^-1,每天1次。

1.5 实验方法

1.5.1 一般情况观察及足爪肿胀度和关节炎指数的测定观察各组大鼠饮食、皮毛光泽、活动情况、踝趾关节及体质量的变化;用足容积测定仪分别于给药前及给药后第7,14,18,22,26,30天测量各组大鼠左足爪肿胀度;从致炎后第7天起,每隔4 d,采用关节评分法,得出关节炎指数(arthritis index,AI),参照文献[6],具体判断标准为:肢体关节肿胀按0~4级评分。无红肿,0分;趾关节稍肿,1分;小趾关节及足趾肿胀,2分;踝关节以下足爪肿胀,3分;包括踝关节在内的全部足爪肿胀,4分。每只大鼠的AI值=四肢关节肿胀级评分之和。

1.5.2 血清细胞因子测定实验第36天所有实验大鼠腹腔注射3%巴比妥钠0.3~0.4 mL麻醉。剪开大鼠腹腔,10 mL注射器心脏取血,室温静置1 h,3 000 r·min^-1离心15 min,吸取上层血清。用放射分析法(按试剂盒说明进行操作)测定大鼠血清IL-8、IL-12和 IL-33的含量。

1.5.3 Western-blot检测关节滑膜组织MMP-10、NF-κB的表达剥离大鼠双侧后膝关节滑膜组织,低温匀浆处理后,加入蛋白裂解液,冰浴40 min,置于离心机中12 000 r·min^-1离心5 min( r=12 cm),取上清液测蛋白浓度。取蛋白样品20 μg,与6×loading buffer混合后煮沸5 min,离心取上清液进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE),电转移1 h至硝酸纤维素薄膜,用脱脂奶粉4 ℃封闭过夜,然后加入一抗,37 ℃孵育2 h,阴性对照用不含抗体的PBST液孵育。反复洗膜后,加入HRP标记的二抗,37 ℃孵育1 h,洗膜后,用滤纸将膜吸干,采用图像分析仪测定各带吸光度( A)值做定量分析。

1.6 统计学方法

所得数据采用SPSS11.6版统计软件进行分析,全部数据均以均数±标准差( $\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}$ ±s)表示,进行单因素方差分析。方差齐时,各组间两两比较采用LSD- t检验;方差不齐时,各组间两两比较采用Tamhance's T2检验。以 P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠一般情况及足爪肿胀度的比较

大鼠致炎以后,与正常对照组比较,模型对照组大鼠逐步出现关节红肿,足垫增厚,特别是在2周后,关节肿胀程度不断加重,进食量逐渐减少,体质量增长缓慢,有的甚至下降。大鼠皮毛黯淡无光,个别出现脱毛现象,活动量明显减少。与模型对照组比较,前2周川芎嗪小剂量组差异无统计学意义,第14天开始,川芎嗪大剂量组和地塞米松组足爪肿胀度明显减轻,差异有统计学意义,见表1。

表1 5组大鼠足爪肿胀度比较 Tab.1 Comparison of toe swellling among five groups of rats mL,

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

组别	大鼠数	剂量/ (mg·kg^-1)	第7天	第14天	第18天	第22天	第26天	第30天
正常对照组	10	-	0.121±0.043	0.128±0.052	0.136±0.029	0.138±0.051	0.140±0.047	0.141±0.038
模型对照组	9	-	0.153±0.033	0.199±0.022^*1	0.235±0.046^*1	0.291±0.071^*1	0.362±0.058^*1	0.398±0.088^*1
地塞米松组	9	2	0.172±0.041	0.168±0.027^*2	0.181±0.034^*2	0.193±0.068^*2	0.212±0.074^*2	0.229±0.072^*2
川芎嗪
小剂量组	9	50	0.174±0.039	0.166±0.037	0.199±0.064^*2	0.203±0.087^*2	0.219±0.067^*2	0.237±0.068^*2
大剂量组	9	100	0.173±0.046	0.157±0.072^*2	0.179±0.046^*2	0.187±0.071^*2	0.201±0.038^*2	0.218±0.084^*2
F			2.234	85.315	404.842	457.328	589.201	854.245
P			>0.05	<0.01	<0.01	<0.01	<0.01	<0.01

Compared with normal control group,^*1 P <0.01;Compared with model control group,^*2 P <0.01

与正常对照组比较,^*1 P<0.01;与模型对照组比较,^*2 P<0.01

表1 5组大鼠足爪肿胀度比较 Tab.1 Comparison of toe swellling among five groups of rats mL,

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

2.2 各组大鼠多发AI的比较

结果见表2所示,与正常对照组比较,模型对照组大鼠致炎后第14天起,AI明显升高,差异有统计学意义;与模型对照组比较,从第18天开始,川芎嗪大剂量组和地塞米松组AI显著下降,足爪肿胀症状明显减轻,而川芎嗪小剂量组差异无统计学意义( P>0.05)。

表2 5组大鼠多发性关节炎指数比较 Tab.2 Comparison of AI among five groups of rats 分,

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

组别	大鼠数	剂量/ (mg·kg^-1)	第7天	第14天	第18天	第22天	第26天	第30天
正常对照组	10	-	0.00±0.00	0.00±0.00	0.00±0.00	0.00±0.00	0.00±0.00	0.00±0.00
模型对照组	9	-	0.22±0.15	3.50±0.52^*1	6.17±0.71^*1	6.95±0.71^*1	6.15±0.58^*1	5.24±0.78^*1
地塞米松组	9	2	0.21±0.12	3.45±0.27	4.87±0.39^*2	5.68±0.56^*2	4.77±0.32^*2	3.45±0.61^*2
川芎嗪
小剂量组	9	50	0.21±0.16	3.51±0.18	5.98±0.41	6.68±0.37	5.97±0.24	4.91±0.55
大剂量组	9	100	0.21±0.20	3.30±0.25	4.35±0.45^*2	5.55±0.66^*2	4.37±0.12^*2	3.49±0.58^*2
F			2.234	725.315	604.842	657.328	789.201	790.245
P			>0.05	<0.01	<0.01	<0.01	<0.01	<0.01

Compared with normal control group,^*1 P<0.01;Compared with model control group,^*2 P<0.01

与正常对照组比较,^*1 P<0.01;与模型对照组比较,^*2 P<0.01

表2 5组大鼠多发性关节炎指数比较 Tab.2 Comparison of AI among five groups of rats 分,

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

2.3 各组大鼠血清IL-8、IL-12和IL-33水平比较

与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清IL-8、IL-12和IL-33水平均明显增高( P<0.01);与模型对照组比较,川芎嗪小剂量组、川芎嗪大剂量组和地塞米松组治疗后大鼠血清IL-8和IL-33水平均明显降低( P<0.01),川芎嗪大剂量组和地塞米松组IL-12水平均显著降低( P<0.01),而川芎嗪小剂量组IL-12水平与模型对照组比较差异无统计学意义。见表3。

表3 5组大鼠血清IL-8、IL-12和IL-33水平比较 Tab.3 Comparison of the serum levels of IL-8, IL-12 and IL-33 among five groups of rats ng·mL^-1,

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

组别	大鼠数	剂量/ (mg·kg^-1)	IL-8	IL-12	IL-33
正常对照组	10	-	1.58±0.23	1.59±0.33	1.24±0.23
模型对照组	9	-	1.87±0.18^*1	1.97±0.51^*1	1.77±0.51^*1
地塞米松组	9	2	1.63±0.22^*2	1.69±0.47^*2	1.35±0.39^*2
川芎嗪
小剂量组	9	50	1.64±0.36^*2	1.89±0.28	1.27±0.46^*2
大剂量组	9	100	1.63±0.27^*2	1.71±0.35^*2	1.09±0.37^*2
F			14.429	12.974	49.508
P			<0.01	<0.01	<0.01

Compared with normal control group,^*1 P <0.01;Compared with model control group,^*2 P <0.01

与正常对照组比较,^*1 P<0.01;与模型对照组比较,^*2 P<0.01

表3 5组大鼠血清IL-8、IL-12和IL-33水平比较 Tab.3 Comparison of the serum levels of IL-8, IL-12 and IL-33 among five groups of rats ng·mL^-1,

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

2.4 各组大鼠关节滑膜组织MMP-10、NF-κB灰度值比较

免疫蛋白印迹的结果分析显示(表4),与正常对照组比较,模型对照组大鼠的MMP-10、NF-κB的灰度值明显升高( P<0.01),说明模型对照组大鼠关节滑膜组织的MMP-10、NF-κB蛋白呈高表达;与模型对照组比较,川芎嗪大剂量组与地塞米松组治疗后,大鼠关节滑膜组织的MMP-10、NF-κB蛋白表达均显著降低,而川芎嗪小剂量组蛋白表达基本无变化。

表4 5组大鼠关节滑膜组织MMP-10、NF-κB灰度值比较 Tab.4 Comparison of gray value of MMP-10 and NF-κB in articular synovial tissue among five groups of rats

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

组别	大鼠数	剂量/ (mg·kg^-1)	MMP-10	NF-κB
正常对照组	10	-	5.38±1.28	4.80±1.24
模型对照组	9	-	21.86±3.18^*1	7.37±1.58^*1
地塞米松组	9	2	8.62±1.55^*2	5.79±1.43^*2
川芎嗪
小剂量组	9	50	19.36±2.76	7.12±1.28
大剂量组	9	100	8.38±1.57^*2	5.81±1.33^*2
F			4 321.016	89.246
P			<0.01	<0.01

Compared with normal control group,^*1 P <0.01;Compared with model control group,^*2 P <0.01

与正常对照组比较,^*1 P<0.01;与模型对照组比较,^*2 P<0.01

表4 5组大鼠关节滑膜组织MMP-10、NF-κB灰度值比较 Tab.4 Comparison of gray value of MMP-10 and NF-κB in articular synovial tissue among five groups of rats

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

3 讨论

本实验采用Ⅱ型胶原诱导CIA大鼠模型,其各项特征与人类RA非常接近,因此是筛选和研究治疗RA药物的理想模型^[7]。在本研究过程中,模型对照组大鼠逐渐出现食欲下降、体质量减少、精神倦怠、活动减少等现象;给予50 mg·kg^-1川芎嗪治疗后,CIA大鼠的一般情况并无明显减轻;而川芎嗪100 mg·kg^-1能明显提高CIA大鼠的食欲,抑制大鼠消瘦,增加大鼠的活动量,改善CIA大鼠的精神状况,降低AI,表明川芎嗪100 mg·kg^-1对CIA大鼠有一定的治疗效果。川芎嗪属于中药川芎的有效成分,具有活血化瘀、抑制血小板凝聚、抗炎等作用,是现代中西医治疗RA的常用药,但其作用机制尚不十分明确^[8]。

RA是一种以关节炎为主要表现的病因不明的自身免疫性疾病,越来越多的研究证实细胞因子在RA的发病过程中发挥着重要作用^[9]。IL-8是一种白细胞趋化因子,有趋化中性粒细胞至炎症局部的生物学效应,并可通过表达黏附因子、产生氧自由基、释放溶酶体酶等来增强其他中性粒细胞的功能。对于RA患者来说,IL-8通过招募中性粒细胞至急性炎症滑膜部位并增加该细胞的活性而增强其破坏作用^[10]。IL-12是由T、B淋巴细胞和单核巨噬细胞产生的炎症因子,促进T淋巴细胞产生IFN-γ,抑制IL-10、IL-11等抑炎因子的产生,另外,IL-12还可直接促进B淋巴细胞增生、分化和分泌自身抗体,诱导自身免疫性疾病发生^[11]。IL-33 作为新发现的IL-1家族中的一个细胞因子,能够通过直接激活肥大细胞分泌依次引起关节炎症的促炎细胞因子;IL-33 也能刺激胶原上的 CD₄T 细胞产生能增强 B 细胞活化的 IL-5 和 IL-13,导致 IgG的产量增加^[12]。这些抗体进一步通过引发肥大细胞脱颗粒和与胶原形成免疫复物而加重关节炎症。因此,IL-8、IL-12、IL-33这些细胞因子的高水平分泌,在免疫和炎症反应中具有复杂的放大效应,介导免疫损伤。NF-κB是参与炎症细胞因子表达的主要转录因子之一,其调节炎症反应、促进滑膜细胞增生、参与关节结构重建,在RA的发病过程中起到关键调控作用^[13]。MMP-10 属于基质金属蛋白酶中的基质溶解酶类,可以降解包括胶原质Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、层黏连蛋白-1等蛋白质,而这些成分也是关节软骨的重要组成成分,从而使关节软骨肿胀,最终破坏关节正常结构^[14]。本实验也证实,CIA 大鼠关节滑膜组织MMP-10 明显增多,关节骨破坏显著,从而表明MMP-10 的表达水平与疾病的发展呈正相关。

综上所述,100 mg·kg^-1川芎嗪能下调CIA大鼠血清中过高的IL-8、IL-12、IL-33水平,降低关节滑膜组织中MMP-10、NF-κB的表达,提示川芎嗪治疗CIA大鼠的机制可能是通过平衡促炎细胞因子和抗炎细胞因子的效应,改善大鼠免疫功能障碍,降低关节滑膜炎症,减轻关节软骨的破坏,从而发挥治疗作用。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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[10]	余建明, 刘喜德, 曲丕盛, 等. 祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达的影响[J]. 中国中西医结合杂志, 2013, 33(1): 105-108. [本文引用:1]
[11]	YAZICI Y, PAGET S A. Elderly onset rheumatoid arthritis[J]. Rheum Clin Dis North Am, 2000, 26(3): 517-526. [本文引用:1]
[12]	HO L H, OHNO T, OBOKI K, et al. IL -33 induces IL-13 production by mouse mast cells independently of IgE Fcepsilon RI signals[J]. J Leukoc Biol, 2007, 82(6): 1481-1490. [本文引用:1]
[13]	王燕燕, 崔向军, 韩莉. 青蒿琥酯对佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜的NF-κB、bcl-2表达的影响[J]. 中国医院药学杂志, 2005, 25(11): 1003-1005. [本文引用:1]
[14]	文军, 荣晓凤. 复方大黄散对类风湿关节炎大鼠MMP-10IL-33 的影响[J]. 免疫学杂志, 2015, 31(1): 41-46. [本文引用:1]

2013

0.0

吕新亮, 闫美凤, 姜楠, 等. 痹痛康丸对胶原性关节炎大鼠IL-1β、IL-6的影响[J]. 现代中西医结合杂志, 2013, 22(31): 3247-3249.

摘　要：目的观察痹痛康丸对胶原性关节炎（CIA）大鼠踝关节滑膜白细胞介素1 β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）的影响,探讨其治疗作用机制.方法建立Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂诱导的大鼠CIA模型,60只Wistar大鼠随机分为痹痛康丸低、中、高剂量组和甲氨蝶呤片组,将药物溶解于2 mL生理盐水中灌胃,1次/d,连续给药4周.空白对照组及模型组灌服生理盐水2 mL/只.8周后处死大鼠,观察右踝关节滑膜病理改变情况及关节滑膜中IL-1β、IL-6蛋白表达量.结果各用药组除痹痛康丸低剂量组外,滑膜组织的病理改变均有不同程度的减轻,IL-1β、IL-6蛋白的表达量较模型组降低.结论痹痛康丸能有效降低CIA大鼠滑膜炎程度,防止骨破坏或关节重构,有免疫调节作用.

... 类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA )是一种以对称性多关节炎为主要临床表现的系统性自身免疫性疾病,其基本病理改变为关节滑膜炎症、滑膜细胞增生、炎症细胞大量浸润、血管翳形成、软骨及骨组织破坏等,最终导致关节破坏和功能障碍 ^{[ 1, 2]} ...

2015

0.0

张洪长, 刘明昕, 张莹, 等. 青藤碱对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 MyD88、TRAF-6 表达的影响[J]. 中国免疫学杂志, 2015, 31(4): 485-489.

目的:探讨青藤碱 (Sinomenine,SIN)对TLR信号转导通路及髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor88,My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor necrosis factor receptor associated factor-6,TRAF-6)表达的影响,阐明SIN抑制类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)增生导致RA软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形的作用机制。方法:体外培养RA-FLS细胞,分为对照组与 (0.125、0.25、0.5、1 mmol/L)SIN组,通过检测各组细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测0.5 mmol/L SIN组的细胞增殖率;荧光定量PCR法测定对照组与0.5 mmol/L SIN组My D88和TRAF-6基因表达;Western blot法检测对照组与0.5 mmol/L SIN组My D88和TRAF-6蛋白表达。结果:SIN各组ALP活性均低于对照组,其中以0.5 mmol/L SIN组的ALP活性为最低(P0.01)。CCK-8法检测,0.5 mmol/L SIN组RA-FLS细胞增殖率明显低于对照组(P0.01),SIN诱导第4天细胞增殖率最高,进入平台期,之后细胞的增殖率开始下降。荧光定量PCR 和Western blot法检测,0.5 mmol/L SIN组的My D88和TRAF-6基因及蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:SIN通过对TLR信号转导通路的影响有效地抑制RA- FLS细胞内My D88和TRAF-6的表达,这可能是其治疗RA防止软骨和软骨下骨破坏造成关节畸形发生的重要分子机制之一。

2014

0.0

顾夙, 徐守宇. 白花蛇舌草对胶原诱导性关节炎大鼠的保护作用[J]. 中国生化药物杂志, 2014, 34(9): 64-67.

目的探讨白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.,HD)对胶原诱导性关节炎大鼠(collagen-induced arthritis,CIA)的保护作用.方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(n=10)和给药组(n=50),给药组用于建立Wistar大鼠CIA模型,造模成功后再随机分为模型组, 雷公藤组,白花蛇舌草低、中、高剂量组,每组各9只并给予相应药物处理.自造模后第14天开始,每周观察各给药组的关节炎指数,于第42天处死大鼠检测各组血清的IL-1β、TNF-α水平,对比各组大鼠滑膜组织膜联蛋白Ⅰ的表达情况.结果 HD低剂量组在第35天及42天时,关节炎指数均显著低于模型组(P＜0.05);HD高剂量组在第28、35及42天时,关节炎指数显著低于模型组 (P＜0.05);HD各剂量组、IL-1β、TNF-α水平均显著低于模型组,差异具有统计学意义(均P＜0.05);HD各剂量组膜联蛋白Ⅰ的表达量显著高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HD可降低细胞炎症因子IL-1β、TNF-α的水平,缓解胶原诱导性关节炎大鼠的炎症反应及骨质侵蚀,提示HD对胶原诱导性关节炎大鼠关节具有保护作用.

... 目前,对于RA的治疗,传统的西药不能根治,主要起到改善症状、缓解病情,并伴有严重的胃肠道、肝肾功能损害等不良反应 ^{[ 3]} ...

2004

0.0

... 川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)是中药川芎的有效成分之一,有抗肿瘤血管生成、抑制血管内皮细胞的增殖、抗血小板聚集和抗炎等作用,目前已广泛应用于临床,取得突出的疗效 ^{[ 4]} ...

2013

0.0

姚瑶, 葛卫红. 来氟米特活性代谢物teriflunomide联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响[J]. 医药导报, 2013, 32(7): 839-842.

目的观察来氟米特活性代谢物teriflunomide联合甲氨蝶呤对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及其破骨细胞分化因子表达的影响.方法滑膜组织分离培养滑膜成纤维细胞,加入不同浓度药液,使得终浓度分别为0.1,0.01,0.001 mg·mL-1 teriflunomide,0.1,0.01,0.001 mg·mL-1甲氨蝶呤,0.1 mg·mL-1 teriflunomide+0.1 mg·mL-1甲氨蝶呤,0.01 mg·mL-1 teriflunomide+0.01 mg·mL-1甲氨蝶呤,0.001 mg·mL-1 teriflunomide+0.001 mg·mL-1甲氨蝶呤,每组重复3个复孔,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞增殖的影响;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测药物对滑膜成纤维细胞核因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体、骨保护素mRNA表达水平的影响.结果与对照组比较,药物处理后滑膜成纤维细胞的吸光度(A)值均有所降低,与单独用药组比较,0.1 mg·mL-1 teriflunomide联合0.1 mg·mL-1甲氨蝶呤组A值降低最为显著(P＜0.05),且该处理组骨保护素mRNA表达升高,NF-κB受体活化因子配体 mRNA表达降低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论来氟米特活性代谢物teriflunomide与甲氨蝶呤联合能够协同抑制滑膜成纤维细胞增殖,调节骨破坏相关基因表达,这可能是来氟米特与甲氨蝶呤联用治疗类风湿性关节炎的机制之一.

... 模型的具体制作方法参照文献 ^{[ 5]} ...

2013

0.0

梁秀军, 孙同友, 董文娟, 等. 穿山龙总皂苷对胶原性关节炎大鼠炎性细胞因子的影响[J]. 时珍国医国药, 2013, 24(3): 522-524.

目的观察穿山龙总皂苷 (total saponin from Rhizoma Dioscorea nipponica,TSRDN)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清中炎性细胞因子的影响,初步探讨穿山龙总皂苷治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)可能的作用机制。方法建立CIA大鼠模型。于初次免疫后第14天,将造模成功的大鼠随机分为CIA模型组,穿山龙总皂苷高、中、低剂量组,雷公藤组。其中穿山龙总皂苷高、中、低剂量组分别经胃灌服100 mg.kg-1.d-1,50 mg.kg-1.d-1、25 mg.kg-1.d-1剂量的穿山龙总皂苷,雷公藤组灌服12 mg.kg-1.d-1剂量的雷公藤多苷,正常对照组、CIA模型组灌服等体积溶媒。用药后21 d,记录各组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数;测定血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平;观察关节滑膜病理变化。结果经穿山龙总皂苷灌胃治疗 21 d后,与模型组相比,治疗组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数有降低趋势(P0.05),大鼠滑膜增生减轻,炎细胞浸润减少,软骨及骨组织侵蚀破坏减轻,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低(P0.01)。结论穿山龙总皂苷能明显降低CIA大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6 水平,减轻滑膜组织的病理损伤,表明其对治疗类风湿关节炎有一定作用。

2007

0.0

朱蕾, 魏伟. 白芍总苷对大鼠胶原性关节炎及其免疫功能的影响[J]. 中国药学杂志, 2007, 42(20): 1547-1551.

OBJECTIVE To investigate the effects of total glucosides of paeony(TGP) on immune functions in rats with collagen-induced arthritis(CIA).METHODS Chicken typeⅡcollagen(CⅡ)was used to induce CIA in rats.The severity of arthritis was scored with arthritic index(AI).The level of anti-CⅡIgG antibody in serum was examined by ELISA.T and B lymphocytes proliferation was determined by 3-(4,5-2dimethylthiazal-2yl) 2,5-diphenyltetrazoliumbromide(MTT) assay.And the activities of interlikin-1(IL-1) and IL-2 were measured by the mouse lymphocytes proliferation assay.RESULTS The onset of polyarthritis appeared on d 14 after immunization.The administration of TGP inhibited the AI of CIA rats,restored their body weights,and reduced the level of anti-CⅡIgG antibody in serum.Moreover,the increased T or B lymphocytes proliferation,and the promoted production of IL-1 and IL-2 in CIA rats were suppressed by TGP in vivo and in vitro.CONCLUSION TGP has therapeutic effects on CIA rats,and its mechanisms may be associated with its ability to ameliorate the abnormal immunological functions and cytokine secretion in CIA rats.

目的研究白芍总苷(TGP)对大鼠胶原性关节炎(CIA)及其免疫功能的影响。方法采用鸡Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,关节评分法检测关节炎发生情况,ELSIA法检测大鼠血清中抗CⅡ抗体的水平,MTT法检测T细胞和B细胞增殖反应,IL-1、IL-2活性的测定采用小鼠淋巴细胞增殖法。结果大鼠于致炎后第14天开始出现多发性关节炎症状,体重减轻,血清中抗CⅡ抗体水平升高,TGPig给药,连续14d,能够明显抑制CIA大鼠的AI,促进大鼠体重的恢复,降低血清中抗CⅡ抗体水平。进一步研究表明,TGP体内、外给药均能抑制CIA大鼠增高的T、B淋巴细胞增殖反应,还能显著降低刀豆蛋白A(ConA)诱导的CIA大鼠脾淋巴细胞产生IL-2的能力以及脂多糖(LPS)诱导的腹腔巨噬细胞产生IL-1的能力。结论TGP对CIA大鼠具有治疗作用,其机制可能与其调节CIA大鼠异常的免疫功能,平衡细胞因子的产生有关。

... 3 讨论本实验采用Ⅱ型胶原诱导CIA大鼠模型,其各项特征与人类RA非常接近,因此是筛选和研究治疗RA药物的理想模型 ^{[ 7]} ...

2007

0.0

吕宏斌, 徐大启, 胡建中, 等. 川芎嗪关节腔内注射治疗兔骨关节炎模型的研究[J]. 中国医师杂志, 2007, 9(9): 1163-1165.

目的观察川芎嗪注射液对兔骨关节炎模型的治疗作用.方法 12只新西兰兔,利用Hulth法建立兔膝关节的骨关节炎模型.术后4周膝关节腔内给药.依照注射药物不同将24只膝关节分为A组(川芎嗪组),B组(透明质酸钠组),C组(生理盐水组).注药4周后,处死动物,采用组织学方法和透射电镜技术观察膝关节软骨组织的退变情况.结果川芎嗪组和透明质酸钠组膝关节骨关节炎的病变程度明显轻于生理盐水组(P＜0.05);川芎嗪组和透明质酸钠组骨关节炎的病变程度差异无统计学意义(P＞0.05).结论川芎嗪能明显减轻兔骨关节炎的病变程度.

... 川芎嗪属于中药川芎的有效成分,具有活血化瘀、抑制血小板凝聚、抗炎等作用,是现代中西医治疗RA的常用药,但其作用机制尚不十分明确 ^{[ 8]} ...

1995

0.0

... RA是一种以关节炎为主要表现的病因不明的自身免疫性疾病,越来越多的研究证实细胞因子在RA的发病过程中发挥着重要作用 ^{[ 9]} ...

2013

0.0

余建明, 刘喜德, 曲丕盛, 等. 祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达的影响[J]. 中国中西医结合杂志, 2013, 33(1): 105-108.

目的研究中药祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis，CIA）大鼠滑膜白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白介素-8（interleukin-8，IL-8）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响，探讨祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制。方法选用健康雄性Wistar大鼠，随机分为造模组（50只）及正常对照组（正常组，10只），造模组采用牛Ⅱ型胶原（type Ⅱ collagen of bovine，BCⅡ）乳剂于大鼠尾根部及颈背部多点注射，建立CIA模型。造模成功后，选取30只造模成功大鼠随机分为模型组（10只）、甲氨喋呤（methotrexate，MTX）组（10只）、祛痹镇痛方组（中药组，10只）。中药组大鼠按22.9 g/kg剂量灌胃中药祛痹镇痛方，正常组、模型组灌胃等量生理盐水，每日1次，MTX组按0. 78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液，每周1次。给药30天后，运用免疫组化法检测大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平，并予给药前后进行关节炎指数（arthritis index，AI）评分。结果与模型组及本组治疗前比较，治疗后中药组和MTX组大鼠AI评分明显降低P<0.01。与正常组比较，模型组大鼠滑膜IL-1β、 IL-8、VEGF表达水平明显升高（P<0. 01）；与模型组比较，中药组和MTX组大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达水平明显降低P<0.01，中药组和MTX组组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论降低CIA大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平可能是中药祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制之一。

... 对于RA患者来说,IL-8通过招募中性粒细胞至急性炎症滑膜部位并增加该细胞的活性而增强其破坏作用 ^{[ 10]} ...

2000

0.0

... IL-12是由T、B淋巴细胞和单核巨噬细胞产生的炎症因子,促进T淋巴细胞产生IFN-γ,抑制IL-10、IL-11等抑炎因子的产生,另外,IL-12还可直接促进B淋巴细胞增生、分化和分泌自身抗体,诱导自身免疫性疾病发生 ^{[ 11]} ...

2007

0.0

... IL-33 也能刺激胶原上的 CD ₄T 细胞产生能增强 B 细胞活化的 IL-5 和 IL-13,导致 IgG的产量增加 ^{[ 12]} ...

2005

0.0

王燕燕, 崔向军, 韩莉. 青蒿琥酯对佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜的NF-κB、bcl-2表达的影响[J]. 中国医院药学杂志, 2005, 25(11): 1003-1005.

目的:观察青蒿琥酯对佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜的病理形态和滑膜细胞的NF-κB、bcl-2表达的影响.方法:42只♂性Wistar大鼠随机分为5组,空白组(8只)、模型对照组(8只)、青蒿琥酯工组(8只,40 mg·kg-1)、青蒿琥酯Ⅱ组(8只,20 mg·kg-1)、青蒿琥酯加甲氨蝶呤组(10只,青蒿琥酯20 mg·kg-1、甲氨蝶呤每3 d 0.5 mg·kg-1).采用大鼠右后足跖皮内注射完全性福氏佐剂0.1 mL,致炎形成佐剂性关节炎(AA)模型,于造模12 d后开始给药.给药12 d后处死动物,组织切片HE染色观察大鼠踝关节滑膜的组织形态学变化,免疫组化ABC法检测滑膜组织中核转录因子NF-κB、凋亡相关蛋白bcl-2的蛋白表达水平.结果:青蒿琥酯能明显减轻滑膜细胞的增生,减少滑膜层和滑膜下层淋巴细胞浸润.青蒿琥酯Ⅰ组、青蒿琥酯Ⅱ组及青蒿琥酯加甲氨蝶呤组关节滑膜细胞的bcl-2和NF-κB表达明显低于模型组,差异有显著性(P＜0.05).结论:青蒿琥酯可显著改善佐剂性关节炎大鼠的滑膜病变,降低滑膜细胞的bcl-2和NF-κB的蛋白表达.

... NF-κB是参与炎症细胞因子表达的主要转录因子之一,其调节炎症反应、促进滑膜细胞增生、参与关节结构重建,在RA的发病过程中起到关键调控作用 ^{[ 13]} ...

2015

0.0

文军, 荣晓凤. 复方大黄散对类风湿关节炎大鼠MMP-10IL-33 的影响[J]. 免疫学杂志, 2015, 31(1): 41-46.

摘　要：目的观察中药复方大黄散（CRP）外敷对类风湿关节炎（RA）大鼠的治疗作用及对MMP-10及IL-33的影响,探讨复方大黄散治疗RA的潜在机制。方法将72只大鼠分成正常组、模型组、扶他林组、甲氨蝶呤组、复方大黄散组、联合组（复方大黄散＋甲氨蝶呤组）,除正常组外,以完全弗氏佐剂（CFA）诱导大鼠RA模型,造模第8天后,各治疗组分别给药。用跖围法测量大鼠足跖肿胀度;治疗6周后,光镜下观察各组大鼠右踝关节滑膜病理学形态变化。Western blot检测大鼠软骨中MMP-10及IL-33的蛋白表达水平;RT-PCR法测定软骨中IL-33、MMP-10的m RNA表达水平。结果模型组大鼠右后足关节红肿明显,伴活动量减少及跛行,软骨中MMP-10及IL-33水平均明显升高（P〈0.05）,各用药组足跖肿胀较模型组显著减轻（P〈0.05）,复方大黄散组与扶他林组、甲氨蝶呤组之间无明显差异（P〉0.05）,联合组大鼠较其它组减轻最明显（P〈0.05）。治疗6周后,与模型组比较,各用药组软骨蛋白表达及m RNA的表达含量MMP-10、IL-33水平均显著下降（P〈0.05）。光镜下观察各用药组大鼠关节组织中炎症细胞浸润减少,血管翳生成减少,关节腔间隙增宽,关节软骨破坏减轻。结论复方大黄散外敷能明显减轻RA大鼠关节肿胀,作用与扶他林、甲氨蝶呤相当,联合甲氨蝶呤疗效更佳,其机制可能与调控MMP-10、IL-33等细胞因子相关。

... MMP-10 属于基质金属蛋白酶中的基质溶解酶类,可以降解包括胶原质Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、层黏连蛋白-1等蛋白质,而这些成分也是关节软骨的重要组成成分,从而使关节软骨肿胀,最终破坏关节正常结构 ^{[ 14]} ...