四物汤改善血虚小鼠空间学习记忆能力及其机制

李玉洁, 孙曙光, 张明昊, 龚曼, 李伟, 朱艳琴

河南中医药大学基础医学院,郑州 450046

LI Yujie^,, SUN Shuguang, ZHANG Minghao, GONG Man, LI Wei, ZHU Yanqin^,

Basic Medical College, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China

通信作者朱艳琴(1956-),女,河南濮阳人,教授,硕士生导师,主要从事中药活性成分及作用机制研究。E-mail:jc.zyqin@163.com。

作者简介李玉洁(1983-),女,河南宜阳人,讲师,硕士,主要从事天然药物作用成分及作用机制研究。E-mail:lyj_happy@139.com。

基金资助: 河南省科技攻关重点项目(112102310145)

中图分类号: R285.5;R749 文献标识码: A 文章编号: 1004-0781(2017)04-0370-05

摘要:

目的观察四物汤对血虚小鼠空间学习记忆能力的影响及其机制。方法将小鼠分为5组:正常对照组、模型对照组和四物汤大、中、小剂量组。模型对照组和四物汤大、中、小剂量组采用连续剪尾放血法造模,3个剂量组分别以2.5,5.0,10.0 g·kg^-1四物汤水煎液灌胃14 d。5组于造模前、给药7 d后、给药14 d后,检测小鼠外周血红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)及红细胞比容(HCT)的变化,以T迷宫实验检测各时间点小鼠学习记忆能力,以自主活动检测仪检测各时间点小鼠自主活动情况,并于实验结束时检测5组小鼠血清促红细胞生成素(EPO)与海马乙酰胆碱酯酶(AChE)含量,探讨四物汤改善血虚小鼠学习记忆能力的机制。结果四物汤5.0,10.0 g·kg^-1给药7及14 d后对失血性血虚模型小鼠外周血RBC数量、HGB含量及HCT比值降低有明显的恢复和提高作用,四物汤2.5 g·kg^-1给药14 d后对失血性血虚模型小鼠外周血RBC数量及HCT比值降低有明显的恢复和提高作用,四物汤2.5,5.0,10.0 g·kg^-1对血虚小鼠自主活动次数有提高作用,并能降低血虚小鼠T迷宫实验选择错误次数,升高血清EPO含量,与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。同时海马AChE含量有降低趋势,但与模型对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论四物汤提高血虚小鼠空间学习记忆能力,其机制可能与提高血清EPO水平及调节海马AChE含量有关。

关键词: 四物汤 ; 血虚 ; 空间学习记忆能力 ; T迷宫

Abstract:

Objective To investigate the effects of Siwu decoction on the learning and memory abilities in mice with blood deficiency and the related mechanism. Methods The mice were randomly divided into five groups: normal control group, model control group, high-, medium-, and low-dose group of Siwu decoction. Blood deficiency mouse model was established by continuously cuttingtailand bleedingin model control group, high-, medium-, and low-dose group of Siwu decoction. The mice in high-, medium-, and low-dose group were intragastrically administrated with Siwu decoction of 2.5, 5.0, 10.0 g·kg^-1 for 14 days, respectively. The erythrocyte counts (RBC), hemoglobin (HGB), red blood cell hematocrit (HCT) were detected before modeling, 7 and 14 days after administration. The spatial learning and memory abilities were assessed using the T maze test. The spontaneous activities were assessed using locomotors activity detector. The levels of erythropoietin (EPO) content in serum and acetylcholinesterase (AChE) in hippocampal tissue were detected by enzyme-linked immunousorbent assay. Results 5.0 and 10.0 g·kg^-1Siwu decoction could increase RBC, HGB, HCT on the 7th and 14th day, 2.5 g·kg^-1Siwu decoction could increase RBC, HCT on 14th day, and each dosage of Siwu decoction could significantly increase the spontaneous activities of model mice with blood deficiency on the 7th and 14th day as compared with model control group (P<0.05 or P<0.01). Compared with model control group, the number of errorsin T Maze test were decreased significantly in high-, medium-, and low-dose groups (P<0.01). And the Siwu decoction had a tendency to reduce the hippocampal AChE levels, but when compared with the model control group there were no statistical differences (P>0.05). Conclusion Siwu decoction is benefit formemory and spatial learning in mice with blood deficiency, which may be related with higher serum EPO and lower hippocampal AChE expression.

Key words: decoction ; Blood deficiency ; Memory and spatial learning ; T maze

血虚症是临床常见病症,多由于生血乏源、失血过多、肾精亏损、大病等引起^[1]。血虚导致血的营养和滋润功能减退,以致脏腑经络、形体器官等失养。不能滋养头目、上荣于面,故毛发不泽、头晕眼花、面色苍白或者萎黄,唇色淡白;血不能养心,则心悸、健忘、失眠、视物昏花、怔忡、乏力等^[2]。常见于多种慢性消耗性疾病,以及妇女产后血虚^[3]。产后健忘、乏力是常见现象,很可能是血虚造成的。“虚则补之”,是虚证治疗的总则。中医常用补血方药有四物汤、当归补血汤、八珍汤、归脾汤等。现代研究表明许多补血方药都通过增强免疫,促进造血干细胞的增殖分化,促进血细胞的生成而发挥补血作用。四物汤出自宋代《太平惠民合剂局方》,君药为熟地,有滋阴养血,填经补髓之功效;臣药当归,长于补血养肝;佐以白芍,养血敛阴;使以川芎,活血行滞。四药配伍补血而不滞血,行血而不伤血。目前四物汤在改善血虚症状及机制方面的研究很多,但血虚是否会导致记忆力下降,四物汤是否能改善血虚引起的记忆力下降笔者未见文献报道。笔者在本实验中通过连续失血法复制血虚模型,并利用T迷宫实验方法,观察血虚后及给予四物汤治疗后小鼠的空间学习记忆力能力,一方面观察血虚是否会导致记忆力下降,另一方面观察四物汤对血虚小鼠记忆力的影响,为四物汤用于记忆力减退性疾病的治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明种小鼠50只,SPF级,雌雄各半,体质量(18±2)g,购自河南省实验动物中心,实验动物生产许可证号:SCXK(豫)2015-0001。饲养条件:室温20 ℃,相对湿度57%,标准饮食和饮水。

1.2 试剂

小鼠促红细胞生成素(EPO)ELISA检测试剂盒(路非凡生物科技有限公司,批号:201508);乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA检测试剂盒(路非凡生物科技有限公司,批号:201508)。

1.3 仪器

MultiskanFC酶标仪(Thermo Fisher Scientific,美国);“T”型迷宫(成都泰盟软件有限公司,中国);MEK-6318K型血液细胞分析仪(日本);ZZ-6型小鼠自主活动测试仪(成都泰盟软件有限公司)。

1.4 药材的鉴定与提取

四物汤由熟地(Radix rehmanniae)、当归(Radix angelicae sinesnis)、白芍(Radix paeoniae alba)、川芎(Rhizoma chuanxiong)组成,全部药材均购自河南张仲景大药房,经河南中医药大学陈随清教授鉴定。按《太平惠民和剂局方》规定的剂量比例称取,熟地、当归、白芍、川芎的比例为15∶10∶10∶6,按上述比例称取药材共计123 g,加3倍量水,浸泡30 min后按传统方法煎煮两次,合并两次滤液,浓缩至浓度为1 g·mL^-1,置4 ℃保存备用。用前稀释至0.25,0.5,1 g·mL^-1浓度使用。

1.5 分组与给药

按照随机数字表法将小鼠随机分为5组,每组10只,分别为正常对照组,模型对照组,四物汤小、中、大剂量组。按《中药药理研究方法学》介绍的方法折算小鼠与人的等效剂量为每天 5.0 g·kg^-1(按生药量计算),因此四物汤小、中、大剂量组每天给药量分别为每天2.5,5.0,10.0 g·kg^-1,正常对照组与模型对照组按10 mL·kg^-1灌胃等体积的0.9%氯化钠溶液,四物汤小、中、大剂量组均每天给药1次,连续给药14 d。造模与给药同步进行。

1.6 血虚小鼠模型的复制

采用剪尾放血法复制血虚小鼠模型。具体方法:除正常对照组外,其余小鼠以75%乙醇棉球擦拭小鼠尾部,使血管扩张充血,减去鼠尾尖端2~3 mm,然后将鼠尾伤口浸入装有20 ℃ 0.9%氯化钠溶液的刻度试管中,直至小鼠失血0.3 mL,每天操作,连续14 d,同时每天饲料量按75 g·kg^-1控制,自由饮水,造模期间仍继续给药。

1.7 检测指标

1.7.1 小鼠一般情况和外周血常规的检测 5组小鼠分别于造模前、造模7,14 d后以ZZ-6小鼠自主活动测试仪检测小鼠自主活动情况,并以尾静脉采血法取血测定血红细胞(RBC)数量、血红蛋白(HGB)含量及红细胞比容(HCT)比值,于末次给药后小鼠眼眶采血,3 000 r·min^-1(r=2.5 cm)离心取血清,酶联免疫法检测小鼠血清EPO含量,5组小鼠在取血后,于冰盘上迅速分离左、右侧海马,加冰0.9%氯化钠溶液制成质量分数为10%的脑组织匀浆。取海马匀浆严格按照试剂盒说明书,以酶联免疫吸附法测定5组大鼠海马中AChE的含量。

1.7.2 小鼠空间学习记忆力检测分别于造模前、造模7,14 d后以T迷宫检测小鼠学习与记忆能力。T迷宫是在T字型的迷宫里寻找食物以检测动物对食物放置位置的记忆情况。T迷宫两臂总长为80 cm。开始臂长57 cm包括10 cm长的一个起始位置,高为10 cm,宽为10 cm。实验过程中,小鼠控制饮食,但可自由饮水。实验前3 d为适应阶段,每天抚摸小鼠5 min以消除紧张感。随后使其在T迷宫中自由探究,至获得目标臂两端食物奖励为止。之后对每只小鼠进行训练,每天5次,每次包括一个预备实验和一个正式实验。预备实验中,将其中一臂关闭,允许小鼠进臂获取食物。取食结束,将小鼠放回起始区,停留约10 s后,进行正式实验测试。在正式实验中起始臂和目标臂同时打开。若小鼠选择未曾进入的臂,为正确选择,并获得食物奖励。若小鼠重复进入相同的臂,则为错误选择,不予奖励,并将其关在相应臂中10 s进行惩罚。每次训练时间间隔为10 min。于造模前即训练后第4天按照上述方法检测小鼠的空间学习记忆能力,为造模前小鼠的空间学习记忆能力,5次实验中小鼠选择的正确率越高说明空间学习记忆能力越好。并按照同样方法分别于给药7 及14 d后检测每只小鼠的空间学习记忆能力。

1.8 统计学方法

采用SPSS17.0版统计软件进行分析,计量资料采用t检验,数据以均数±标准差( $\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}$ ±s)表示,组间差异采用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 5组小鼠外周血RBC数量、HGB含量、HCT比值的比较

结果表明,造模前5组小鼠RBC数量、HGB含量、HCT比值均差异无统计学意义(P>0.05)。造模7及14 d后正常对照组小鼠RBC数量、HGB含量、HCT比值均明显高于模型对照组,差异有统计学意义(F=16.344,16.606,P<0.01),表明小鼠每天经尾部放血后出现贫血现象;四物汤大、中剂量组小鼠RBC数量、HGB含量、HCT比值均明显高于同期模型对照组小鼠,差异有统计学意义(F=11.949,15.408,P<0.05或P<0.01);四物汤小剂量组给药7 d 后HCT比值明显高于同期模型对照组小鼠,给药14 d后RBC数量及HCT比值明显高于同期模型对照组小鼠(F=16.542,16.167,P<0.05或P<0.01),提示四物汤对血虚证模型小鼠的造血功能有明显的促进作用。见表1。

表1 5组小鼠外周血RBC数量和HGB含量及HCT比值的比较
Tab.1 Comparison of peripheral RBC count, HGB content and HCT among five groups of mice ヌ±s,n=10

组别与时间	RBC/ (×10¹²·L^-1)	HGB/ (g·L^-1)	HCT/%
正常对照组
造模前	8.32±0.26	96.71±1.96	38.53±1.31
给药7 d后	8.11±0.91^*1	92.32±6.88^*1	35.55±4.00^*1
给药14 d 后	7.32±1.08^*1	91.94±3.72^*1	35.13±3.97^*1
模型对照组
造模前	8.43±0.26	96.65±1.87	38.81±0.88
给药7 d后	5.96±0.69	78.18±3.39	27.37±1.60
给药14 d 后	5.07±0.55	77.43±5.80	27.17±1.29
四物汤小剂量组
造模前	8.24±0.22	96.53±2.74	38.27±1.41
给药7 d后	6.45±0.38	81.14±3.11	33.11±2.26^*1
给药14 d 后	5.68±0.40^*2	81.03±3.05	31.52±2.05^*1
四物汤中剂量组
造模前	8.43±0.26	96.28±2.82	38.68±1.00
给药7 d后	6.63±0.58^*2	84.29±5.16^*1	34.69±2.23^*1
给药14 d 后	5.71±0.53^*2	82.39±4.52^*2	33.88±2.06^*1
四物汤大剂量组
造模前	8.41±0.31	96.11±2.67	38.47±1.16
给药7 d后	6.87±0.44^*1	87.07±5.43^*1	33.98±1.76^*1
给药14 d 后	5.81±0.45^*2	84.76±4.21^*1	33.75±2.17^*1

Compared with model control group at same time point,^*1P<0.01,^*2P<0.05

与模型对照组同时间点比较,^*1P<0.01,^*2P<0.05

表1 5组小鼠外周血RBC数量和HGB含量及HCT比值的比较

Tab.1 Comparison of peripheral RBC count, HGB content and HCT among five groups of mice ヌ±s,n=10

2.2 5组小鼠血清EPO及海马AChE含量的比较

与模型对照组比较,四物汤大、中、小剂量组小鼠血清EPO含量均明显增加,差异有统计学意义(F=12.713,P<0.01);表明四物汤改善血虚症状可能与调节EPO合成有关。正常对照组小鼠海马中AChE含量低于模型对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组比较3个治疗组海马中AChE含量在数值上有下降趋势,但均差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

组别	剂量/ (g·kg^-1)	EPO/ (U·L^-1)	AChE/ (U·mg^-1)
正常对照组	…	2.57±0.29	0.67±0.09
模型对照组	…	2.86±0.32	0.69±0.02
四物汤
小剂量组	2.5	3.30±0.38^*1	0.65±0.04
中剂量组	5.0	3.35±0.33^*1	0.66±0.03
大剂量组	10.0	3.46±0.34^*1	0.64±0.04

表2 5组小鼠血清EPO及海马AChE含量的比较

Tab.2 Comparison of the content of serum EPO and AChE content in hippocampus among five groups of mice ヌ±s,n=10

2.3 5组小鼠空间学习记忆能力的比较

结果表明,造模前5组小鼠空间学习记忆能力均差异无统计学意义(P>0.05)。造模7及14 d后模型对照组小鼠空间学习记忆能力明显低于正常对照组,差异有统计学意义(F=5.389,11.818,P<0.01),表明小鼠每天经尾部放血后记忆力下降;给药7,14 d后四物汤大、中、小剂量组小鼠空间学习记忆能力均明显高于同期模型对照组,差异有统计学意义(P<0.01),提示四物汤对血虚证模型小鼠的空间学习记忆能力有明显的提升作用。见表3。

组别与时间	造模前错误次数	给药7 d后错误次数	给药14 d后错误次数
正常对照组	0±0.00	0±0.00^*1	0.20±0.42^*1
模型对照组	0±0.00	1.10±1.10	2.00±0.94
四物汤
小剂量组	0±0.00	0.20±0.42^*1	0.40±0.70^*1
中剂量组	0±0.00	0.20±0.42^*1	0.30±0.67^*1
大剂量组	0±0.00	0.20±0.42^*1	0.30±0.67^*1

表3 5组小鼠空间学习记忆能力的比较

Tab.3 Comparison of the ability of spatial learning and memory among five groups of mice ヌ±s,n=10

2.4 5组小鼠自主活动的比较

结果表明,造模前5组小鼠活动次数及站立次数比较均差异无统计学意义 (P>0.05);造模7和14 d后正常对照组小鼠活动次数及站立次数均明显高于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.01),表明小鼠每天经尾部放血后出现乏力活动次数减少现象,给药7和14 d后四物汤大、中、小剂量组小鼠活动次数及站立次数均明显高于同期模型对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),提示四物汤对血虚证模型小鼠乏力症状有明显的改善作用。见表4。

表4 5组小鼠自主活动的比较
Tab.4 Comparison of spontaneous activity among five groups of mice ヌ±s,n=10

组别与时间	活动次数	站立次数
正常对照组
造模前	44.90±3.00	13.60±2.55
给药7 d后	27.50±3.57	10.20±1.75
给药14 d后	25.70±3.47	8.40±1.26
模型对照组
造模前	44.40±2.07	14.90±2.33
给药7 d后	16.30±3.59	5.20±2.04
给药14 d后	10.10±6.84	4.20±2.53
四物汤小剂量组
造模前	45.20±3.05	14.30±2.63
给药7 d后	19.80±2.94^*1	7.20±1.32^*2
给药14 d后	17.70±3.47^*2	5.50±1.27^*1
四物汤中剂量组
造模前	44.60±2.67	14.80±2.74
给药7 d后	22.50±2.92^*2	7.40±1.17^*2
给药14 d后	20.40±3.86^*2	6.90±1.20^*2
四物汤大剂量组
造模前	44.70±2.83	15.20±3.05
给药7 d后	23.90±3.38^*2	7.10±1.52^*2
给药14 d后	22.60±5.08^*2	7.20±1.03^*2

Compared with model control group,^*1P<0.05,^*²P<0.01

与模型对照组比较,^*1P<0.05,^*2P<0.01

表4 5组小鼠自主活动的比较

Tab.4 Comparison of spontaneous activity among five groups of mice ヌ±s,n=10

3 讨论

血虚症涵盖了现代医学以贫血特征为主要表现的多种疾病,如再生障碍性贫血、失血性贫血、溶血性贫血等。血虚作为中医理论体系中的重要证候之一,其发病机制及病因病机研究都不是十分透彻。由于中医“证”的主观不确定性,导致动物造模方法的选用和相关检测指标的选择存在争议,动物模型建立与评价方法也成为制约中医药研究走向深入的关键科学问题。目前有关血虚症动物模型的造模方法主要有环磷酰胺化学损伤法、辐射法、乙酰苯肼溶血法、乙酰苯肼-环磷酰胺复合法和放血法等。其中放血法通过使实验动物失血而造成动物血虚模型,该法需要对小鼠进行反复放血,增加了小鼠感染的概率,检测过程中发现许多小鼠的外周血白细胞水平升高,且在放血过程中精确的放血体积较难控制,增加造模的难度。但该法所造模型与中医血液亏虚所致的血虚理论一致,是最接近中医血虚症本质的造模方法,故本实验采用放血法复制动物血虚模型^[4]。现代医学对于血虚影响记忆力的原理研究还不是很多,祖国医学所讲的“血虚”与现代医学中的“贫血”有相似之处但又不完全相同,因此本实验在检测小鼠血象的同时,还记录了小鼠的一般活动情况及自主活动情况,以便更准确的反映动物血虚症状。

祖国医学认为:人的神志活动与心的关系最为密切,而以气血为物质基础。《灵枢·邪客》云:“心者,五脏六腑之大主也,精神之所舍也。《素问·八正神明论》说:“血气者,人之神”。《灵枢·本神》说:“心藏脉,脉舍神”。《灵枢·营卫生会》云:“血者,神气也”。《灵枢·平人绝谷》又说:“血脉和利,精神乃居”。可见,血的正常运行和充盈是心主神志的重要条件。血虚体质如果以心血亏耗为主,则易于影响精神活动。如心神失养,则可表现为精神思维活动障碍,出现失眠,多梦,健忘,神志不宁,或反应迟钝,精神萎顿,甚则昏迷,不省人事。《景岳全书》说:“营主血,血虚则无以养心,心虚则神不守舍,或成为惊惕,或成为恐畏,或若有所系恋,或无因而偏多妄思,以至终夜不寐,及忽寐忽醒而为鬼神不安等证”^[5]。现代医学对于血虚影响记忆力的原理研究还不是很多。现代医学认为学习记忆是中枢神经系统的高级神经活动,是衡量智能发育的重要指标。胡瑞梅等^[6]研究发现缺铁性贫血不仅可引起脑铁含量降低,还可造成脑内多种微量元素的改变,如:脑组织锌、锰、镉、铅等微量元素代谢紊乱,这些改变可能与缺铁性贫血大鼠的学习记忆能力降低有关。

四物汤是中医补血、养血的经典药方,主治营血虚滞症,用于心悸失眠、头晕目眩、面色无华、行瘦乏力、妇人月经不调、量少或经闭不行、脐腹作痛、舌淡、脉细玄或涩^[7]。现代药理学研究发现四物汤具有调节内分泌、纠正贫血、抗辐射、抗药物损伤、抗突变、抗自由基。调节免疫、改善微循环、增加血流量、抗血栓形成、降血脂、抗炎、抗皮肤疾病等作用^[8]。韩岚等^[9]发现四物汤对血管性痴呆大鼠有神经保护作用,能显著改善血管性痴呆大鼠海马病理变化,降低海马乙酰胆碱酯酶及ET-1水平,提高海马5-羟色胺及血管内皮生长因子水平,进而提高血管性痴呆大鼠的空间学习记忆能力。故笔者在本实验中采用失血法复制血虚模型,并利用T迷宫实验方法,观察四物汤对血虚小鼠的空间学习记忆能力的影响,一方面观察血虚是否会导致记忆力下降,另一方面观察四物汤对血虚小鼠记忆力的影响,为四物汤的临床用药及记忆力减退性疾病的治疗提供参考。

RBC、HGB、白细胞及血小板是血液中的主要细胞成分,也是判定血虚症的重要指标,在临床上血常规变化是血虚证的重要的客观指征,二者之间存在明显的相关性^[10]。促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是由肾皮质肾小管周围间质细胞和肝脏分泌的一种激素样物质,能促进红细胞生成。服用EPO可使肾病贫血患者增加血流比溶度(即增加血液中红细胞百分比), EPO能增强机体对氧的结合、运输和供应能力,改善缺氧症状。当机体红细胞减少时,机体血红蛋白含量下降,导致缺氧,EPO将代偿性增加,以促进机体骨髓造血,因此其含量变化可以作为观察机体造血功能状态变化的指标^[8]。本实验结果显示:连续尾静脉放血7 d后,模型对照组小鼠RBC数量、HGB含量、HCT比值较正常对照组明显降低,差异有统计学意义,并出现毛发紊乱,无光泽,足趾苍白,自发活动减少,记忆力下降,符合中医血虚症状。四物汤可提高血虚小鼠RBC数量、HGB含量及HCT比值,升高血清EPO含量,并提高血虚小鼠30 min内在自发活动仪中的活动次数及站立次数,说明四物汤可改善血虚小鼠的血虚症状,促进血虚小鼠在新异环境中的自发行为和探究反应,加速血虚小鼠体能的恢复,增强血虚小鼠体力。

记忆过程依次为记忆获得、巩固、再现,多次反复予以刺激往往会加强记忆^[11]。T迷宫实验主要反映动物对空间位置和方向的空间学习记忆能力。实验结果显示给药7及14 d后,血虚模型小鼠选择错误次数增加,四物汤大、中、小剂量组与模型对照组比较,错误次数减少,正确率提高,说明四物汤对血虚模型小鼠记忆认知功能有一定的改善作用。其作用可能通过增加血清EPO水平,进而作用于骨髓造血系统,促进造血,改善贫血症状,从而改善大脑缺血缺氧状态,提高血虚小鼠空间学习记忆能力;另一方面也可能通过降低血虚小鼠海马AChE含量,提高ACh水平,进而提高空间学习记忆能力的,AChE可降解ACh,ACh是中枢神经系统调节高级神经功能的重要神经递质,其水平下降可导致空间学习记忆障碍。但实验结果显示模型对照组海马AChE含量虽然比正常对照组有所升高,但差异无统计学意义。可能是由于血虚会导致记忆力下降,但并没有像痴呆证一样出现记忆障碍。因此血虚小鼠海马AChE含量有升高趋势,但与正常对照组比较,差异无统计学意义,具体机制尚待证实。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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[1]	何晓燕,李真贞.白芍对血虚小鼠补血作用的研究[J].时珍国医国药,2009,20(4):999-1000. 目的研究白芍水煎液对血虚小鼠的补血作用.方法用腹腔注射环磷酰胺的方法制造小鼠血虚模型,观察白芍水煎液对血虚小鼠红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量、骨髓有核细胞数及免疫器官脾脏、胸腺重量的影响,比较不同剂量白芍水煎液对血虚小鼠的补血作用. 结果造模后灌胃给予不同剂量的白芍水煎液,各给药组小鼠白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量、骨髓有核细胞数及免疫器官脾脏、胸腺重量均有不同程度的升高,中剂量组最为明显(P＜0.01).结论白芍具有一定的补血作用. DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2009.04.126 URL [本文引用:1]
[2]	龚文君,沃兴德.血虚证的现代研究概述[J].现代生物医学进展,2007,7(6):934-937. 很多学者从血虚证的发病原因、病理、动物模型制作及传统方药等方面在整体、细胞、分子等水平上对血虚证作了深入地研究,在血虚病理变化、动物模型制作及四物汤、当归补血汤等相关方药研究上取得了一定的共识.血虚时,机体造血功能抑制,免疫功能降低,红细胞膜的酶如Na+、K+-ATP酶活性降低,水盐代谢紊乱及细胞内一些信使物质含量异常等.通过放血、化学损伤、放射线损伤等造成血虚证的动物实验研究,人们进一步发现了传统方药对血虚证的治疗作用机制.这些经典方药都能增强机体免疫,促进造血干祖细胞的增殖分化,促进血细胞的生成从而发挥补血作用.这些研究大大丰富和发展了传统的中医血虚理论,为疾病的预防、诊断、治疗、预后判断提供了更客观、更全面的指导. DOI:10.3969/j.issn.1673-6273.2007.06.045 URL [本文引用:1]
[3]	沈鸿,肖红,陈建芳,等.酸枣仁汤对血虚小鼠的镇静催眠作用[J].中国临床康复,2005,9(43):106-108. [本文引用:1]
[4]	贾梅,郑传柱,张丽,等.胶艾汤对血虚模型大鼠补血作用的有效部位筛选[J].中草药,2015,46(16):2428-2433. 目的比较胶艾汤不同溶剂提取部位对血虚模型大鼠外周血象、免疫器官指数、白细胞介素2(IL-2)和促红细胞生成素(EPO)水平以及红细胞膜能量代谢酶活性的影响,筛选胶艾汤补血作用的有效部位。方法采取每天于眼底静脉丛放血5 mL/kg,连续放血12d的方法,复制大鼠血虚模型;造模同时各组动物分別ig给予胶艾汤及其正丁醉、石油醚、醋酸乙酯、水部位浸膏(剂量均为生药量12g/kg),以复方阿胶浆为阳性对照。造模第12天检测各组大鼠外周血红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板计数(PLT),计算脾脏和胸腺器官指数。检测血清中IL-2和EPO水平,检测全血红细胞膜能量代谢酶Na~+,K~+-ATP及Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶活性,UPLC法初步分析胶艾汤不同提取部位的化学成分差异。结果与对照组比较,模型组大鼠RBC、HGB、HCT、PLT、胸腺指数以及IL-2水平明显降低,Na~+,K~+-ATP酶和Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶活性明显减弱,脾脏指数及EPO水平明显升高,表明血虚模型复制成功。与模型组比较,胶艾汤正丁醇组可明显升高HCT、RBC、HGB、PLT(P0.05、0.01);降低脾脏指数及EPO水平(P0.05、0.01);明显升高胸腺指数、IL-2水平(P0.01),升高红细胞膜Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶及Na~+,K~+-ATP酶活性(P0.05、0.01)。石油醚组可明显升高PLT及IL-2水平(P0.01),降低EPO水平及脾脏指数(P0.05、0.01)。醋酸乙酯组可明显降低脾脏指数及EPO水平(P0.01),升高红细胞膜Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶活性(P0.05)。水部位组可明显升高PLT(P0.05),降低EPO水平(P0.01)。胶艾汤正丁醇提取部位中检测到其他提取部位不含有的咖啡酸、苯甲酰芍药苷、甘草酸铵,且正丁醇提取部位中没食子酸、原儿茶酸、磷酸川芎嗪、绿原酸的量均高于胶艾汤醋酸乙酯和水提取部位。结论正丁醇部位是胶艾汤补血作用的最强有效部位。 DOI:10.7501/j.issn.0253-2670.2015.16.015 URL [本文引用:1]
[5]	陈嬿如. 血虚体质与女性养生保健[D].济南:山东中医药大学,2012:134-150. [本文引用:1]
[6]	胡瑞梅,魏美文,张岩,等.缺铁性贫血大鼠学习记忆能力的变化及其与脑组织中微量元素的关系[J].中华儿科杂志,2002,40(3):36-38. 目的　观察缺铁性贫血对大鼠学习记忆能力的影响及其与脑组织中 7种微量元素的关系。方法　应用低铁饮食 (含铁量为 11 9mg/kg的饲料 )建立缺铁性贫血大鼠模型 ,用MG 2型三等分辐射式迷宫检测大鼠的学习记忆能力 ,用三电极等离子体原子发射直读光谱仪测定脑组织中 7种微量元素的含量。结果　缺铁性贫血大鼠在迷宫测验时达标所需反应次数 [(72± 9)次 ]较对照组[(5 0± 9)次 ]显著增加 (P 0 0 1) ;正确反应率 [(5 9± 5 ) % ]较对照组 [(6 6± 9) % ]显著降低 (P 0 0 5 ) ,2 4h后复测仍有相似结果 ,表明缺铁性贫血大鼠学习记忆能力显 DOI:10.3760/j.issn:0578-1310.2002.03.010 URL [本文引用:1]
[7]	富徐燕,陈梦,赵丕文,等.四物汤补血调经作用的物质基础及分子机理的研究进展[J].时珍国医国药,2013,24(11):2771-2773. 文章主要对中医经典补益方剂四物汤补血调经的分子作用机制的研究成果进行了系统整理和概述。简要介绍了四物汤补血调经的物质基础,并从免疫组学、代谢组学、基因组学、蛋白质组学和内分泌学五个方面详细评述其补血调经作用分子机理的最新研究进展。 DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2013.11.087 URL [本文引用:1]
[8]	张荣桃. 四物汤的现代研究进展[J].北京中医药,2012,31(1):73-76. 正四物汤,原出自唐.道人《仙授理伤续断秘方》,主治跌打损伤、肠肚中瘀血,认为凡是重伤、肠内有瘀血者都可用该方;清.张秉成认为其他补血方都是从四物汤演化而来;其用于治疗妇科疾病则首见于宋代《太平惠民和剂局方》,主治妇人月经不调、 URL [本文引用:2]
[9]	韩岚,季兆洁,陈卫东,等.四物汤对血管性痴呆大鼠的神经保护作用及其机制研究[J].安徽中医药大学学报,2015,34(4):69-73. 目的探讨四物汤对血管性痴呆（vascular dementia，VD）犬鼠的保护作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组，模型组，四物汤高剂量（6g／kg）、低剂量（3g／kg）组，尼莫地平组（20mg／kg），每组12只。采用大脑中动脉阻塞再灌注法复制大鼠VD模型，术后连续给予相应药物14d。采用水迷宫实验观察VD大鼠学习能力扣记忆能力；琏联免疫吸附法测定海马组织中乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）、内皮素-1（endothelin-1，ET-1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的含量。腹主动脉取血检测血液流变学指标。苏木精-伊红染色观察海马CA1区神经细胞形态学变化。结果与模型组比较，四物汤高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P〈0．05），在目标象限距离百分比显著增加（P〈0．05），海马AChE、ET-1含量显著降低（P〈0．05），5-HT、VEGF含量显著升高（P〈0．05），全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数显著降低（P〈0．05）。四物汤高、低剂量组比较，仅血浆黏度和红细胞聚集指数的差异具有统计学意义（P〈0．05）。与模型组比较，四物汤组海马CA1区锥体细胞缺失减轻，神经纤维排列整齐，仅少数细胞核固缩。结论四物汤对VD具有一定的改善作用，其机制与改善神经递质，调节海马ET-1、VEGF含量，改善血流状态有关。 DOI:10.3969/j.issn.2095-7246.2015.04.022 URL [本文引用:1]
[10]	李瑞丽,黄晓巍,卢彤宇,等.参红补血颗粒对失血性血虚证模型动物造血功能的影响[J].中国妇幼保健,2015,30(5):770-772. 目的:观察参红补血颗粒对失血性血虚证模型动物造血功能及相关因子EPO的影响,探讨参红补血颗粒对造血功能的促进作用.方法:采用断尾放血的方法复制血虚证动物模型,血液分析仪检测动物外周血红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)的变化,酶联免疫法检测动物血清促红细胞生成素(EPO)的含量变化.结果:造模后连续给予参红补血颗粒7天后,参红补血颗粒各给药组动物外周血RBC数量、HGB含量、HCT均显著高于模型组,血清EPO含量高于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:参红补血颗粒对模型动物的造血功能有促进作用,其详尽机制还有待于系统研究. DOI:10.7620/zgfybj.j.issn.1001-4411.2015.05.43 URL [本文引用:1]
[11]	蔡乐,李丽,王冬梅,等.金蛤口服液对环磷酰胺所致血虚模型小鼠外周血象及记忆功能的影响[J].中国药房,2013,24(15):1354-1356. 目的:研究金蛤口服液对血虚模型小鼠外周血象及记忆功能的影响。方法:给予小鼠腹腔注射环磷酰胺50mg/kg和照射X射线复制血虚模型。实验分为空白对照(等容生理盐水)、模型(等容生理盐水)、红参黄芪(10g/kg)与金蛤口服液高、中、低剂量(53、26.5、13.3g/kg)组,灌胃给药,每天1次,连续21d。给药第14天和第21天测定小鼠外周血象。血虚模型小鼠腹腔注射氢溴酸东莨菪碱4mg/kg致记忆受损,记录小鼠跳台实验中潜伏期、错误次数。结果:给药第14天,与空白对照组比较,模型组白细胞(WBC)、红细胞(RBC)显著减少(P0.05);与模型组比较,金蛤口服液高、中、低剂量组小鼠WBC显著增加,金蛤口服液高、中剂量组RBC显著增加(P0.05)。给药第21天,与空白对照组比较,模型组WBC、RBC、血红蛋白(HGB)显著减少(P0.05);与模型组比较,金蛤口服液高、中、低剂量组小鼠WBC显著增加,金蛤口服液高剂量组RBC显著增加,金蛤口服液高、低剂量组HGB显著增加(P0.05)。与空白对照组比较,模型组潜伏期显著缩短,错误次数显著增加(P0.05);与模型组比较,金蛤口服液高、中、低剂量组潜伏期显著延长,错误次数显著减少(P0.05)。结论:金蛤口服液对血虚模型小鼠外周血血细胞状况尤其是白细胞有明显的改善作用,对小鼠记忆功能可能有改善作用。 URL [本文引用:1]

白芍对血虚小鼠补血作用的研究

2009

... 血虚症是临床常见病症,多由于生血乏源、失血过多、肾精亏损、大病等引起^[1].血虚导致血的营养和滋润功能减退,以致脏腑经络、形体器官等失养.不能滋养头目、上荣于面,故毛发不泽、头晕眼花、面色苍白或者萎黄,唇色淡白;血不能养心,则心悸、健忘、失眠、视物昏花、怔忡、乏力等^[2].常见于多种慢性消耗性疾病,以及妇女产后血虚^[3].产后健忘、乏力是常见现象,很可能是血虚造成的.“虚则补之”,是虚证治疗的总则.中医常用补血方药有四物汤、当归补血汤、八珍汤、归脾汤等.现代研究表明许多补血方药都通过增强免疫,促进造血干细胞的增殖分化,促进血细胞的生成而发挥补血作用.四物汤出自宋代《太平惠民合剂局方》,君药为熟地,有滋阴养血,填经补髓之功效;臣药当归,长于补血养肝;佐以白芍,养血敛阴;使以川芎,活血行滞.四药配伍补血而不滞血,行血而不伤血.目前四物汤在改善血虚症状及机制方面的研究很多,但血虚是否会导致记忆力下降,四物汤是否能改善血虚引起的记忆力下降笔者未见文献报道.笔者在本实验中通过连续失血法复制血虚模型,并利用T迷宫实验方法,观察血虚后及给予四物汤治疗后小鼠的空间学习记忆力能力,一方面观察血虚是否会导致记忆力下降,另一方面观察四物汤对血虚小鼠记忆力的影响,为四物汤用于记忆力减退性疾病的治疗提供参考. ...

血虚证的现代研究概述

2007

酸枣仁汤对血虚小鼠的镇静催眠作用

2005

胶艾汤对血虚模型大鼠补血作用的有效部位筛选

2015

... 血虚症涵盖了现代医学以贫血特征为主要表现的多种疾病,如再生障碍性贫血、失血性贫血、溶血性贫血等.血虚作为中医理论体系中的重要证候之一,其发病机制及病因病机研究都不是十分透彻.由于中医“证”的主观不确定性,导致动物造模方法的选用和相关检测指标的选择存在争议,动物模型建立与评价方法也成为制约中医药研究走向深入的关键科学问题.目前有关血虚症动物模型的造模方法主要有环磷酰胺化学损伤法、辐射法、乙酰苯肼溶血法、乙酰苯肼-环磷酰胺复合法和放血法等.其中放血法通过使实验动物失血而造成动物血虚模型,该法需要对小鼠进行反复放血,增加了小鼠感染的概率,检测过程中发现许多小鼠的外周血白细胞水平升高,且在放血过程中精确的放血体积较难控制,增加造模的难度.但该法所造模型与中医血液亏虚所致的血虚理论一致,是最接近中医血虚症本质的造模方法,故本实验采用放血法复制动物血虚模型^[4].现代医学对于血虚影响记忆力的原理研究还不是很多,祖国医学所讲的“血虚”与现代医学中的“贫血”有相似之处但又不完全相同,因此本实验在检测小鼠血象的同时,还记录了小鼠的一般活动情况及自主活动情况,以便更准确的反映动物血虚症状. ...

血虚体质与女性养生保健[D]

2012

... 祖国医学认为:人的神志活动与心的关系最为密切,而以气血为物质基础.《灵枢·邪客》云:“心者,五脏六腑之大主也,精神之所舍也.《素问·八正神明论》说:“血气者,人之神”.《灵枢·本神》说:“心藏脉,脉舍神”.《灵枢·营卫生会》云:“血者,神气也”.《灵枢·平人绝谷》又说:“血脉和利,精神乃居”.可见,血的正常运行和充盈是心主神志的重要条件.血虚体质如果以心血亏耗为主,则易于影响精神活动.如心神失养,则可表现为精神思维活动障碍,出现失眠,多梦,健忘,神志不宁,或反应迟钝,精神萎顿,甚则昏迷,不省人事.《景岳全书》说:“营主血,血虚则无以养心,心虚则神不守舍,或成为惊惕,或成为恐畏,或若有所系恋,或无因而偏多妄思,以至终夜不寐,及忽寐忽醒而为鬼神不安等证”^[5].现代医学对于血虚影响记忆力的原理研究还不是很多.现代医学认为学习记忆是中枢神经系统的高级神经活动,是衡量智能发育的重要指标.胡瑞梅等^[6]研究发现缺铁性贫血不仅可引起脑铁含量降低,还可造成脑内多种微量元素的改变,如:脑组织锌、锰、镉、铅等微量元素代谢紊乱,这些改变可能与缺铁性贫血大鼠的学习记忆能力降低有关. ...

缺铁性贫血大鼠学习记忆能力的变化及其与脑组织中微量元素的关系

2002

四物汤补血调经作用的物质基础及分子机理的研究进展

2013

... 四物汤是中医补血、养血的经典药方,主治营血虚滞症,用于心悸失眠、头晕目眩、面色无华、行瘦乏力、妇人月经不调、量少或经闭不行、脐腹作痛、舌淡、脉细玄或涩^[7].现代药理学研究发现四物汤具有调节内分泌、纠正贫血、抗辐射、抗药物损伤、抗突变、抗自由基.调节免疫、改善微循环、增加血流量、抗血栓形成、降血脂、抗炎、抗皮肤疾病等作用^[8].韩岚等^[9]发现四物汤对血管性痴呆大鼠有神经保护作用,能显著改善血管性痴呆大鼠海马病理变化,降低海马乙酰胆碱酯酶及ET-1水平,提高海马5-羟色胺及血管内皮生长因子水平,进而提高血管性痴呆大鼠的空间学习记忆能力.故笔者在本实验中采用失血法复制血虚模型,并利用T迷宫实验方法,观察四物汤对血虚小鼠的空间学习记忆能力的影响,一方面观察血虚是否会导致记忆力下降,另一方面观察四物汤对血虚小鼠记忆力的影响,为四物汤的临床用药及记忆力减退性疾病的治疗提供参考. ...

四物汤的现代研究进展

2012

... RBC、HGB、白细胞及血小板是血液中的主要细胞成分,也是判定血虚症的重要指标,在临床上血常规变化是血虚证的重要的客观指征,二者之间存在明显的相关性^[10].促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是由肾皮质肾小管周围间质细胞和肝脏分泌的一种激素样物质,能促进红细胞生成.服用EPO可使肾病贫血患者增加血流比溶度(即增加血液中红细胞百分比), EPO能增强机体对氧的结合、运输和供应能力,改善缺氧症状.当机体红细胞减少时,机体血红蛋白含量下降,导致缺氧,EPO将代偿性增加,以促进机体骨髓造血,因此其含量变化可以作为观察机体造血功能状态变化的指标^[8].本实验结果显示:连续尾静脉放血7 d后,模型对照组小鼠RBC数量、HGB含量、HCT比值较正常对照组明显降低,差异有统计学意义,并出现毛发紊乱,无光泽,足趾苍白,自发活动减少,记忆力下降,符合中医血虚症状.四物汤可提高血虚小鼠RBC数量、HGB含量及HCT比值,升高血清EPO含量,并提高血虚小鼠30 min内在自发活动仪中的活动次数及站立次数,说明四物汤可改善血虚小鼠的血虚症状,促进血虚小鼠在新异环境中的自发行为和探究反应,加速血虚小鼠体能的恢复,增强血虚小鼠体力. ...

四物汤对血管性痴呆大鼠的神经保护作用及其机制研究

2015

参红补血颗粒对失血性血虚证模型动物造血功能的影响

2015

金蛤口服液对环磷酰胺所致血虚模型小鼠外周血象及记忆功能的影响

2013

... 记忆过程依次为记忆获得、巩固、再现,多次反复予以刺激往往会加强记忆^[11].T迷宫实验主要反映动物对空间位置和方向的空间学习记忆能力.实验结果显示给药7及14 d后,血虚模型小鼠选择错误次数增加,四物汤大、中、小剂量组与模型对照组比较,错误次数减少,正确率提高,说明四物汤对血虚模型小鼠记忆认知功能有一定的改善作用.其作用可能通过增加血清EPO水平,进而作用于骨髓造血系统,促进造血,改善贫血症状,从而改善大脑缺血缺氧状态,提高血虚小鼠空间学习记忆能力;另一方面也可能通过降低血虚小鼠海马AChE含量,提高ACh水平,进而提高空间学习记忆能力的,AChE可降解ACh,ACh是中枢神经系统调节高级神经功能的重要神经递质,其水平下降可导致空间学习记忆障碍.但实验结果显示模型对照组海马AChE含量虽然比正常对照组有所升高,但差异无统计学意义.可能是由于血虚会导致记忆力下降,但并没有像痴呆证一样出现记忆障碍.因此血虚小鼠海马AChE含量有升高趋势,但与正常对照组比较,差异无统计学意义,具体机制尚待证实. ...