冷却结晶法纯化二氢杨梅素的工艺

谢雪佳, 王晨光, 侯小龙, 熊微, 王文清

华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部,武汉 430030

XIE Xuejia^,, WANG Chenguang, HOU Xiaolong, XIONG Wei, WANG Wenqing^,

Department of Pharmacy,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China

通信作者王文清(1969-),女,四川遂宁人,主任药师,硕士生导师,博士,研究方向:现代中药制剂与分析研究、药物质量控制。电话:027-83649095,E-mail:wwq3560@sina.com。

作者简介谢雪佳(1990-),女,四川犍为人,在读硕士,研究方向:新制剂的质量控制。电话:027-83649090,E-mail:cigar1206@sina.com。

基金资助: 国家自然科学基金资助项目(81503013)

中图分类号: R286 文献标识码: B 文章编号: 1004-0781(2017)08-0912-06

摘要:

目的建立一种工艺简单,操作方便,适合工业化结晶纯化二氢杨梅素的方法。方法考察冷却结晶工艺中关键参数如温度、乙醇浓度、活性炭用量、吸附时间等对二氢杨梅素收率、纯度的影响。高效液相色谱法和薄层色谱法验证其纯度,紫外-可见分光光度法测定溶解度与温度和乙醇用量关系,高效液相色谱法测定含量,粉末X射线衍射法和热分析确定晶型。结果乙醇浓度小于10%,溶剂温度大于85 ℃,活性炭用量为0.1%~0.3%,吸附时间为1~3 min时,重结晶所得二氢杨梅素收率大于70%,含量大于98%,晶型不变。结论采用水为溶剂进行结晶纯化,应严格控制温度,温度骤降会导致产率急剧下降,加入10%乙醇即能大幅提高产率,工艺稳健,产率受温度影响较小。

关键词: 二氢杨梅素 ; 结晶 ; 纯化 ; 工艺稳健性 ; 晶型

Abstract:

Objective To development a cooling crystallization process that is suitable for industrial preparation of purified dihydromyricetin. Methods Screen design was used to investigate effects of process parameters such as,temperature,concentration ethanol aqueous,quantity of activated charcoal and adsorption time on yield and purity of dihydromyricetin.Purity was verified by high performance liquid chromatography and thin layer chromatography.The solubility of dihydromyricetin in water at viable temperature and ethanol proportion was also determined by UV spectrophotometry.The solid form was characterized by thermal analysis and powder X-ray diffractometry. Results When temperature was >85 ℃,ethanol concentration <10%,dosage of activated charcoal 0.1%-0.3%,and adsorption time 1-3 min,yield of dihydromyricetin was more than 70%,and the purity greater than 98%.The crystals,prepared by cooling crystallization from water and ethanol aqueous,had the same physical form and crystal habit. Conclusion Cooling crystallization from low concentration of ethanol aqueous gets higher yield and the process is more robust than crystallization from water.

Key words: Dihydromyricetin ; Crystallization ; Purification ; Process Robustness ; Polymorphism

二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)是一种具有抗炎、抗菌、抗氧化、降血压、保肝^[1]和诱导癌细胞凋亡^[2-3]等广泛药理作用的黄酮醇类化合物^[4],其提取和纯化方法已有多篇文献报道。纯化方法主要有结晶法和层析法,其中利用DMY在水中溶解度随温度变化较大而设计的冷却结晶法最为常用,层析法则采用凝胶色谱、吸附色谱、离子交换树脂技术、高效液相色谱制备以及逆流色谱制备等技术^[5]。由于结晶法工艺简单,操作方便,易于大规模制备,是最有利于工业化生产的方法。但从工业化纯化原料药角度考虑,文献报道的结晶纯化工艺研究还存在以下问题:未阐明溶剂对晶型的影响;未考察溶解度和溶液稳定性对收率和纯度的影响;忽视工业化生产中各因素水平可能发生的变化,缺乏对工艺稳健性的考察。工业化生产需要综合考虑产物的晶型、粉末性质、收率、纯度和工艺稳健性等因素^[6-7],但在二氢杨梅素的纯化研究中,笔者未见相关报道。笔者在本研究中依据二氢杨梅素的溶解度及溶液稳定性设计冷却结晶工艺,利用筛选设计考察结晶工艺中关键参数:温度、乙醇用量、活性炭用量及吸附时间等对获得产品收率、纯度和晶型的影响。

1 仪器与材料

1.1 仪器

SHIMADZU UV-2450紫外-可见分光光度仪(日本岛津公司);LC-20AD型高效液相色谱仪(日本岛津公司);AUW 220D型双量程分析天平(日本岛津公司,感量:0.1/0.01 mg);PANalytical B.V.粉末X射线衍射仪(荷兰帕纳科公司);热重分析仪[铂金-埃尔默仪器(上海)有限公司];Q2000型差示量热扫描仪(美国TA 仪器有限公司)。

1.2 试剂

二氢杨梅素对照品(自制,从藤茶中提取纯化,经测定纯度>99.8%);二氢杨梅素原料(批号:MH-DMY201309202,湖北康宝泰精细化工有限公司);乙腈(色谱纯,美国天地公司);95%乙醇(分析纯,武汉市中天化工有限责任公司);水为新制多效双蒸水。

2 方法与结果

2.1 溶解度测定

采用摇瓶法测定溶解度,将过量二氢杨梅素固体加入10 mL溶剂中,控制温度,搅拌12 h后,使用紫外-可见分光光度计测定其含量,测定波长为290 nm。根据测得的溶解度曲线(图1A)可知,二氢杨梅素溶解度随温度变化较大,水溶液温度为60 ℃时溶解度约为25 ℃时溶解度的10倍,由此在设计结晶实验时,将溶剂初始温度范围设定在>60 ℃,以减少水用量,加快药物溶解。另根据二氢杨梅素溶解度在乙醇溶液中随乙醇体积比例变化的规律(图1B),笔者发现当乙醇浓度达到20%时,溶解度即可提高5倍。由于在纯化过程中过高的乙醇浓度会造成有机溶剂损失,因此在后续的设计中,将乙醇用量的最大值设定在20%。此前已有文献报道二氢杨梅素的溶解度基本不受pH值影响^[8]。因此笔者并未考察pH值对溶解度的影响,但碱性溶剂会加速二氢杨梅素的降解^[9-10]。故碱性溶液并不利于工业化提纯二氢杨梅素。

图1 二氢杨梅素溶解度变化规律
A.水溶液中随温度变化;B.乙醇溶液中随乙醇体积比的变化

Fig.1 Variation curves of dihydromyricetin solubility
A.variation of water solution versus temperature;B.variation of ethanol solution versus the volume ratio of ethanol

2.2 重结晶工艺设计

取溶剂500 mL升温至一定温度,加入二氢杨梅素5.00 g溶解。加入一定量的活性炭吸附,记录活性炭的吸附时间。抽滤,弃去滤渣。将滤液置室温下冷却24 h析晶,抽滤,弃去滤液,将粉末平铺于蒸发皿中,置60 ℃烘箱中干燥72 h。具体条件见表1。

表1 二氢杨梅素纯化工艺实验
Tab.1 Experiment design for the purified process of dihydromyricetin

编号	乙醇浓度/%	温度/ ℃	活性炭用量/%	吸附时间/min	收率/ %	含量/ %
1	0	50	0.3	3	24.0	98.58
2	0	62	0.1	1	40.6	98.13
3	0	62	0.3	3	54.0	98.24
4	0	86	0.3	1	75.0	96.27
5	0	88	0.1	3	78.0	97.01
6	20	62	0.1	3	79.8	97.13
7	20	62	0.3	1	73.2	98.11
8	20	78	0.1	1	79.4	95.67
9	20	78	0.3	3	73.4	96.26

表1 二氢杨梅素纯化工艺实验

Tab.1 Experiment design for the purified process of dihydromyricetin

2.3 收率测定

投料量为结晶前加入二氢杨梅素的量,M为冷却结晶烘干后的质量。通过(M/投料量)×100%计算得收率。

2.4 含量测定

2.4.1 色谱条件采用Agilent TC-C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸水溶液(32:68)为流动相进行测定,检测波长为290 nm,柱温30 ℃,流速0.8 mL·min^-1。

2.4.2 线性关系考察精密称取二氢杨梅素工作对照品6.15 mg,置25 mL棕色量瓶,加1%甲酸甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀。分别精密量取上述溶液0.5,1.0,2.0,3.0,5.0 mL,置10 mL棕色量瓶,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成浓度为12.30,24.60,49.20,73.80及123.00 μg·mL^-1的二氢杨梅素溶液。分别精密吸取10 μL进样,按“2.4.1”项下色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标(Y),对照品溶液浓度为横坐标(X),绘制标准曲线,得回归方程Y=39.472X+58.306,r=0.999 8。结果表明,二氢杨梅素在12.30~123.00 μg·mL^-1范围内,其浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.3 精密度实验精密吸取对照品溶液10 μL,重复进样5次,按“2.4.1”项下色谱条件测定峰面积,结果二氢杨梅素平均峰面积为2 021.85,RSD为0.35%,小于2%,表明仪器的精密度良好。

2.4.4 收率及含量测定结果测得收率和含量数据见表1,利用JMP软件对收率进行筛选设计可得各效应对比表(表2)和效应半正态图(图2)。由图2可知温度、乙醇浓度以及温度和乙醇浓度的交互作用均对收率具有显著影响。结合实验现象可知,温度显著影响收率的原因在于:当温度下降时,二氢杨梅素在水中的溶解度急剧下降,使得二氢杨梅素从溶剂中析出,在第一次过滤时大量二氢杨梅素固体被弃去,进而导致二氢杨梅素的收率较低。因此在水中重结晶二氢杨梅素必须对温度加以控制,并且使溶剂维持较高温度下过滤。但维持较高温度,需要消耗较多的热量,且长时间加热会导致二氢杨梅素降解,故单纯使用水作为溶剂时,该工艺需要在高温下迅速过滤以避免收率过低、原料结构改变或降解。乙醇浓度能够显著影响二氢杨梅素收率的原因在于:加入少量的乙醇能够大幅提高二氢杨梅素的溶解度,使第一次过滤时二氢杨梅素的损失较低。但乙醇浓度并非越高越好,较高的乙醇浓度不仅浪费有机溶剂,增加了回收有机溶剂的工作,还会使大量二氢杨梅素残留于溶剂中,导致产率下降。当使用乙醇作为溶剂时,温度变化并未显著改变收率,在所有温度下均能使单次收率在73%以上。在后续工艺中降低乙醇浓度至10%,收率仍然稳定在70%以上。由此可见,这一工艺中温度变化对收率的影响并不明显,具有稳健性,其他因素如活性炭用量和吸附时间在本研究的变化范围内均对收率无显著影响,因此二氢杨梅素结晶工艺设计中溶剂种类和温度是关键工艺参数。

图2 二氢杨梅素纯化工艺中各因素对收率的半正态图

Fig.2 Half normal plot of yield versus factors for the purified process of dihydromyricetin

因素	对比	Lenth t比率	个体 P值	联合 P值
温度	13.485 5	6.02	0.006 0	0.026 6
乙醇浓度	10.780 1	4.81	0.011 8	0.051 4
活性炭	-1.050 0	-0.47	0.693 4	1.000 0
吸附时间	0.716 1	0.32	0.785 8	1.000 0
温度/温度	-1.817 2	-0.81	0.375 5	0.995 5
温度/乙醇浓度	-6.647 9	-2.97	0.029 5	0.148 7
温度/活性炭	-1.169 5	-0.52	0.654 5	1.000 0
乙醇浓度/活性炭	-3.112 6	-1.39	0.155 6	0.680 2

表2 二氢杨梅素纯化工艺收率效应筛选各因素对比

Tab.2 Comparison of yield effects on various factors for the purified process of dihydromyricetin

2.5 纯度检查

采用高效液相色谱法和薄层色谱法对其纯度进行检查。高效液相色谱条件同“2.4.1”项;薄层色谱法为:取二氢杨梅素重结晶样品适量,溶于乙醇,在硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:8:4)为展开剂,展开,晾干,置紫外灯(295 nm)下检视。对纯度进行筛选设计可得各效应对比表(表3)和效应半正态图(图3)。由此可知,在以上因素设定的考察水平范围内,温度是唯一能够显著影响二氢杨梅素纯度的因素,随着温度升高二氢杨梅素纯度下降,这一结果与二氢杨梅素在溶液中的稳定性有关。另外为验证高效液相色谱法的结果,同时比较两种溶剂间杂质的不同,采用薄层色谱法验证两种溶剂间是否存在差异,结果见图4,5。由图5可知,纯度较低的二氢杨梅素在薄层色谱图中出现额外的绿色斑点,高效液相色谱图中也出现杂质峰,二者结果一致。结果表明,乙醇溶液重结晶的除杂质效果不如水溶液重结晶,若二氢杨梅素中存在杂质可采用水溶液重结晶除去。

图3 二氢杨梅素纯化工艺中温度对收率的半正态图

Fig.3 Half normal plot of yield versus temperature for the purified process of dihydromyricetin

图4 二氢杨梅素HPLC色谱图
A.二氢杨梅素原料;B.20%乙醇冷却结晶;C.水中冷却结晶

Fig.4 HPLC of dihydromyricetin
A.raw material of dihydromyricetin;B.cooling crystallization from 20%ethanol aqueous;C.cooling crystallization from water

图5 二氢杨梅素薄层色谱图(展开温度26 ℃,湿度48%)
a,e.20%乙醇冷却结晶;b,c.水中冷却结晶;d.原料1

Fig.5 TLC of dihydromyricetin(temperature:26 ℃,relative humidity:48%)
a,e.cooling crystallization from 20%ethanol;b,c.cooling crystallization from water;d.raw material 1

因素	对比	Lenth t比率	个体 P值	联合 P值
温度	-0.793 913	-2.31	0.039 5	0.219 6
乙醇浓度	-0.411 465	-1.20	0.194 4	0.823 1
活性炭	0.055 414	0.16	0.894 1	1.000 0
吸附时间	0.026 179	0.08	0.951 4	1.000 0
温度/温度	-0.052 171	-0.15	0.899 3	1.000 0
温度/乙醇浓度	-0.250 015	-0.73	0.442 2	1.000 0
温度/活性炭	-0.216 482	-0.63	0.562 5	1.000 0
乙醇浓度/活性炭	0.242 055	0.70	0.465 2	1.000 0

表3 二氢杨梅素纯化工艺纯度效应筛选各因素对比

Tab.3 Comparison of purity effects of various factors for the purified process of dihydromyricetin

2.6 晶型确证

为验证20%的乙醇用量是否导致二氢杨梅素结晶的晶型改变,采用粉末X射线衍射分析(powder X-ray diffractometry,PXRD)、差示量热扫描法(differential scanning calorimetry,DSC)和热重分析法(thermogravimetric analysis,TGA)法对原料及溶剂中冷却结晶获得二氢杨梅素粉末进行测定。

2.6.1 PXRD 粉末X射线衍射是固态分析技术中常用且能够快速有效分辨多晶型的技术。本实验中靶为Cu-Kα辐射,波长1.540 6 Å,管电压为40 kV,管电流40 mA,步长0.02°,每步时间为0.2 s,扫描范围为5°~45°。

2.6.2 热分析法 DSC:取样品3~5 mg 装入密封的金属铝制坩埚中,氮气流速为50 mL·min^-1,升温范围为0~300 ℃,升温速度为5 ℃·min^-1。TGA:取样品5~10 mg加入敞口的金属铝制坩埚中,升温范围为室温~500 ℃,升温速度为10 ℃·min^-1。

PXRD结果如图6。由图6可知,20%乙醇中冷却结晶的固体与文献[10]报道消旋的二水合物XRD一致,表明其立体构型中分子排布基本相同。热分析作为验证其是否为二水合物的重要手段,DSC和TGA结果见图7。由图7中DSC结果可知,重结晶产物在约70℃时开始失去水分子,且失去两分子结晶水的阶段并不明显,熔点为254.20 ℃与已发表的二氢杨梅素消旋二水合物的结果类似。由图7中TGA结果可知,重结晶产物在约70 ℃时开始减失重量,至120 ℃时失重达到9.98%,对应两分子结晶水理论值10.11%。由此可知20%的乙醇溶液中冷却结晶条件下并未产生新的晶型,产物仍为常温下最为稳定的消旋二氢杨梅素二水合物。

图6 二氢杨梅素粉末X射线衍射图
A.水中冷却结晶;B.20%乙醇冷却结晶;C.原料1;D.文献结果[10]模拟

Fig.6 PXRD of dihydromyricetin
A.cooling crystallization from water;B.cooling crystallized by 20% ethanol;C.raw material 1;D.simulation of reference 10

图7 二氢杨梅素热分析结果

Fig.7 Result of thermal analysis on dihydromyricetin

2.7 统计分析结果

当存在多个因素影响结果时,对各个因素的效应分析常采用单因素考察或正交设计,但前者实验次数多且不能考察各个因素间的交互作用,后者则在固定各个水平后失去了实验的灵活性^[11]。为更好的分析各因素对结果的影响,采用JMP 9.0(SAS)软件对结果进行效应筛选分析和绘图,实现对多因素水平随机变化时的效应分析。

3 讨论

在二氢杨梅素结晶纯化过程中,溶剂种类、溶解温度、活性炭用量、吸附时间、冷却时间等均可能影响最终产物的性质。

在设计药物重结晶纯化工艺时,应充分利用药物在溶液中的稳定性和溶解度数据。在二氢杨梅素冷却结晶工艺设计中,根据溶液稳定性结果,选择中性或酸性溶剂,最高升温至约90 ℃,且需在保证收率的条件下尽量缩短加热时间。根据其溶解度结果,水溶液中升温至60 ℃即可提高溶解度(×10),20%乙醇即提高溶解度(×5),但考虑到过高的乙醇浓度和温度均会导致乙醇大量挥发,不利于工业化生产,因此在设计实验时应选择合适的乙醇浓度和温度范围。

药物多晶型现象是具有相同结构的分子在固体状态下存在的不同排列结构,多晶型常使得药物熔点、溶解度、溶出速度、稳定性、机械性质和生物利用度不同^[12]。根据2015年版《中华人民共和国药典》中药品晶型研究及晶型质量控制指导原则规定^[13],水合物和溶剂合物也列入多晶型的范畴。导致药物多晶型的原因主要包括:溶剂、冷却速度、挥发速度、超饱和度、杂质含量和搅拌速率等,其中溶剂为最主要的影响因素。在已发表的文献中,水中冷却结晶获得的二氢杨梅素为消旋的二水合物,乙醇中挥发结晶得到的是消旋的一水合物^[14]。故笔者采用PXRD、DSC和TGA法对原料及不同溶剂中冷却结晶获得的二氢杨梅素粉末的晶型进行测定和比较。

根据筛选实验结果可知:①以水为溶剂进行冷却结晶时,应严格控制温度,温度骤降会导致产率急剧下降,单次提纯产率可能小于25%。②加入少量乙醇(10%乙醇溶液)即可大幅提高产率,且产率受温度影响较小,稳定在70%以上。③过高的温度对应较低的纯度。④在本实验考察范围内,活性炭用量(0.1%~0.3%)和吸附时间(1~3 min)对纯度和收率的影响较小。

即当乙醇浓度小于10%,溶剂温度大于85 ℃,活性炭用量为0.1%~0.3%,吸附时间为1~3 min时,重结晶所得二氢杨梅素收率大于70%,含量大于98%,晶型不变,工艺稳健,产率受温度影响较小,适合在工业生产中使用。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

View Option

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[6]	SUN C C.Materials science tetrahedron a useful tool for pharmaceutical research and development[J].J Pharm Sci,2009,98(5):1671-1687. The concept of materials science tetrahedron (MST) concisely depicts the inter-dependent relationship among the structure, properties, performance, and processing of a drug. Similar to its role in traditional materials science, MST encompasses the development in the emerging field of pharmaceutical materials science and forms a scientific foundation to the design and development of new drug products. Examples are given to demonstrate the applicability of MST to both pharmaceutical research and product development. It is proposed that a systematic implementation of MST can expedite the transformation of pharmaceutical product development from an art to a science. By following the principle of MST, integration of research among different laboratories can be attained. The pharmaceutical science community as a whole can conduct more efficient, collaborative, and coherent research. 2008 Wiley-Liss, Inc. and the American Pharmacists Association J Pharm Sci 98:1671-1687, 2009 DOI:10.1002/jps.21552 PMID:18781623 URL [本文引用:1]
[7]	GLODEK M,LIEBOWITZ S,MCCARTHY R,et al.Process robustness-a PQRI white paper[J].Pharm Eng,2006,26(6):1-11. Michael Glodek, Merck & Co. Stephen Liebowitz, Bristol-Myers Squibb Randal McCarthy, Schering Plough Grace McNally, FDA Cynthia Oksanen, Pfizer Thomas Schultz, Johnson&Johnson Mani Sundararajan, AstraZeneca Rod Vorkapich, Bayer Healthcare Kimberly Vukovinsky, DOI:10.1002/9780470595886.ch32 URL [本文引用:1]
[8]	RUAN L P,YU B Y,FU G M,et al.Improving the solubi-lity of ampelopsin by solid dispersions and inclusion complexes[J].J Pharm Biom Ann,2005,38(3):457-464. [本文引用:1]
[9]	林淑英,高建华,郭清泉,等.二氢杨梅素的稳定性及其影响因素[J].无锡轻工大学学报,2004,23(2):17-20,44. [本文引用:1]
[10]	XU Z,LIU B,NING Z,et al.Racemic dihydromyricetin di-hydrate[J].Act Crystall Sec E:Stracture Reports Online,2007,63(11):4384-4384. [本文引用:1]
[11]	CUI Y,SONG X,REYNOLDS M,et al.Interdependence of drug substance physical properties and corresponding quality control strategy[J].J Pharm Sci,2012,101(1):312-321. In quality by design (QbD) paradigm, specifications on active pharmaceutical ingredients (APIs) are a critical component of the overall control strategy to ensure drug product quality. In establishing appropriate specifications for highly correlated API properties, multivariate specifications were advocated recently (Duchesne C, MacGregor JF. 2004. J Qual Technol 36:78-94). In this text, we reviewed several scenarios where API properties are of varying degrees of intercorrelation, and discussed the corresponding control strategies. One scenario was further analyzed, in which high degree of property intercorrelation could afford a single univariate specification and, thereby, simplify the control strategy. In the case study provided, we first mapped the potential design space of the API physical properties, and subsequently compared the effectiveness of univariate and multivariate control strategies. On the basis of the comparison, a single univariate control scheme was proposed and boundary was defined. Finally, width of the design space for API physical properties was assessed, and the effectiveness of the API manufacturing process control was preliminarily evaluated. DOI:10.1002/jps.22754 PMID:21918985 URL [本文引用:1]
[12]	PERUMALLA S R,SUN C C.Enabling tablet product dev-elopment of 5-fluorocytosine through integrated crystal and particle engineering[J].J Pharm Sci,2014,103(4):1126-1132. The antifungal drug, 5-fluorocytosine (FC), is marketed as a capsule (250 or 500 mg strength) instead of the preferred tablet dosage form. Through systematic characterization of solid-state properties, including mechanical properties, we identify tabletability and poor physical stability of FC as the problems that likely have prevented the successful development of a FC tablet product. We then design an FC oxalate 2:1 salt (FCOXA21), based on established relationship between crystal structure and properties, to address these deficient properties. FCOXA21 is subsequently used to develop a direct compression tablet product using predictive and material-sparing powder characterization tools, that is, ring shear cell for powder flowability and compaction simulator for powder tabletability. The initial tablet formulation, which contains 84.5% (wt %) FCOXA21, exhibits excellent tabletability but inadequate flowability. We solve the powder flowability problem through controlling the particle size of FCOXA21. A batch of FCOXA21 tablets (500 mg FC equivalent dose) is then prepared. Finally, systematic evaluation on tablet weight variation, content uniformity, friability, and dissolution using standard methods confirms the commercial manufacturability of FC tablets. Through this work, we have demonstrated the potential of integrated crystal and particle engineering in expediting the development of tablet products of challenging drugs using the economical direct compression process. DOI:10.1002/jps.23876 PMID:24515970 URL [本文引用:1]
[13]	洪小栩,许华玉,尚悦,等.2015年版《中华人民共和国药典》四部增修订概况[J].中国药学杂志,2015,50(20):1782-1786. [本文引用:1]
[14]	方建国,王文清,施春阳,等.二氢杨梅素五种不同晶型物质.201410715828.[P] [本文引用:1]

二氢杨梅素上调SIRT1信号通路改善HepG2细胞甘油三酯蓄积

2016

... 二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)是一种具有抗炎、抗菌、抗氧化、降血压、保肝^[1]和诱导癌细胞凋亡^[2-3]等广泛药理作用的黄酮醇类化合物^[4],其提取和纯化方法已有多篇文献报道.纯化方法主要有结晶法和层析法,其中利用DMY在水中溶解度随温度变化较大而设计的冷却结晶法最为常用,层析法则采用凝胶色谱、吸附色谱、离子交换树脂技术、高效液相色谱制备以及逆流色谱制备等技术^[5].由于结晶法工艺简单,操作方便,易于大规模制备,是最有利于工业化生产的方法.但从工业化纯化原料药角度考虑,文献报道的结晶纯化工艺研究还存在以下问题:未阐明溶剂对晶型的影响;未考察溶解度和溶液稳定性对收率和纯度的影响;忽视工业化生产中各因素水平可能发生的变化,缺乏对工艺稳健性的考察.工业化生产需要综合考虑产物的晶型、粉末性质、收率、纯度和工艺稳健性等因素^[6-7],但在二氢杨梅素的纯化研究中,笔者未见相关报道.笔者在本研究中依据二氢杨梅素的溶解度及溶液稳定性设计冷却结晶工艺,利用筛选设计考察结晶工艺中关键参数:温度、乙醇用量、活性炭用量及吸附时间等对获得产品收率、纯度和晶型的影响. ...

二氢杨梅素通过抑制甲基转移酶诱导人乳腺癌MCF-7细胞PTEN基因去甲基化

2014

二氢杨梅素对肺癌A549细胞凋亡的作用

2015

二氢杨梅素药理作用研究进展

2015

二氢杨梅素的分离研究进展

2008

Materials science tetrahedron a useful tool for pharmaceutical research and development

2009

Process robustness-a PQRI white paper

2006

Improving the solubi-lity of ampelopsin by solid dispersions and inclusion complexes

2005

... 采用摇瓶法测定溶解度,将过量二氢杨梅素固体加入10 mL溶剂中,控制温度,搅拌12 h后,使用紫外-可见分光光度计测定其含量,测定波长为290 nm.根据测得的溶解度曲线(图1A)可知,二氢杨梅素溶解度随温度变化较大,水溶液温度为60 ℃时溶解度约为25 ℃时溶解度的10倍,由此在设计结晶实验时,将溶剂初始温度范围设定在>60 ℃,以减少水用量,加快药物溶解.另根据二氢杨梅素溶解度在乙醇溶液中随乙醇体积比例变化的规律(图1B),笔者发现当乙醇浓度达到20%时,溶解度即可提高5倍.由于在纯化过程中过高的乙醇浓度会造成有机溶剂损失,因此在后续的设计中,将乙醇用量的最大值设定在20%.此前已有文献报道二氢杨梅素的溶解度基本不受pH值影响^[8].因此笔者并未考察pH值对溶解度的影响,但碱性溶剂会加速二氢杨梅素的降解^[9-10].故碱性溶液并不利于工业化提纯二氢杨梅素. ...

二氢杨梅素的稳定性及其影响因素

2004

Racemic dihydromyricetin di-hydrate

2007

Interdependence of drug substance physical properties and corresponding quality control strategy

2012

... 当存在多个因素影响结果时,对各个因素的效应分析常采用单因素考察或正交设计,但前者实验次数多且不能考察各个因素间的交互作用,后者则在固定各个水平后失去了实验的灵活性^[11].为更好的分析各因素对结果的影响,采用JMP 9.0(SAS)软件对结果进行效应筛选分析和绘图,实现对多因素水平随机变化时的效应分析. ...

Enabling tablet product dev-elopment of 5-fluorocytosine through integrated crystal and particle engineering

2014

... 药物多晶型现象是具有相同结构的分子在固体状态下存在的不同排列结构,多晶型常使得药物熔点、溶解度、溶出速度、稳定性、机械性质和生物利用度不同^[12].根据2015年版《中华人民共和国药典》中药品晶型研究及晶型质量控制指导原则规定^[13],水合物和溶剂合物也列入多晶型的范畴.导致药物多晶型的原因主要包括:溶剂、冷却速度、挥发速度、超饱和度、杂质含量和搅拌速率等,其中溶剂为最主要的影响因素.在已发表的文献中,水中冷却结晶获得的二氢杨梅素为消旋的二水合物,乙醇中挥发结晶得到的是消旋的一水合物^[14].故笔者采用PXRD、DSC和TGA法对原料及不同溶剂中冷却结晶获得的二氢杨梅素粉末的晶型进行测定和比较. ...

2015年版《中华人民共和国药典》四部增修订概况

2015