反相高效液相色谱法测定尿毒清颗粒(无糖型)丹参素和原儿茶醛含量

赵士冶

湖南省药品检验研究院,长沙 410001

作者简介赵士冶(1974-),男,天津蓟县人,副主任药师,学士,研究方向:药物分析。电话:0731-82275873,E-mail:284747871@qq.com。

中图分类号: R286;R927.2 文献标识码: B 文章编号: 1004-0781(2017)12-1402-02

摘要:

目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定尿毒清颗粒(无糖型)中丹参素和原儿茶醛含量。方法采用Agela Promosil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.25%冰醋酸(10:90);流速1.0 mL·min^-1;检测波长280 nm;柱温30 ℃。结果丹参素和原儿茶醛的进样量与峰面积分别在0.076 5~1.148 0 μg (r=0.999 9),0.047 6~0.713 0 μg(r=1.000 0)呈良好线性关系,平均回收率分别为99.56%,100.16%,RSD分别为1.20%,1.43%。结论该法简便、快速、准确,可用于尿毒清颗粒(无糖型)质量控制。

关键词: 尿毒清颗粒 ; 丹参素 ; 原儿茶醛 ; 色谱法 ; 高效液相

Abstract:

尿毒清颗粒中含有大黄、黄芪、桑白皮、苦参、白术、茯苓、制何首乌、丹参、车前草等药味,其中丹参在该制剂中具活血化瘀之功效,用于慢性肾功能衰竭及尿毒症早期等。《新药转正标准第十六至二十六册》中收载芍药苷的含量测定^[1]。经查阅文献已有该制剂中大黄酸及黄芪甲苷测定的报道^[2-3],尚末查阅到该制剂中丹参活性成分测定的报道。丹参素、原儿茶醛是丹参的主要水溶性成分,起抗心肌缺血和缺氧的作用,也是制剂中具活血化瘀作用的主要成分^[4]。为定量了解该制剂中此两种有效成分的含量,本实验建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定制剂中丹参素和原儿茶醛含量,以便更好地控制尿毒清颗粒的质量。

1 仪器与试药

1.1 主要仪器

日本岛津LC-20AT型高效液相色谱仪,紫外检测器。

1.2 试药

丹参素钠(每1 mg丹参素钠相当于0.912 mg丹参素)、原儿茶醛(购自中国食品药品检定研究院,批号:110855-201311,110810-201007,含量分别为98.1%,98.2%);甲醇、乙腈均为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。尿毒清颗粒:康臣药业(内蒙古)有限责任公司(Ⅰ,批号:20140722;Ⅱ,批号:20151025;Ⅲ,批号:20150224),规格:每袋5 g。

2 方法与结果

2.1 对照品储备液及对照品溶液

取丹参素钠对照品14.26 mg,加50%甲醇溶解并稀释至50 mL;取原儿茶醛对照品12.11 mg,加甲醇溶解并稀释至25 mL;分别作为丹参素钠与原儿茶醛对照品储备液。分别精密量取丹参素钠与原儿茶醛对照品贮备液3和1 mL,加50%甲醇稀释至20 mL,摇匀,作为对照品溶液。

2.2 供试品溶液

取本品10袋,研细,取约1.5 g,精密称定,精密加入50%甲醇25 mL,称定质量,超声处理(功率350 W,频率50 kHz)30 min,放冷,再称定质量,减失的质量用50%甲醇补足,摇匀,微孔滤膜滤过,即得。

2.3 阴性对照溶液的制备

按处方称取不含丹参的其他药味,参照制备工艺制备样品,按“2.2”同法制得阴性对照溶液。

2.4 色谱条件

采用Agela Promosil C₁₈ 色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-0.25%醋酸(10:90);柱温30 ℃;流速1.0 mL·min^-1;紫外检测波长280 nm;进样量15 μL。

2.5 干扰实验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,按“2.4” 项下的色谱条件测定。供试品溶液中丹参素与原儿茶醛分离良好,出峰时间均与相应对照品一致,在丹参素与原儿茶醛出峰时间处,阴性对照溶液无干扰峰。结果见图1。

2.6 线性范围考察

取“2.1”项下对照品溶液分别进样2,4,8,10,15,30 μL,横轴(X)为进样量,纵轴(Y)为峰面积,进行线性回归,回归方程分别为:丹参素:Y=26 859 X+7 792,线性范围为0.076 5~1.148 0 μg(r=0.999 9);原儿茶醛:Y=52 794 X-7 867,线性范围为0.047 6~0.713 0 μg(r=1.000 0)。可见该法线性关系良好。

2.7 精密度实验

取对照品溶液在“2.4”项下色谱条件下进样,连续进样6次,记录峰面积,丹参素与原儿茶醛峰面积的RSD分别为0.50%和0.71%。

2.8 重复性实验

取样品Ⅰ按“2.2”项下配制6份样品溶液,进样,记录色谱图并计算含量,丹参素与原儿茶醛平均含量分别为每袋2.42 mg,每袋0.46 mg,RSD%分别为0.78%,0.85%。结果表明该法重复性良好。

图1 阴性样品(A)、对照品(B)和供试品(C)HPLC色谱图
1.丹参素;2.原儿茶醛

2.9 稳定性实验

取同一供试品溶液于0,4,6,8,10,12,24 h进样,记录色谱图,丹参素与原儿茶醛峰面积RSD%分别为0.72%和0.89%,结果表明供试品溶液放置24 h内稳定。

2.10 加样回收率实验

精密称取已知含量的样品Ⅰ粉末约0.75 g,分别称取6份,每份均加入丹参素钠对照品贮备液1.5 mL与原儿茶醛对照品贮备液0.2 mL,按“2.2”项下处理。按外标法计算二种组份含量,并计算回收率。结果丹参素和原儿茶醛平均回收率依次为99.56%,100.16%,RSD依次为1.20%,1.43%。见表1。

表1 丹参素和原儿茶醛加样回收率测定结果

样品	称样量/g	样品量			回收率/ %
样品	称样量/g	mg			回收率/ %
丹参素	0.768 1	0.365 0	0.382 7	0.749 3	100.42
	0.760 8	0.361 5	0.382 7	0.736 5	97.99
	0.768 9	0.365 4	0.382 7	0.743 1	98.69
	0.748 6	0.355 7	0.382 7	0.741 8	100.89
	0.745 8	0.354 4	0.382 7	0.739 2	100.55
	0.753 2	0.357 9	0.382 7	0.736 2	98.85
原儿茶醛	0.768 1	0.069 4	0.095 1	0.165 3	100.84
	0.760 8	0.068 7	0.095 1	0.163 1	99.26
	0.768 9	0.069 5	0.095 1	0.166 2	101.68
	0.748 6	0.067 6	0.095 1	0.164 2	101.58
	0.745 8	0.067 4	0.095 1	0.160 7	98.11
	0.753 2	0.068 0	0.095 1	0.162 6	99.47

表1 丹参素和原儿茶醛加样回收率测定结果

2.11 样品含量测定

取3批样品按“2.2”项下制备,进样,同时取“2.1”项下的对照品溶液进样,按外标法计算丹参素与原儿茶醛含量,测定结果见表2。

样品	丹参素	原儿茶醛
Ⅰ	2.42	0.46
Ⅱ	2.64	0.42
Ⅲ	2.33	0.53

表2 3批样品每袋含量测定结果 mg

3 讨论

3.1 测定波长的选择

经测定丹参素最大吸收波长为220,280 nm,原儿茶醛最大吸收波长为230,278,310 nm,故实验中选择280 nm为测定波长,两种成分吸收均较大,同时避开末端吸收。

3.2 提取溶剂的考察

本实验分别采用不同比例甲醇、乙醇提取样品,结果表明乙醇溶液中原儿茶醛均提取不完全;50%甲醇提取液中丹参素及原儿茶醛峰面积均最大,因此选用50%甲醇为提取溶剂。

3.3 样品处理方法的考察

实验证明超声提取30 min后延长超声时间,丹参素及原儿茶醛峰面积不再增加;超声与回流两种提取方法提取效率无差别,因此选择超30 min声处理样品。

3.4 测定成分的选择

丹参中有效成分包括丹参酮Ⅰ、ⅡA、ⅡB,隐丹参酮等为代表的脂溶性成分;丹参素、原儿茶醛等代表的水溶成分^[5-6]。制剂中提取工艺不同影响有效成分类型,经测定尿毒清颗粒(无糖型)中丹参素、原儿茶醛含量较高,而丹参酮Ⅰ、ⅡA等脂溶性成分含量较低,因此本实验选择测定尿毒清颗粒(无糖型)中丹参素、原儿茶醛的含量。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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[1]	国家药典委员会.新药转正标准第十六至第二十六册[S].中国医药科技出版社,2010:451. [本文引用:1]
[2]	何洁英,王汝上,黄振山.HPLC法测定尿毒清颗粒中大黄酸的含量[J].现代医院,2011,11(6):30-31. [本文引用:1]
[3]	邹剑成,周洪波.尿毒清颗粒中黄芪甲苷的含量测定[J].中国药业,2009,18(9):27-28. 目的建立尿毒清颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(H PLC-ELSD)法,色谱柱为Therm o H ypersilODS-2柱(150m m×4.6m m,5μm),流动相为乙腈-水(30∶70),柱温为30℃,蒸发光散射检测器漂移管温度105℃,载气流量2.8L/m in。结果黄芪甲苷进样量在0.6276～3.9225μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9993),平均回收率为97.45%,RSD为3.44%(n=6)。结论H PLC-ELSD法准确、重现性好,可作为尿毒清颗粒的质量控制方法。 DOI:10.3969/j.issn.1006-4931.2009.09.017 URL [本文引用:1]
[4]	李生萍. 丹参中有效成分的分离、提取、提纯[J].中国医药指南,2013,11(4):78-79. 丹参是双子叶植物唇形科,主产于我国安徽、陕西、河南等地,是我国传统常用的中药材,具有活血通经、清心除烦、祛瘀止痛、养血安神的作用。由于丹参具有重要的药理作用和广泛的生物活性,近年来受到国内外学者的广泛关注,其提取、分离和提纯技术也得到了相应发展。本文通过对丹参有效成分的提取、分离和提纯的相关研究进行综述,为丹参有效成分提取分离纯化工艺及其药理学活性物质研究提供参考。 URL [本文引用:1]
[5]	姜晓燕,张琳,窦志华,等.反相高效液相色谱法同时测定丹参中5种成分含量[J].医药导报,2016,35(9):997-910 目的:建立反相高效液相色谱法同时测定丹参中5种成分含量.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱Welchrom C18(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相梯度洗脱,测定丹参中5种成分的含量.结果:隐丹参酮、丹参酮IIA、丹酚酸、丹参素、迷迭香酸分别在0.4200~16.8000μg,0.4140~16.5600μg,0.6560~26.2400μg,0.0595~2.3800μg,0.3460~13.8400μg范围内线性良好,r=0.9999,RSD均<1.2%(n=6),加样平均回收率98.68%~99.15%.结论:反相高效液相色谱法准确、快速、重复性好,同时可用于测定丹参中脂溶性和水溶性成分,可较全面控制丹参质量. DOI:10.3870/j.issn.1004-0781.2016.09.023 URL [本文引用:1]
[6]	张珺,程月发,张爱兵.丹参胶囊水溶性成分的高效液相色谱指纹图谱分析[J].医药导报,2015,34(1):89-94. [本文引用:1]

2010

... 尿毒清颗粒中含有大黄、黄芪、桑白皮、苦参、白术、茯苓、制何首乌、丹参、车前草等药味,其中丹参在该制剂中具活血化瘀之功效,用于慢性肾功能衰竭及尿毒症早期等.《新药转正标准第十六至二十六册》中收载芍药苷的含量测定^[1].经查阅文献已有该制剂中大黄酸及黄芪甲苷测定的报道^[2-3],尚末查阅到该制剂中丹参活性成分测定的报道.丹参素、原儿茶醛是丹参的主要水溶性成分,起抗心肌缺血和缺氧的作用,也是制剂中具活血化瘀作用的主要成分^[4].为定量了解该制剂中此两种有效成分的含量,本实验建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定制剂中丹参素和原儿茶醛含量,以便更好地控制尿毒清颗粒的质量. ...

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