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美国《化学文摘》《国际药学文摘》
《乌利希期刊指南》
WHO《西太平洋地区医学索引》来源期刊
日本科学技术振兴机构数据库（JST）
第七届湖北十大名刊提名奖
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, 姜红, 赵亚萍
目的 建立顶空毛细管气相色谱法,同时测定苯甲酸利扎曲普坦原料中甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶和甲苯等7种有机溶剂残留量的方法。方法 以
曲普坦类药物是治疗偏头痛急性发作的特效药,苯甲酸利扎曲普坦作为第 2 代曲普坦类药物,通过激动 5-HT1B/1D受体而发挥作用。由于 5-HT1B/1D受体在脑部分布广泛,苯甲酸利扎曲普坦具有起效快、疗效好及应用范围广等特点,同时其作用途径多样、副作用小、性价比优良[1]。原料的合成过程中,不可避免地要使用并残留一定量的有机溶剂。根据人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)的指导原则及分类,必须对这些残留溶剂加以控制,以保证用药安全。《中华人民共和国药典》2015年版[2] 要求对苯甲酸利扎曲普坦原料中甲醇、二氯甲烷、吡啶、甲苯等4种有机溶剂的残留量进行考察。本实验结合苯甲酸利扎曲普坦合成过程[3]中使用的甲醇、乙酸乙酯、甲苯、二氯甲烷、丙酮、吡啶及精制的过程中用到的乙醇,共7种有机溶剂,参照《中华人民共和国药典》[4]的要求和限度,建立了一个较为系统、全面的方法,来严格控制该药品中上述7种有机溶剂残留量。
气相色谱仪:配有FID检测器的Thermo Trace 3000气相色谱仪(配顶空进样器,美国Thermo公司);XP205型电子分析天平(瑞士Mettler公司,感量:0.1 mg)。
苯甲酸利扎曲普坦原料(欧立制药有限公司,批号:140301,140101,140402;扬子江药业集团,批号:301,501,601)。甲醇(批号:20151216)、乙醇(批号:20151216)、丙酮(批号:20120306)、二氯甲烷(批号:20150605)、乙酸乙酯(批号:T20111118)、吡啶(批号:20150425)和甲苯(批号:20140611),上述试剂均为分析纯,购自国药集团化学试剂有限公司;
色谱柱:DB-624毛细管柱 (30 m×0.32 mm,1.8 μm);柱温:起始温度为40 ℃,维持5 min,以每分钟10 ℃的速率升温至80 ℃,维持10 min;再以每分钟30 ℃的速率升温至200 ℃,维持2 min。载气为氮气,柱流速 1.0 mL· min -1 ;分流进样,分流比为20:1;进样口温度:200 ℃;进样体积:1 000 μL;FID检测器,温度 250 ℃;定量环温度:90 ℃,传输线温度:100 ℃ 。
2.2.1 对照品溶液的制备 取甲醇0.3 g,乙醇和丙酮各0.5 g,二氯甲烷0.06 g,乙酸乙酯0.5 g,吡啶0.02 g,甲苯0.089 g对照品,分别置于50 mL量瓶中,精密称定,用DMF溶解并稀释至刻度作为对照品贮备液;各量取5 mL置同一100 mL量瓶中,用DMF稀释成浓度分别为:0.3,0.5,0.5,0.06,0.5,0.02,0.089 mg·mL-1的对照品溶液;取苯甲酸利扎曲普坦原料0.2 g,置20 mL顶空瓶中,精密加入对照品溶液2 mL,密封,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取苯甲酸利扎曲普坦原料0.2 g,精密称定,置20 mL顶空瓶中,精密加入DMF溶液2 mL溶解,密封,即得。
顶空平衡温度应根据供试品中残留溶剂的沸点选择,但要兼顾供试品的热分解特性,避免供试品的降解影响测定结果准确性及挥发性降解产物对测定的干扰。
本实验固定顶空平衡时间为30 min,取“2.2.1”项的对照品溶液,分别于60,70,80,90 ℃,按照“2.1” 项的条件进行测定,记录7种组分响应值(色谱峰面积),结果见
可见,随着温度升高,7种组分的响应值均呈现先升高后下降的趋势,且在80 ℃达到最大,因此选择80 ℃作为顶空平衡温度。
顶空平衡时间要保证供试品气-液两相达到平衡,但不宜过长,否则可能导致顶空瓶气密性变差,影响分析结果准确性。
本实验顶空平衡温度为80 ℃,取“2.2”下对照品溶液,分别平衡20,30,40 min,按照“2.1” 项的条件进行分析,记录7种溶剂组分响应值(色谱峰面积),结果见
可见,在顶空平衡温度为80 ℃时,平衡30 min,有4种溶剂的峰面积达到最大,因此选择顶空平衡时间为30 min。
取“2.2.1” 项的对照品溶液,按照上述色谱条件进行分析,记录色谱图。结果DMF对被测各组分无干扰,理论板数均不低于5 000,且相邻两组分色谱峰之间的分离度均大于1.5。
精密量取2 mL对照品溶液6份,分别置于20 mL顶空瓶中,按上述色谱条件测定,结果对照品溶液中甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶和甲苯峰面积RSD值分别为1.56%,1.06%,0.65%,1.28%,0.41%,2.99%和1.23%。
精密量取“2.2.1”项的各对照品储备液1,3,5,7,10 mL分别置100 mL量瓶中,用DMF稀释至刻度,摇匀,得到系列混合标准溶液。按上述色谱条件分别测定后,以各目标峰面积(
表1 7种溶剂线性及回归方程
精密量取对照品储备液4.0,5.0,6.0 mL,置100 mL量瓶中,用DMF溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,即制成相当于对照品溶液80%,100%,120%的溶液;精密称取苯甲酸利扎曲普坦原料共9份(约0.2 g),分别置20 mL顶空瓶中,均分为3份,精密加入回收系列测试溶液2 mL,密封。按上述色谱条件测定,结果甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶和甲苯的平均回收率分别为100.54%,105.71%,88.63%,98.70%,89.03%,101.22%,83.53%;RSD分别为2.46%,3.30%,2.88%,2.84%,2.28%,3.19%和3.34%。
取“2.2”项的对照品贮备液,分别加稀释剂逐级稀释成一系列不同浓度的溶液,按上述色谱条件进样分析,甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶、甲苯的检测限(
精密称取苯甲酸利扎曲普坦2个厂家各3批原料约0.2 g,置20 mL顶空瓶中,再加DMF 2 mL溶解,按上述色谱条件进样,记录色谱图。按标准加入法以峰面积计算,结果欧立制药有限公司3个批次(批号:140301,140401,140402)苯甲酸利扎曲普坦原料中乙醇含量分别为0.04%,0.10%,0.05%;扬子江药业集团3个批次(批号:301,501,601)苯甲酸利扎曲普坦原料中乙醇含量分别为0.11%,0.08%,0.07%;6批样品中均未检出甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶、甲苯等。
本次实验考察的7种溶剂的沸点均不高,故采用顶空进样的方法使样品中待测有机溶剂挥发后直接进样,前处理简单,且避免了非挥发性物质对毛细管柱和进样口的污染。顶空气相色谱法应首选水作为溶剂,但实验研究发现,以水作溶剂时,二氯甲烷和甲苯不能完全溶解,对照品溶液中这两种组分的测定结果重复性差;当以50%DMF溶液作溶剂时,对照品溶液中各组分色谱峰峰面积重复性均不佳;而选择DMF作为稀释溶剂,则可获取良好的重复效果。
基质效应指顶空分析时由于对照品溶液和供试品溶液的组成不同,使待测挥发性组分在气液两相间的分配系数不同而引起的定量误差[5]。回收实验发现,对照溶液中不加入样品,则乙酸乙酯平均回收率结果偏低,为76.34%;乙醇平均回收率结果偏高,为129.49%,且RSD较大。说明苯甲酸利扎曲普坦作为基质会影响测定结果的准确性,即存在基质效应。因此,对照品溶液配制时,应加入与测定量相同样品,以确保所建方法测定结果的准确度。
本实验所建立的苯甲酸利扎曲普坦原料中残留溶剂的检测方法全面、简单而准确,基本上涵盖了该原料不同生产工艺所使用的有机溶剂,适用于不同生产企业及有关检测机构对该药进行质量控制。
The authors have declared that no competing interests exist.
