目的 对广西不同产地壮药玉郎伞根、茎、叶中水黄皮素进行测定,探讨玉郎伞习用药用部位为根的科学性及为其种植基地的选择提供检测数据。方法 采用高效液相色谱法测定广西不同产地壮药玉郎伞药材根、茎、叶中水黄皮素的含量。色谱条件:Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm) ;以乙腈-含0.005 mol·L-1庚烷磺酸钠0.05 mol·L-1磷酸二氢钾 (40∶60)为流动相;柱温:30 ℃;流速1.0 mL·min-1;检测波长为217 nm;进样量10 μL。结果 水黄皮素进样量在12.23~122.3 μg·mL-1间有良好的线性关系。根、茎、叶中水黄皮素的回收率分别为98.86%,98.36%,101.04%;RSD分别为0.36%,0.74%,0.54%。水黄皮素在玉郎伞的根部含量最高,茎次之,在叶中几乎不含有,广西不同产地壮药玉郎伞根、茎中水黄皮素含量也有一定差异。结论 该实验证实玉郎伞习用药用部位为根部的科学性,其检测数据也可用于壮药玉郎伞种植基地的选择。
玉郎伞
美国Waters2695高效液相色谱仪,紫外检测器;GR202型电子分析天平(日本A&D公司,感量:0.1/0.01 mg);元素820a型摩尔实验室超纯水器(上海摩勒生物技术有限公司);AS7240BT型超声清洗器(天津奥特塞恩斯仪器有限公司)。
Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm) ;以乙腈-含0.005 mol·L-1庚烷磺酸钠0.05 mol·L-1磷酸二氢钾 (40∶60)为流动相;柱温:30 ℃;流速1.0 mL·min-1;检测波长为217 nm;进样量10 μL。
取水黄皮素对照品6 mg,精密称定,加无水乙醇100 mL,制成每毫升含水黄皮素60 μg的溶液作为对照品溶液。
取本品根、茎、叶细粉[过孔径(355±13)μm(三号)筛]约0.6 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加乙醇50 mL,称定质量,水浴加热回流2 h,冷却至室温,称定质量,用乙醇补足损失质量,滤过。精密吸取续滤液20 mL,蒸干,残渣用三氯甲烷分5次溶解,并转移到25 mL量瓶中,定容,滤过。精密量取续滤液10 mL,蒸干,残渣用无水乙醇溶解,并转移至5 mL量瓶中,定容,摇匀,用微孔滤膜(孔径0.45 μm) 滤过,取续滤液,即得。
按“2.2”项下制备每毫升含水黄皮素为12,30,60,90,120 μg的对照品溶液,取上述不同浓度对照品溶液分别进样,以峰面积(
在“2.1”项色谱条件下,测定水黄皮素的最低检测限(信噪比3∶1)为0.19 ng;最低定量限(信噪比10∶1)为0.64 ng。
分别精密吸取“2.2”项对照品溶液注入液相色谱仪,按“2.1”项色谱条件连续测定6次,每次10 μL,记录水黄皮素的峰面积,计算其RSD为0.54%,结果表明仪器精密度良好。
取同一编号(样品编号1)的玉郎伞根、茎、叶细粉(过三号筛)6份,各约0.6 g,按“2.3”项方法平行制备供试品溶液,按“2.1”项色谱条件,测定6份供试品溶液中水黄皮素的含量的RSD分别为1.51%,2.13%,0.00%。
精密称取已知含量同一批样品 (样品编号1,根、茎、叶中水黄皮素的含量分别为2.513,0.049,0 mg·g-1)的根、茎、叶细粉(过三号筛)各6份,每份约0.3 g,加入水黄皮素对照品适量,照“2.3”项下方法制备供试品溶液,在“2.1”项色谱条件进行测定,计算得其根、茎、叶中水黄皮素的回收率分别为98.86,98.36,101.04%;RSD分别为0.36,0.74,0.54%。结果见
按照“2.3”项制备供试品溶液,在室温下放置,在0,3,6,12,24 h测定,记录主峰面积,结果表明峰面积无明显变化,根、茎、叶RSD分别为1.58%,2.36%,0.00%。
由于目前水黄皮素尚不是法定化学对照品,笔者在本实验对不同厂家生产的水黄皮素对照品质量进行考察,分别购买日本和光纯药工业株式会社、成都瑞芬思生物科技有限公司、上海源叶生物科技有限公司、南京森贝伽生物科技有限公司的四家水黄皮素对照品(CAS:521-88-0)配制成相近浓度进行紫外扫描,结果发现购买于日本的对照品与国内3个生产厂家生产的对照品光谱完全不一致,其原因有待考察。由于日本和光纯药工业株式会社生产的对照品光谱信息与文献[8]报道一致,故本次实验使用日本和光纯药工业株式会社生产的对照品进行实验。
经实验,发现在200~400 nm的紫外光谱中,水黄皮素对照品在217和260 nm处有最大吸收,其中217 nm处吸收比260 nm处大,可能是出于对紫外末端吸收的顾虑,现有文献[9]都是选择第二大吸收波长260 nm作为测定波长。本实验曾用217和260 nm波长处同时测定同一份供试品溶液,结果发现在217 nm波长下,供试品中的杂质及紫外末端吸收均未对检测产生干扰,由于在217 nm检测波长下,其灵敏度比260 nm高1.3倍,因此采用217 nm作为检测波长。
李霄等[9]报道,采用庚烷磺酸钠-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾(3∶5)-乙腈(1∶1)为流动相测定玉郎伞根中的水黄皮素效果满意,本实验在该研究的基础上,改变此流动相的配比,使得水黄皮素在玉郎伞根、茎、叶中均有良好的分离度。
选用乙醇作溶剂,考察比较超声2 h和加热回流2 h的提取效果,结果显示,加热回流提取效果优于超声提取,故选择加热回流提取法。
玉郎伞植物的地上部分具有较大的生物量,只用其根部而地上部分弃之不用,这不利于资源的充分利用,目前玉郎伞野生资源已近枯竭,研究和探索玉郎伞地上部分的利用途径,显然十分有必要,然而从查阅文献资料可知,还未见学者对其地上部分进行系统的研究。本文在前人研究的基础上,对玉郎伞根、茎、叶中水黄皮素的含量进行测定,旨在考察玉郎伞根、茎、叶中水黄皮素的含量,并建立HPLC法测定玉郎伞根、茎、叶中水黄皮素含量的方法,为其扩宽药用部位及质量控制提供实验依据。从测定结果可以看出,水黄皮素在玉郎伞的根含量最高,在茎次之,也验证广西习用玉郎伞根部的科学性。此外,本研究还可以为选择玉郎伞种植基地提供实验依据,单从水黄皮素含量方面考虑,鹿寨县采集的样品水黄皮素含量最高(根:0.25%),陆川县沙坡镇采集的样品水黄皮素含量最少(根:0.06%),其他地采集的样品水黄皮素含量在0.10%~0.17%(根)之间。
The authors have declared that no competing interests exist.