不同炮制去心法对巴戟天多糖含量的影响(Ⅰ)

狄士文¹^,, 周灿¹^,, 廖莎², 陈娥¹

1.湖北医药学院附属人民医院药学部,十堰 442000

2.湖北医药学院附属太和医院中西医结合风湿病科,十堰 442000

DI Shiwen¹^,, ZHOU Can¹^,, LIAO Sha², CHEN E¹

1.Department of Pharmacy,Renmin Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China

2.Department of Combine Traditional Chinese and Western Medicine Rheumatology,Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China

通信作者周灿(1985-),男,湖南长沙人,药师,硕士,研究方向:中药炮制理论与饮片质量标准的研究。电话:0719-8637260,E-mail:327412800@qq.com。

作者简介狄士文(1971-),男,湖北十堰人,主管药师,研究方向:中药炮制理论与饮片质量标准的研究。电话:0719-8637256,E-mail:1017591406@qq.com。

基金资助: 十堰市科学技术研究与开发项目计划(十科发[2013]20号)

中图分类号: R282 文献标识码: B 文章编号: 1004-0781(2017)12-1386-05

摘要:

目的比较不同炮制去心方法对巴戟天多糖含量的影响。方法 80%乙醇回流提取,改进的硫酸-苯酚法处理后采用紫外分光光度法测定多糖含量。结果巴戟天经不同炮制去心法处理后,煮法多糖含量(4.001±0.004)%最高,盐蒸法含量(2.312±0.006)%次之,其他依次为润法(2.163±0.010)%、泡后蒸发(1.910±0.008)%、泡法(1.731±0.008)%、清蒸法(1.123±0.013)%。结论巴戟天煮法去心炮制品中多糖含量最高。

关键词: 巴戟天 ; 炮制 ; 多糖 ; 苯酚-硫酸法 ; 分光光度法 ; 紫外

Abstract:

Objective To compare the influence of different processing methods on polysaccharide content in Morinda Officinalis. Methods Reflux extraction was performed with 80% ethanol.Ultraviolet spectrophotometery was used to determine the polysaccharide content after Phenol-sulferic acid method. Results Morinda officinalis was treated with different processing methods to remove moody core.The polysaccharide content in Morinda officinalis was the highest by cooking method (4.001±0.004)%,and the next was steaming method with salt (2.312±0.006)%,the sequence of the others was moistening method (2.163±0.010)%,steaming method after soaking (1.910±0.008)%,soaking method (1.731±0.008)% and steaming method (1.123±0.013)%. Conclusion The highest polysaccharide content is obtained in Morinda officinalis when processed by cooking method for removing woody core.

Key words: ; Processing ; Polysaccharide ; Phenol-sulferic acid method ; Spectrophotometery ; ultraviolet

巴戟天为茜草科植物Morinda officinalis How.的干燥根,味甘、辛,性微温,归肝、肾经,具有补肾助阳、祛风湿、强筋骨之功效,临床常用于阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨萎软等症,《神农本草经》将其列为上品^[1]。现代药理研究表明,巴戟天中的多糖成分具有抗氧化^[2]、防治骨质疏松^[3-6]等作用,与中医所认为的“强筋骨”作用是相对应的。根据文献记载^[7],巴戟天的炮制去心方法主要有润法、煮法、泡后蒸法、泡法、清蒸法和盐蒸法等6种,且实验研究表明巴戟天经不同炮制去心方法去心后,其有效成分含量发生变化^[8-11]。笔者在前人实验的基础上,比较研究各不同炮制去心法对巴戟天多糖含量的影响。

1 仪器与试药

1.1 仪器

TU1901紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);600Y多功能粉碎机(永康市石柱铂欧五金厂);CP2104奥豪斯电子分析天平[奥豪斯仪器(上海)有限公司,感量:0.01 mg];DK-S22型电热恒温水浴锅(上海精密实验设备有限公司)TW-1A型旋片式真空泵(温岭市挺威真空设备有限公司);DHG-101型电热恒温鼓风干燥器(巩义市英峪予华仪器);JZ20Y.1-E-2型迅达旋流燃气灶(湖南迅达集团有限公司)。

1.2 试药

D-无水葡萄糖(中国食品药品检定研究院,供含量测定用,批号:119849-201505);巴戟天(购于湖北蕲州中药材市场,经湖北医药学院陈吉炎教授鉴定为茜草科植物Morinda officinalis How.的干燥根);甘草(购于十堰市人民医院门诊中药房);95%乙醇(AR,武汉中天化工有限责任公司,批号:20130421);苯酚(AR,广东西陇化工厂,批号:010305-2);水为自制纯化水(批号:20140415);精制碘盐(湖北盐业集团有限公司,批号:20130729)。

2 方法与结果

2.1 炮制品的制备

2.1.1 清蒸法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,照蒸法(《中华人民共和国药典》2015年版通则0213)蒸透,趁热除去木心,切段,干燥^[12]。

2.1.2 润法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,润透后去木心,切断,干燥^[13]。

2.1.3 泡后蒸法取原药材约100 g,除去杂质,用清水洗净,再浸泡至三四成透,捞出,至笼屉内,加热蒸透,趁热除去木心,切断,干燥^[14]。

2.1.4 泡法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,用热水泡透,抽去心,切断,干燥^[15]。

2.1.5 盐蒸法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,照盐蒸法(《中华人民共和国药典》2015年版通则0213)蒸透,趁热除去木心,切断,干燥^[12]。

2.1.6 煮法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,备用。取甘草,捣碎,加水煎汤,去渣,加入净巴戟天拌匀,照煮法(通则0213)煮透,趁热除去木心,切断,干燥^[12]。(每100 kg巴戟天,用甘草6 kg)

2.2 多糖含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备取经105 ℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖约10 mg,精密称定,置50 mL量瓶中,加水溶解并定容至刻度,摇匀,配成0.200 1 mg·mL^-1的溶液,备用^[16-17]。

2.2.2 线性关系考察精密吸取“2.2.1”项下对照品过溶液1.0,3.0,5.0,7.0,9.0 mL,分别置于100 mL量瓶中,加水定容至刻度,摇匀。分别吸取上述溶液1.0 mL置具塞试管中,加入6%苯酚溶液1.0 mL,再垂直快速加入浓硫酸5.0 mL,摇匀,静置5 min后于沸水浴上加热15 min,取出流水速冷至室温;另以1 mL双蒸水同上平行操作,作为空白对照,于490 nm波长处测定吸光度。以吸光度对葡萄糖溶液的浓度进行线性回归,得回归方程为:Y=54.725X-0.013(r=1),结果显示,葡萄糖浓度在0.002~0.018 mg·mL^-1呈良好的线性关系。

2.2.3 样品溶液的制备分别取“2.1”项下各样品粉末(过筛,筛孔内径0.300 mm)0.2 g,各3份,精密称定后置具塞圆底烧瓶中,加入80%乙醇150 mL并于90 ℃水浴回流提取1 h,滤过,滤液待用,滤渣分别用80%热乙醇洗涤3次(每次10 mL)后连同滤纸再加150 mL纯化水90 ℃水浴回流提取1 h,滤过,滤渣分别用热纯化水洗涤4次,每次10 mL;合并滤液,转入500 mL量瓶中,加水稀释定容至刻度,摇匀,即得。

2.2.4 精密度实验精密吸取对照品溶液1 mL,照“2.2.2”项下同法操作连续测定吸光度5次,结果吸光度RSD为0.74%(n=5),表明仪器精密度良好。

2.2.5 重复性实验取清蒸法样品粉末(过筛,筛孔内径0.300 mm)5份,各约0.2 g,精密称定,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,照“2.2.2”项下同法操作测定吸光度,结果吸光度RSD为0.89%(n=5),表明本法重复性良好。

2.2.6 稳定性实验精密吸取同一样品溶液(清蒸法),室温放置,分别于0,1,2,3,4,5,6,7 h照“2.2.2”项下同法操作测定吸光度,结果吸光度RSD为0.60%(n=5),表明稳定性良好。

2.2.7 加样回收率实验取同一批已知含量的样品粉末(清蒸法;过筛,筛孔内径0.300 mm)6份各约0.2 g,精密称定,按“2.2.3”项下制备样品溶液,分别精密加入相当于样品中葡萄糖含量80%,100%和120%的葡萄糖对照品溶液,照“2.2.2”项下方法操作测定吸光度,计算回收率。结果显示平均回收率为99.90%,RSD=0.12%,说明回收率较高,符合实验要求。见表1。

取样量/ g	原有量	加入量	测得量			回收率/ %
0.201	2.257	1.805	4.061	99.94
0.200	2.246	1.797	4.043	100.00
0.202	2.269	2.269	4.536	99.91
0.202	2.268	2.268	4.536	100.00
0.201	2.257	2.708	4.957	99.70
0.203	2.280	2.736	5.011	99.82

表1 葡萄糖加样回收率实验结果

Tab.1 Results of recovery test on glucose

2.2.8 样品含量测定分别取“2.2.3”项下各样品溶液1 mL,照“2.2.2”项下方法测定吸光度,同时做空白实验,按照公式(C×D×f)/W×100%计算多糖含量(%),其中C为待测液体中以葡萄糖计所得浓度(mg·mL^-1),D为多糖稀释因素,f为换算因子,W为多糖重量。取3次测定结果平均值作为各样品多糖含量测定结果。见表2。

2.2.9 样品质量分析对“2.1”项下各样品进行质量考察,分别测定水分含量、总灰分含量、酸不溶性灰分含量及浸出物含量。结果显示,各样品水分含量最高为11.7%,最低为7.74%;总灰分含量最高为5.52%,最低为2.79%;酸不溶性灰分含量最高为0.784%,最低为0.462 5;浸出物含量最高为73.58%,最低为72.20%;采用成组设计资料的t检验经SPSS18.0版统计分析,各样品组间水分含量、总灰分含量、酸不溶性灰分含量及浸出物含量的差异无统计学意义(t=2.848,2.961,5.465,4.332,P>0.05),说明各样品质量均符合2015年版《中华人民共和国药典》(一部)标准,同时具有均一性,因此不影响多糖含量测定。

表2 多糖样品含量测定结果
Tab.2 Determination results of polysaccharide content

样品与编号	样品质量/ g	测得量/ mg	多糖含量
样品与编号	样品质量/ g	测得量/ mg	%
清蒸法
1	0.200	2.261	1.130
2	0.201	2.280	1.134	1.123±0.013	1.4
3	0.203	2.243	1.105
润法
1	0.201	4.317	2.148
2	0.200	4.344	2.172	2.163±0.010	0.59
3	0.200	4.335	2.168
泡后蒸法
1	0.202	3.869	1.915
2	0.201	3.851	1.916	1.910±0.008	0.53
3	0.202	3.833	1.898
泡法
1	0.200	3.486	1.743
2	0.203	3.504	1.726	1.731±0.008	0.58
3	0.201	3.467	1.725
盐蒸法
1	0.200	4.609	2.304
2	0.201	4.655	2.316	2.312±0.006	0.30
3	0.203	4.701	2.316
煮法
1	0.201	8.054	4.007
2	0.200	7.999	4.000	4.001±0.004	0.14
3	0.202	8.072	3.996

表2 多糖样品含量测定结果

Tab.2 Determination results of polysaccharide content

2.2.10 测定结果分析本实验在文献[8]的基础上,以多糖含量为考察指标,总结和比较了巴戟天现代加工去心方法,是从真正意义上的工艺角度进行的实验研究,考虑更全面,数据和结果更具科学性和指导性。文献[8]侧重于炮制方法,且均为《中华人民共和国药典》收载方法,其结果为:巴戟天不同炮制去心方法的巴戟天及木心中多糖含量高低依次为制巴戟天>巴戟天肉>盐巴戟天>巴戟天木心;而本实验侧重于炮制去心工艺,巴戟天采用不同工艺方法去心后,其多糖含量高低依次为煮法>盐蒸法>润法>泡后蒸法>泡法>清蒸法,采用成组设计资料的t检验经SPSS18.0版统计软件分析,各样品组间多糖含量的差异有统计学意义(t=10.240,P=0.000)。两结果对比分析,不论炮制方法比较还是炮制去心工艺比较,制巴戟天和煮法多糖含量均最高;但炮制方法比较时巴戟天肉比盐巴戟天多糖含量高,而相对应的炮制去心工艺比较则是清蒸法比盐蒸法多糖含量小,相互矛盾,因此有待进一步的实验比较研究。

3 讨论

3.1 去心合理性分析

巴戟天去心,自古便有记载,如晋代《肘后备急方》载有“去心”^[18];宋代《证类本草》载有“打去心”^[19];梁代《本草经集注》所载“锤破”^[20]也为去心之意。现代研究表明,巴戟天根皮和木心所含化学成分存在很大的差异:根皮中有毒元素铅较木心含量低,铁、锰、锌等16中微量元素含量较木心为多,特别是与中医“肾”、造血功能和心血管系统关系密切的锌、锰、铁、铬等元素在根皮中含量较高^[21];此外,根据文献[7]报道,巴戟天木心中多糖含量非常低,且木心比重较大,约占药材的20%~30%,木心过多将影响药物疗效。因此,巴戟天去心是合理的。

3.2 炮制机理分析

多糖含量以煮法去心最高,可能由两个原因引起:煮法去心使用了甘草,甘草的主要成分之一即为多糖,因此提高了多糖的含量;甘草中的某些物质促进了巴戟天多糖的溶出;盐的加入对多糖的溶出可能也有促进作用,因此其含量仅次于煮法;润法处理时间较长,可以造成巴戟天组织、细胞结构的松散,从而利于多糖的溶出;泡后蒸法与泡法相比,水处理时间较短,与清蒸法相比,蒸制时间较短,因此该法虽属于水火共制,但对多糖成分的破坏损失不及泡法和清蒸法,因此含量稍高;泡法是药材与水直接接触,可使细胞结构松散,可使巴戟天中的分子量小、分支程度低的多糖溶于水而损失;清蒸法采用武火加热,有可能是温度过高造成多糖成分的破坏使含量降低。

3.3 研究展望

多糖广泛存在于自然界中,以植物中含量居多,且具有多种药理活性,如麦冬多糖能够调节机体免疫^[22]、清除氧自由基和抗氧化^[23];天麻多糖可以抑制肿瘤^[24]、促进缺血性脑组织修复^[25];冬虫夏草中的虫草多糖具有降血糖及降血脂作用^[26]等;枸杞多糖具有辐射防护^[27]等作用;金樱子多糖能够抗炎抑菌^[28]。因此,进行多糖药物的研究,既有助于中药的利用开发,也为当今新药创制提供了方向。本实验以多糖为指标优选炮制去心方法,回答了去心时如何更多更好的保存巴戟天中的多糖成分,不仅为巴戟天的炮制方法研究提供了数据参考,还为巴戟天的药理研究奠定了化学基础,同时为巴戟天的开发利用提供了实验依据。

炮制方法是对中药炮制进行分类时形成的总结性表述,分类依据不同,炮制方法则不同,例如盐蒸法,采用“三类分类法”即为水火共制法,采用“工艺与辅料相结合分类法”则为炮炙中的加辅料蒸法;是对炮制工艺的总结与概括,炮制方法相同,炮制工艺可以不同,例如盐炙法,其操作具体工艺有“先拌盐水后炒”与“先炒药后加盐水”之分。炮制工艺是具体操作流程,是对炮制方法的细化,例如本实验中的“去心”实际为净制法,但可以通过煮法工艺、盐蒸法工艺、润法工艺等达到净制目的。需要注意的是,炮制方法与炮制工艺并无明显的界限,如本实验中的煮法,将其归于“炮炙”时属于炮制方法,将其归于“净制”时属于炮制工艺,实际运用中应加以区分。炮制方法与炮制工艺的研究是中药炮制研究的重要组成部分,是在了解和掌握炮制原理的基础上运用现代技术和方法理论对中药炮制方法、技术条件、指控指标、辅料规格及用量等的进一步统一。

3.4 不足之处

3.4.1 考察指标本实验仅以多糖含量作为考察指标优选巴戟天炮制去心方法,结果存在一定的片面性;实际评价时应结合巴戟天中的多种有效成分如游离蒽醌、结合蒽醌、耐斯糖、水晶兰苷等进行多指标综合分析,得出最佳炮制去心方法。

3.4.2 实验设计中药炮制能够影响药物的化学成分,从而影响药物的药理作用继而影响临床疗效。因此,本实验还可结合相关药理实验对多糖含量测定结果进行佐证。

3.4.3 多糖含量测定方法多糖含量测定主要以紫外分光光度法为主,样品处理有的采用苯酚-硫酸法^[16],有的采用蒽酮-硫酸法^[29],稳定性虽较好,但是专属性较差。近年来有学者采用高效液相-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)法测定多糖含量,虽然弥补了紫外分光光度法专属性不强的缺点,使实验结果更加真实、可信,但需要配置专门的检测仪器,而共振光散射法不仅不需昂贵的仪器,且灵敏度高、稳定性好、选择性高、操作简单,更适合用于多糖含量测定^[30]。本实验由于课题设计以及实验条件限制,仍采用紫外分光光度法测定。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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[6]	李丹青,肖强兵.巴戟天多糖通过p38MAPK信号通路促间充质干细胞成骨分化的体外研究[J].中国中医骨伤科杂志,2015,23(5):1-4. 目的：探讨巴戟天多糖对间充质干细胞（BMSCs）促成骨作用的影响及该作用与p38MAPK信号通路的相关性。方法：体外骨髓贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原。实验分为3组：1）对照组（经典成骨诱导）,用地塞米松,β-甘油磷酸钠,VitC和无药血清的DMEM/F12培养基体外培养第3代的BMSCs;2）巴戟天多糖（MOP）组,用含巴戟天多糖药物血清的DMEM/F12培养基体外培养第3代的BMSCs;3）阻滞剂组（MOP＋SB203580）,用p38 MAPK的特异阻滞剂SB203580预干预细胞1h后,加入含巴戟天多糖药物血清的DMEM/F12培养基体外培养第3代的BMSCs。体外培养3d,蛋白印迹法检测p38及其磷酸化产物的蛋白表达及用SB203580阻断p38MAPK信号后巴戟天多糖对RUNX2,OPN的影响;体外培养14d,ALP活性试剂盒检测BMSCs的成骨分化情况;体外培养21d,茜素红染色检测BMSCs钙结节的情况。结果：100g/L巴戟天多糖药物血清培养基为促（BMSCs）成骨的最佳浓度,差异有统计学意义（P〈0.01）;MOP组钙结节数量明显高于对照组和阻滞剂组,差异有统计学意义（P〈0.01）;与对照组比较,巴戟天组能提高细胞RUNX2,OPN的蛋白表达,差异有统计学意义（P〈0.01）,提高了p38蛋白磷酸化表达,差异有统计学意义（P〈0.05）;p38特异性阻滞剂SB203580阻断p38 MAPK信号后巴戟天多糖促成骨作用明显下降,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：巴戟天多糖能促进BMSCs成骨分化,其作用可能与激活p38蛋白的表达有关。 URL [本文引用:1]
[7]	况艳,周灿,廖莎,等.巴戟天炮制方法初探[J].西部中医药,2014,27(7):138-140. 通过对巴戟天的现代炮制方法、现代炮制工艺、炮制化学及炮制药理等四方面的研究概况进行综述，为优选巴戟天最佳炮制方法及工艺，规范巴戟天饮片生产，指导临床合理、有效用药提供参考。 DOI:10.3969/j.issn.1004-6852.2014.07.050 URL [本文引用:1]
[8]	周灿,许李,杨梓懿,等.不同炮制去心法对巴戟天多糖含量的影响[J].湖南中医药大学学报,2011,31(1):49-51. 目的比较不同炮制去心方法的巴戟天及其木心中多糖的含量。方法采用80%乙醇回流提取,用改进的苯酚-硫酸法测定多糖的含量。结果巴戟天不同炮制品及其木心中多糖含量高低依次为：制巴戟天〉巴戟肉〉盐巴戟天〉巴戟天木心。结论巴戟天经甘草制有利于多糖的溶出,盐炙品的多糖含量低于巴戟肉,巴戟天木心多糖含量最低。 DOI:10.3969/j.issn.1674-070X.2011.01.014.049.03 URL [本文引用:1]
[9]	刘艳红,周灿,廖莎,等.不同炮制去心法对巴戟天水晶兰苷含量的影响[J].中国药师,2014,17(11):1840-1842. 目的：比较不同炮制去心方法炮制的巴戟天中水晶兰苷的含量。方法：采用HPLC法,色谱柱为Kromalsil C18(200 mm ×4.6 mm,5μm)；流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(90∶10),流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃,检测波长232 nm,进样量为5μl。结果：巴戟天各去心炮制品中水晶兰苷含量以润法最高,其次为煮法,泡后蒸法,泡法,清蒸法,最低为盐蒸法。结论：润法去心对巴戟天中水晶兰苷的含量影响最小,其炮制品中水晶兰苷含量最高。 DOI:10.3969/j.issn.1008-049X.2014.11.015 URL [本文引用:0]
[10]	陈娥,周灿,廖莎,等.不同炮制去心法对巴戟天游离蒽醌含量的影响[J].中国药师,2015,18(11):1985-1986. 目的：：比较不同炮制去心法对巴戟天游离蒽醌含量的影响。方法：采用紫外分光光度法测定，检测波长为498 nm。结果：巴戟天各去心炮制品中游离蒽醌含量高低为：泡法>泡后蒸法>盐蒸法>煮法>润法>清蒸法。结论：采用泡法去心可减少巴戟天中游离蒽醌的损失。 URL [本文引用:0]
[11]	陈娥,周灿,廖莎,等.不同炮制去心法对巴戟天耐斯糖含量的影响[J].湖南中医药大学学报,2016,36(4):31-33. 目的：比较不同炮制去心法对巴戟天耐斯糖含量的影响。方法采用HPLC-ELSD 法，色谱柱为 Welch AQ-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为甲醇-水（3∶97）；柱温为25℃；流速为0.8 mL/min；进样量为10μL；漂移管温度为40℃；低温雾化。结果采用不同炮制去心法处理后，巴戟天中耐斯糖的含量高低为：润法＞煮法＞清蒸法＞盐蒸法＞泡后蒸法＞泡法。结论采用润法去心，巴戟天中耐斯糖损失最少。 DOI:10.3969/j.issn.1674-070X.2016.04.008 URL [本文引用:1]
[12]	国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:81-82. [本文引用:3]
[13]	丁安伟,孙秀梅.中药炮制学[M].北京:科学出版社,2005:159. [本文引用:1]
[14]	苏德民,沈烈行,王爱武.现代中药炮制设备及制法[M].济南:山东科学技术出版社,2002:218. [本文引用:1]
[15]	江西省卫生厅药政管理局.江西省中药炮制规范[M].南昌:江西科学技术出版社,1991:30. [本文引用:1]
[16]	张晓凤. 巴戟天配方颗粒中多糖含量测定[J].北方药学,2014,11(9):15-17. 目的：探讨巴戟天配方颗粒中多糖含量的测定方法。方法：选取巴戟天样本经溶液制备后，对所得溶液进行三次多糖含量测定，取其平均值即为巴戟天中多糖含量测定结果。结果：巴戟天中多糖含量3次测定结果对比无统计学意义（P>0.05），其多糖含量测定平均值为28.48%。结论：苯酚-硫酸法联合比色法测定巴戟天中多糖含量准确性较高，若实验室条件允许可分别采用比色法与高效毛细管电泳法（HPCE）检定巴戟天中多糖含量，从而使检定结果更具可靠性与真实性。 URL [本文引用:2]
[17]	赵鸿宾,魏学军,孙晓惠,等.不同产地加工方法对杜仲多糖含量的影响[J].时珍国医国药,2016,27(5):1113-1115. 目的比较不同加工方法对杜仲多糖含量的影响,为建立和完善杜仲的合理产地加工提供科学依据。方法以葡萄糖为对照品,采用紫外分光光度法测定杜仲多糖含量。结果不同加工方法对杜仲多糖含量有影响:同一干燥方法,杜仲发汗与未发汗多糖量存在显著差异,未发汗杜仲高于发汗杜仲;同一性状,不同干燥方法,微波干燥后晒干和烘干多糖量与阴干和晒干存在显著差异,多糖量以微波干燥10 min后晒干最高;不同性状,微波干燥10 min后晒干多糖量板片状与宽丝状存在显著差异,板片状高于宽丝状。结论临床应用如以杜仲多糖的生物活性为主,建议杜仲采用板片状、不发汗,微波辅助干燥后晒干的加工方法。 URL [本文引用:1]
[18]	杨家驹. 古今中药炮制经验[M].长沙:湖南科学技术出版社,1991:41. [本文引用:1]
[19]	王孝涛. 历代中药炮制法汇典(古代部分)[M].南昌:江西科学技术出版社,1986:43. [本文引用:1]
[20]	张炳鑫. 中药炮制品古今演变评述[M].北京:人民卫生出版社,1991:44. [本文引用:1]
[21]	李赛. 巴戟天根皮与木心化学成分的比较[J].中药通报,1988,13(2):17-21. [本文引用:1]
[22]	刘用国,许娇红,张红雷.短葶山麦冬多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响[J].中成药,2015,37(10):2290-2292. [本文引用:1]
[23]	曹科峰,黄兵兵,杨帆.麦冬多糖对CCl₄诱导的急性肝损伤的保护作用及其作用机制研究[J].中医药导报,2015,21(14):25-28. 目的：研究麦冬多糖对CCl4诱导的大鼠肝损伤的保护作用与作用机制。方法：将48只大鼠随机分为6组,每组8只,设定空白对照组,模型组,麦冬多糖3个剂量组分别为：高剂量组（400 mg/kg）、中剂量组（200 mg/kg）、低剂量组（100 mg/kg）,阳性药采用联苯双酯（150 mg/kg）。以2 mg/kg的40%CC14花生油溶液造模,测定大鼠脏器指数,同时测定大鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的水平,以及血清中超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含量,并且在显微镜下观察肝脏组织病理学变化。结果：麦冬多糖组丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性和血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的水平与模型对照组相比均具有显著性差异（P〈0.05）;模型组血清中SOD的活性为（114.01±22.15）,麦冬多糖400 mg/kg组为（222.16±29.17）,组间差异有统计学意义（P〈0.01）,模型组血清中MDA含量为（5.39±1.74）,麦冬多糖400 mg/kg组为（1.93±0.39）,组间差异有统计学意义（P〈0.01）,减轻对肝脏细胞的病理损害。结论：麦冬多糖可以保护CC14所引导的急性肝损伤,进一步的研究发现其肝保护机制可能与抗氧化通路有关。 URL [本文引用:1]
[24]	刘现辉,郭晓娜,展俊平,等.天麻多糖对H22荷瘤小鼠细胞周期及caspase蛋白活性的影响[J].中国老年学杂志,2015,20(35):5681-5682. [本文引用:1]
[25]	赵健,黄锐,李怀斌,等.电针及天麻多糖对局灶性脑缺血大鼠缺陷灶周围额叶皮质巢蛋白、肝细胞因子表达的影响[J].针刺研究,2015,40(2):108-112. [本文引用:1]
[26]	KIM S D.Isolation,structure and cholesterol esterase inhi-bitory activity of a polysaccharide,PS-A,from Gordyceps-sinensis[J].J Appl Biol Chen,2010,53:784-789. A heteropolysaccharide possessing strong inhibitory activity against cholesterol esterase, namely PS-A, was isolated from water extracts of Cordyceps sinensis by activity-guided fractionation. The molecular weight of PS-A was estimated as 4.6-10 5 Da. Compositional analysis revealed the presence of D-glucose, D-galactose, and D-mannose at a molar ratio of 2:1:1. The 1 H and 13 C nuclear magnetic resonance spectra, correlation spectroscopy, nuclear Overhauser effect spectroscopy, and heteronuclear multiple bond correlations experiment established the structure of PS-A as follows: {fx784-1} Results of the in vitro enzyme assay showed strong inhibition of cholesterol esterase by PS-A, with an IC 50 value of 12.7 g/mL, suggesting the possibility of its usefulness as a potential agent for control of hypercholesterolemia. DOI:10.3839/jksabc.2010.118 URL [本文引用:1]
[27]	GUNELI E,TUGYAN K,OZURLT H,et al.Effect of mela-tonin on testicular damage in streptozotocin-induced diabetes rats[J].Eur Surg Res,2008,40(4):354-355. Background: It is well known that diabetes mellitus is associated with impairment of testicular function. In the present study, we aimed to demonstrate the effect of melatonin on testicular damage in male rats with streptozotocin (STZ)-induced diabetes. Methods: Male Wistar rats were divided into 4 groups: (1) control group, (2) melatonin-treated nondiabetic group, (3) diabetic group and (4) melatonin-treated diabetic group. Diabetes was induced by STZ injection. Melatonin was administered intraperitoneally at the dose of 10 mg/kg for 5 days. Testicular damage was examined by using hematoxylin and eosin staining and periodic acid-Schiff staining, and apoptosis was determined by terminal-deoxynucleotidyl-transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). Potential disorders associated with seminiferous tubular sperm formation were evaluated using the Johnsen score. Results: Diabetic rats showed a reduction in seminiferous tubule diameter, increased thickening of the basement membrane in seminiferous tubules and degenerated germ cells. TUNEL-positive cells were significantly more numerous in diabetic rats than in control rats. Melatonin significantly attenuated the diabetes-induced morphological changes and germ cell apoptosis in the diabetic rat testis. The number of polymorphonuclear leukocytes was significantly decreased in group 4 when compared to group 3. Conclusions: These results suggest that intraperitoneal administration of melatonin for 5 days is a potentially beneficial agent to reduce testicular damage in adult diabetic rats, probably by decreasing oxidative stress. DOI:10.1159/000118032 PMID:18303272 URL [本文引用:1]
[28]	张庭廷,潘继红,聂刘旺,等.金樱子多糖的抑菌和抗炎作用研究[J].生物学杂志,2005,22(2):41-42. [本文引用:1]
[29]	孟亚红. 蒽酮-硫酸法测定空心莲子草中多糖含量[J].凯里学院学报,2016,34(3):67-69. 使用蒽酮-硫酸法测定空心莲子草中多糖的含量,测定波长620 nm,回归方程为:Y=27.497 X-0.045 6,R为0.997 4,检测线性范围为0~0.04 mg/mL,回收率为92.4%~103.05%,精密度的RSD=2.957%.此方法操作简便,不受还原糖的干扰,可以测定多糖. DOI:10.3969/j.issn.1673-9329.2016.03.19 URL [本文引用:1]
[30]	成芳,刘润,马晓艳,等.共振光散射法测定南方红豆杉叶多糖含量[J].新疆农业大学学报,2015,38(5):406-411. [本文引用:1]

1957

... 巴戟天为茜草科植物Morinda officinalis How.的干燥根,味甘、辛,性微温,归肝、肾经,具有补肾助阳、祛风湿、强筋骨之功效,临床常用于阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨萎软等症,《神农本草经》将其列为上品^[1].现代药理研究表明,巴戟天中的多糖成分具有抗氧化^[2]、防治骨质疏松^[3-6]等作用,与中医所认为的“强筋骨”作用是相对应的.根据文献记载^[7],巴戟天的炮制去心方法主要有润法、煮法、泡后蒸法、泡法、清蒸法和盐蒸法等6种,且实验研究表明巴戟天经不同炮制去心方法去心后,其有效成分含量发生变化^[8-11].笔者在前人实验的基础上,比较研究各不同炮制去心法对巴戟天多糖含量的影响. ...

巴戟天粗多糖体外抗氧化活性研究

2016

巴戟天多糖对骨质疏松模型大鼠5-HT、VEGF与体内矿物质含量影响研究

2015

巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用

2014

巴戟天多糖对卵巢大鼠核因子-κB受体激活因子配体和骨保护素表达的影响

2015

巴戟天多糖通过p38MAPK信号通路促间充质干细胞成骨分化的体外研究

2015

巴戟天炮制方法初探

2014

不同炮制去心法对巴戟天多糖含量的影响

2011

不同炮制去心法对巴戟天水晶兰苷含量的影响

2014

不同炮制去心法对巴戟天游离蒽醌含量的影响

2015

不同炮制去心法对巴戟天耐斯糖含量的影响

2016

2015

... 2.1.1 清蒸法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,照蒸法(《中华人民共和国药典》2015年版通则0213)蒸透,趁热除去木心,切段,干燥^[12]. ...

... 2.1.5 盐蒸法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,照盐蒸法(《中华人民共和国药典》2015年版通则0213)蒸透,趁热除去木心,切断,干燥^[12]. ...

... 2.1.6 煮法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,备用.取甘草,捣碎,加水煎汤,去渣,加入净巴戟天拌匀,照煮法(通则0213)煮透,趁热除去木心,切断,干燥^[12].(每100 kg巴戟天,用甘草6 kg) ...

2005

... 2.1.2 润法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,润透后去木心,切断,干燥^[13]. ...

2002

... 2.1.3 泡后蒸法取原药材约100 g,除去杂质,用清水洗净,再浸泡至三四成透,捞出,至笼屉内,加热蒸透,趁热除去木心,切断,干燥^[14]. ...

1991

... 2.1.4 泡法取原药材约100 g,除去杂质,洗净,用热水泡透,抽去心,切断,干燥^[15]. ...

巴戟天配方颗粒中多糖含量测定

2014

... 2.2.1 对照品溶液的制备取经105 ℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖约10 mg,精密称定,置50 mL量瓶中,加水溶解并定容至刻度,摇匀,配成0.200 1 mg·mL^-1的溶液,备用^[16-17]. ...

... 3.4.3 多糖含量测定方法多糖含量测定主要以紫外分光光度法为主,样品处理有的采用苯酚-硫酸法^[16],有的采用蒽酮-硫酸法^[29],稳定性虽较好,但是专属性较差.近年来有学者采用高效液相-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)法测定多糖含量,虽然弥补了紫外分光光度法专属性不强的缺点,使实验结果更加真实、可信,但需要配置专门的检测仪器,而共振光散射法不仅不需昂贵的仪器,且灵敏度高、稳定性好、选择性高、操作简单,更适合用于多糖含量测定^[30].本实验由于课题设计以及实验条件限制,仍采用紫外分光光度法测定. ...

不同产地加工方法对杜仲多糖含量的影响

2016

1991

... 巴戟天去心,自古便有记载,如晋代《肘后备急方》载有“去心”^[18];宋代《证类本草》载有“打去心”^[19];梁代《本草经集注》所载“锤破”^[20]也为去心之意.现代研究表明,巴戟天根皮和木心所含化学成分存在很大的差异:根皮中有毒元素铅较木心含量低,铁、锰、锌等16中微量元素含量较木心为多,特别是与中医“肾”、造血功能和心血管系统关系密切的锌、锰、铁、铬等元素在根皮中含量较高^[21];此外,根据文献[7]报道,巴戟天木心中多糖含量非常低,且木心比重较大,约占药材的20%~30%,木心过多将影响药物疗效.因此,巴戟天去心是合理的. ...

1986

1991

巴戟天根皮与木心化学成分的比较

1988

短葶山麦冬多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

2015

... 多糖广泛存在于自然界中,以植物中含量居多,且具有多种药理活性,如麦冬多糖能够调节机体免疫^[22]、清除氧自由基和抗氧化^[23];天麻多糖可以抑制肿瘤^[24]、促进缺血性脑组织修复^[25];冬虫夏草中的虫草多糖具有降血糖及降血脂作用^[26]等;枸杞多糖具有辐射防护^[27]等作用;金樱子多糖能够抗炎抑菌^[28].因此,进行多糖药物的研究,既有助于中药的利用开发,也为当今新药创制提供了方向.本实验以多糖为指标优选炮制去心方法,回答了去心时如何更多更好的保存巴戟天中的多糖成分,不仅为巴戟天的炮制方法研究提供了数据参考,还为巴戟天的药理研究奠定了化学基础,同时为巴戟天的开发利用提供了实验依据. ...

麦冬多糖对CCl诱导的急性肝损伤的保护作用及其作用机制研究

2015

天麻多糖对H22荷瘤小鼠细胞周期及caspase蛋白活性的影响

2015

电针及天麻多糖对局灶性脑缺血大鼠缺陷灶周围额叶皮质巢蛋白、肝细胞因子表达的影响

2015

Isolation,structure and cholesterol esterase inhi-bitory activity of a polysaccharide,PS-A,from Gordyceps-sinensis

2010

Effect of mela-tonin on testicular damage in streptozotocin-induced diabetes rats

2008

金樱子多糖的抑菌和抗炎作用研究

2005

蒽酮-硫酸法测定空心莲子草中多糖含量

2016

共振光散射法测定南方红豆杉叶多糖含量

2015