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医药导报
医药导报, 2018, 37(9): 1043-1047
doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2018.09.003
柴葛疏表颗粒对脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响
Effects of Chaige Shubiao Granules on Secretion of Inflammatory Factors from Lipopolysaccharide-induced RAW264.7 Cells
吕晓君, 周素文
湖北省药品监督检验研究院,武汉 430064
LYU Xiaojun,, ZHOU Suwen
Hubei Institute for Drug Control,Wuhan 430064,China

作者简介 吕晓君(1983-),女,湖北钟祥人,副主任药师,硕士,主要研究方向:药理毒理。电话:027-87271327,E-mail:lvxiaojunwhu@foxmail.com。
中图分类号: R286;R965     文献标识码: A     文章编号: 1004-0781(2018)09-1043-05
摘要:

目的 观察柴葛疏表颗粒对脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响。方法 建立脂多糖诱导的RAW264.7细胞体外炎症模型,采用噻唑蓝(MTT) 法检测柴葛疏表颗粒的细胞毒性作用,Griess法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)分泌量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β含量。结果 柴葛疏表颗粒在12.5~50.0 μg·mL-1 的浓度范围内对RAW264.7细胞活力无显著影响(P>0.05);脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β(P<0.01),25.0,50.0 μg·mL-1 柴葛疏表颗粒可显著抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放NO (P<0.01),12.5,25.0,50.0 μg·mL-1 的柴葛疏表颗粒可浓度依赖性地抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-1β。结论 柴葛疏表颗粒可抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎症因子NO、TNF-α和IL-1β有关。
关键词: 柴葛疏表颗粒 ; 脂多糖 ; RAW264.7细胞 ; 炎症因子

Abstract:

Objective To observe the effects of Chaige Shubiao granules on the secretion of inflammatory factors in lipopolysaccharide (LPS)-induced murine RAW264.7 macrophages. Methods The inflammation model was established using LPS-induced RAW264.7 cells in vitro. The cytotoxicity of Chaige Shubiao granules was measured by MTT method. Griess assay was performed to measure the released nitric oxide (NO) in the culture supernatant,and ELISA method was applied to detect the contents of TNF-α and IL-1β. Results Chaige Shubiao granules exhibited no significant effect on RAW264.7 cell viability at 12.5-50.0 μg·mL-1 concentrations (P>0.05). The secretion of NO,TNF-α and IL-1β from LPS-induced RAW264.7 cells were significantly increased,respectively (P<0.01). Chaige Shubiao granules (25.0,50.0 μg·mL-1) could significantly inhibit NO release in RAW264.7 cells stimulated by LPS (P<0.01). Chaige Shubiao granules (12.5,25.0,50.0 μg·mL-1) could also inhibit TNF-α and IL-1β secretion in LPS stimulated RAW264.7 cells in a concentration-dependent manner. Conclusion Chaige Shubiao granules exert anti-inflammtory effects in LPS-induced RAW264.7 cells,which might be mediated by decreasing the inflammatory factors such as NO,TNF-α and IL-1β.
Key words: granule ; Lipopolysaccharide ; RAW264.7 cell ; Inflammatory factor

柴葛疏表颗粒由柴胡、连翘、葛根、黄芩、桔梗、板蓝根、羌活等7味中药组成,具有疏风解表、清热解毒功效。临床上可用于治疗风热感冒,症见发热、头痛、咳嗽、咽痛、黄痰、口干、舌苔薄黄、脉浮数等。笔者在前期的药理实验结果表明,柴葛疏表颗粒在一些整体动物炎症模型中表现出较强的抗炎作用,能够抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶所致的大鼠足趾肿 [1,2]。脂多糖(lipopolysaccharide) 是革兰阴性菌细胞壁的主要成分,是临床上革兰阴性细菌引发败血症的主要原因。脂多糖活化的小鼠RAW264.7 巨噬细胞炎症模型被广泛用于研究炎症反应。巨噬细胞在脂多糖的刺激下,可诱导一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β等多种炎症因子的迅速合成与释放[3,4]。因此,本实验以脂多糖刺激的RAW264.7细胞为模型,观察柴葛疏表颗粒对RAW264.7细胞释放NO、TNF-α、IL-1β等炎症因子影响,进一步在细胞水平上探讨柴葛疏表颗粒的抗炎作用及其相关机制。

1 材料与方法
1.1 细胞株

小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞购于中国典型培养物保藏中心。在37 ℃、5%二氧化碳(CO2)条件下,用细胞培养液[含10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、100 U·mL-1链霉素的达尔伯克改良伊格尔(DMEM)高糖培养基]培养,0.25%胰酶消化液消化,传代。实验用细胞均处于对数生长期。

1.2 受试药物和试剂

柴葛疏表颗粒干浸膏,由武汉双龙药业有限公司提供,批号20130603。含量:每克浸膏相当于生药3.51 g,有效成分为黄岑苷(70.3 mg·g-1)、葛根素(40.4 mg·g-1)、连翘苷(9.2 mg·g-1)。DMEM高糖培养基(Gibco公司,批号907039);胎牛血清(Gibco公司,批号7685959);胰酶(Amresco公司,批号BE2185);脂多糖(Sigma公司,批号L2880);地塞米松(Sigma公司,批号120901);噻唑蓝(MTT,Duchefa公司,批号BS0880);NO试剂盒(碧云天生物技术研究所,批号S0021);TNF-α检测试剂盒(批号BPE10416R),IL-1β检测试剂盒,批号BPE10869R,均购自上海拜力生物科技有限公司。受试药物、脂多糖、地塞米松在临用前用细胞培养液稀释至所需浓度,过滤除菌备用。

1.3 仪器

XDS-1B倒置光学显微镜(重庆光电仪器公司);VS-1300L-U超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司);二氧化碳培养箱(美国SHEL-LAB公司);TC20细胞计数仪(美国BIO-RAD公司);ELX800酶标仪(美国BIOTEK公司);3K15台式冷冻离心机(德国Sigma公司)。

1.4 对RAW264.7细胞活力的影响(MTT法)

将RAW264.7细胞制备为2×104个·mL-1的细胞悬液,每孔100 μL,接种至96孔板,置37 ℃、5% CO2培养24 h,细胞贴壁后,弃去上清液,将含不同浓度药物的细胞培养液加入细胞板。共设11组:空白对照组(只加入细胞培养液)、脂多糖组(加入终浓度为1 μg·mL-1的脂多糖溶液)、地塞米松组(加入终浓度为10 μg·mL-1的地塞米松溶液)、柴葛疏表颗粒各处理组(按浸膏计算,终浓度分别为1600,800,400,200,100,50,25,12.5 μg·mL-1),每组设6个复孔,每孔100 μL。37 ℃、5%CO2培养24 h,每孔加入5 g·L-1MTT 溶液20 μL,继续培养4 h,弃去上清液,加入DMSO溶液150 μL充分溶解,用酶标仪在检测波长570 nm和参比波长630 nm下测定吸光度,各组细胞活力(%)=给药组吸光度/空白对照组吸光度× 100%。以最大无毒浓度为起始浓度,倍比稀释3个浓度进行后续实验。

1.5 对脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响(Griess法[5])

将RAW264.7细胞按2×105·mL-1稀释,每孔100 μL,接种入96孔细胞培养板,37 ℃、5%CO2培养24 h,弃去上清液,分为6组:空白对照组(只加入细胞培养液)、脂多糖组(加入终浓度为1 μg·mL-1的脂多糖)、地塞米松组(同时加入终浓度为10 μg·mL-1的地塞米松和1 μg·mL-1的脂多糖)、柴葛疏表颗粒3个处理组(同时加入不同浓度的受试物和1 μg ·mL-1的脂多糖),每组设3个复孔,每孔200 μL。37 ℃、5%CO2培养24 h,收获细胞上清液,每孔吸取培养液上清液50 μL至另一96孔板,加入等体积的Griess试剂,按试剂盒说明书操作测定各组NO含量。实验重复3次,并进行组间比较,计算抑制率(%)= (脂多糖组NO含量-药物组NO含量) / (脂多糖组NO含量-空白对照组NO含量)× 100%。

1.6 对脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α、IL-1β的影响(ELISA法)

上述“1.5”项实验中吸出上清液50 μL后的培养板中,每孔再吸取上清液50 μL,收集各组的细胞上清液,于4 ℃、3000 r·min-1 离心15 min,吸取上清液,采用ELISA法检测TNF-α、IL-1β的含量,操作步骤严格按照试剂盒所附说明书进行。实验重复3次,并进行组间比较,按照“1.5”项方法计算抑制率(%)。

1.7 对脂多糖刺激后RAW264.7细胞的毒性作用(MTT法)

上述“1.6”项实验中吸出上清液后剩余100 μL的培养板中,同前法:每孔加入5 g·L-1MTT溶液20 μL,继续培养4 h,弃去上清液,加入DMSO150 μL充分溶解,用酶标仪在检测波长570 nm和参比波长630 nm下测定吸光度。

1.8 统计学方法

采用SPSS15.0版软件,计量资料以均数±标准差( x ¯ ±s)表示,进行单因素方差分析(ONE-WAY ANOVA),组间比较采用Dunnett检验,以 P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 柴葛疏表颗粒对RAW264.7细胞活力的影响

见表1,1 μg·mL-1脂多糖、10 μg·mL-1地塞米松作用RAW264.7细胞24 h后,吸光度与空白对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05),细胞活力为102%,107%,对细胞无明显毒性。8个浓度的受试物中,1600,800,400,200,100 μg·mL-1柴葛疏表颗粒组吸光度高于空白对照组(P<0.01),细胞活力分别为118%,160%,143%,136%,123%;50.0,25.0,12.5 μg·mL-1柴葛疏表颗粒组的吸光度与空白对照组相比均差异无统计学意义(P>0.05),细胞活力为110%,99%,94%。说明柴葛疏表颗粒对RAW264.7细胞无细胞毒性,低浓度时对细胞增殖无影响,当浓度升高至100 μg·mL-1时促进细胞增殖,在浓度为800 μg·mL-1时达高峰。因此,选择对细胞增殖无显著性影响的50.0,25.0,12.5 μg·mL-1进行“1.5”和“1.6”项实验。

表1 11组RAW264.7细胞活力比较
Tab.1 Comparison of cell viability among eleven groups of RAW264.7 cells x¯±s,n=6
组别 浓度/
(μg·mL-1)		 吸光度 细胞活力/
%
空白对照组 0.325±0.016 100
脂多糖组 1 0.333±0.032 102
地塞米松组 10 0.348±0.036 107
柴葛疏表颗粒组 1600 0.383±0.021*1 118
800 0.521±0.027*1 160
400 0.465±0.025*1 143
200 0.441±0.016*1 136
100 0.399±0.018*1 123
50.0 0.358±0.016 110
25.0 0.321±0.012 99
12.5 0.304±0.022 94

Compared with blank control group,*1P<0.05

与空白对照组比较,*1P<0.05

表1 11组RAW264.7细胞活力比较

Tab.1 Comparison of cell viability among eleven groups of RAW264.7 cells x¯±s,n=6

2.2 柴葛疏表颗粒对脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响

由表2可见,空白对照组的RAW264.7细胞上清液中NO水平较低,给予1 μg·mL-1脂多糖刺激后,RAW264.7细胞分泌NO 水平显著增加(P<0.01)。与脂多糖组比较,地塞米松组细胞上清液NO水平降低,抑制率为69.6%;柴葛疏表颗粒组(25.0,50.0 μg·mL-1)的细胞上清液NO含量均明显降低,抑制率分别为53.3%,77.2%(P<0.01),说明柴葛疏表颗粒可抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞NO的释放。柴葛疏表颗粒组(12.5 μg·mL-1)也可减少细胞上清液NO的含量,但抑制率仅为31.5%,与脂多糖组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 6组脂多糖诱导的RAW264.7细胞NO释放量比较
Tab.2 Comparison of LPS-induced NO production among six groups of RAW264.7 cells x¯±s,n=6
组别 浓度/
(μg·mL-1)		 NO含量/
(μmol·L-1)		 抑制率/
%
空白对照组 0 6.00±1.92 —
脂多糖组 1 28.72±4.12*1 —
地塞米松组 10 12.91±5.71*2 69.6
柴葛疏表颗粒组 12.5 21.56±6.09 31.5
25.0 16.62±2.43*2 53.3
50.0 11.19±3.14*2 77.2

Compared with blank control group ,*1P<0.01;compared with LPS group ,*2P<0.01

与空白对照组比较,*1P<0.01;与脂多糖组比较,*2P<0.01

表2 6组脂多糖诱导的RAW264.7细胞NO释放量比较

Tab.2 Comparison of LPS-induced NO production among six groups of RAW264.7 cells x¯±s,n=6

2.3 柴葛疏表颗粒对脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α、IL-1β的影响

由表3见,脂多糖组可显著增加RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β的分泌,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。与脂多糖组比较,地塞米松组的细胞上清液TNF-α、IL-1β水平降低,抑制率分别为77.3%,84.0%;各浓度柴葛疏表颗粒组(12.5,25.0,50.0 μg·mL-1)均可减少RAW264.7细胞上清液中TNF-α、IL-1β的含量,TNF-α抑制率分别为28.0%,71.5%,93.3%;IL-1β抑制率分别为33.9%,56.9%,85.2%(均P<0.01),说明柴葛疏表颗粒可抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-1β,并呈浓度依赖性。

表3 6组脂多糖诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β释放量比较
Tab.3 Comparison of LPS-induced release of TNF-α and IL-1β among six groups of RAW264.7 cells x¯±s,n=6
组别 浓度/
(μg·mL-1)		 TNF-α IL-1β
含量/(ng·L-1) 抑制率/% 含量/(ng·L-1) 抑制率/%
空白对照组 — 245.11±22.88 — 29.92±4.39 —
脂多糖组 1 562.89±44.85*1 — 64.03±6.13*1 —
地塞米松组 10 317.33±41.61*2 77.3 35.37±3.61*2 84.0
柴葛疏表颗粒组 12.5 474.00±42.72*2 28.0 52.45±3.31*2 33.9
25.0 335.67±49.31*2 71.5 44.61±5.28*2 56.9
50.0 269.56±31.67*2 93.3 34.95±4.01*2 85.2

Compared with blank control group ,*1P<0.01;compared with LPS group ,*2P<0.01

与空白对照组比较,*1P<0.01;与脂多糖组比较,*2P<0.01

表3 6组脂多糖诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β释放量比较

Tab.3 Comparison of LPS-induced release of TNF-α and IL-1β among six groups of RAW264.7 cells x¯±s,n=6

2.4 柴葛疏表颗粒对脂多糖刺激后RAW264.7细胞活力的影响

由表4可见,RAW264.7细胞经脂多糖刺激后,各浓度柴葛疏表颗粒组的细胞吸光度与空白对照组比较均差异无统计学意义(P>0.05),细胞成活率基本达100%,说明柴葛疏表颗粒和脂多糖共同作用RAW264.7细胞24 h后,对其活力无显著影响,无细胞毒性作用。

表4 6组RAW264.7细胞经脂多糖刺激后活力比较
Tab.4 Comparison of cell viability among six groups of RAW264.7 cells stimulated by LPS x¯±s,n=6
组别 浓度/
(μg·mL-1)		 吸光度 细胞活力/
%
空白对照组 — 1.608±0.268 100
脂多糖组 1 1.611±0.267 100
地塞米松组 10 1.609±0.188 100
柴葛疏表颗粒组 12.5 1.610±0.193 100
25.0 1.596±0.259 99
50.0 1.592±0.190 99

表4 6组RAW264.7细胞经脂多糖刺激后活力比较

Tab.4 Comparison of cell viability among six groups of RAW264.7 cells stimulated by LPS x¯±s,n=6

3 讨论

柴葛疏表颗粒在临床上用于风热感冒,方中所含的柴胡、连翘为主药,辛凉解表,清热解毒;葛根解肌退热;黄芩清泄里热;板蓝根清热解毒消肿;桔梗利咽化痰,活解表邪,宣痹痛。其有效成分主要为黄芩苷、葛根素、连翘苷,大量的体内外实验和机制研究表明,黄芩苷、葛根素、连翘苷具有解热、抗炎、抗菌、抗氧化等作用[6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16]。亦有研究报道葛根素可通过抑制脂多糖导致的RAW264.7细胞形态学变化、降低细胞上清液中TNF-α以及细胞内NF-κB p65 mRNA、iNOS mRNA和蛋白质的表达来发挥抗炎作用[17,18]。本研究通过体外培养小鼠巨噬细胞建立炎症模型,观察柴葛疏表颗粒对脂多糖诱导的RAW264.7细胞活化所分泌的炎症因子的作用,探讨其抗炎作用机制。

本实验首先通过MTT法观察不同浓度的柴葛疏表颗粒对RAW264.7细胞活力的影响,结果显示8个浓度(12.5~1600 μg·mL-1)均无细胞毒性作用,但仅有12.5,25.0,50.0 μg·mL-1 3种浓度对细胞活力无显著性影响,当柴葛疏表颗粒浓度增加时,对RAW264.7细胞有促进增殖的作用。为排除柴葛疏表颗粒对RAW264.7细胞释放炎症因子的作用与其对细胞毒性作用或增殖作用有关,选择对细胞活力无显著性影响的3个浓度(12.5,25.0,50.0 μg·mL-1)进行后续实验。同时,在实验结束时考察柴葛疏表颗粒对脂多糖刺激后RAW264.7细胞活力的影响,亦证实了柴葛疏表颗粒在12.5,25.0,50.0 μg·mL-1的浓度下对RAW264.7细胞活力无明显影响。

NO是一种重要的炎症递质,由活化的巨噬细胞释放NO可促进炎症部位渗出和水肿,诱导TNF-α、IL-1β等炎症因子产生,在炎症反应的病理过程中起重要作用[19,20]。TNF-α在炎症反应过程中可以激活细胞因子网络,造成细胞因子级联反应,诱导IL(IL-1、IL-6、IL-1β等)和其他次级炎症递质的合成,从不同环节参与体内炎症反应,引起多器官组织损伤[21]。本研究选取NO、TNF-α、IL-1β作为检测指标,实验结果显示,RAW264.7细胞经脂多糖刺激后,分泌NO、TNF-α、IL-1β炎症因子显著增加,表明体外炎症模型建模成功。25.0和50.0 μg·mL-1柴葛疏表颗粒可明显抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞NO的释放,12.5,25.0和50.0 μg·mL-1柴葛疏表颗粒均可明显减少脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-1β,表明柴葛疏表颗粒可能通过减少炎症递质NO、TNF-α、IL-1β的释放发挥其抗炎作用。亦有文献报道[22,23],NO作为一种炎症因子参与炎症反应的过程,对机体有损伤和保护双向作用:巨噬细胞活化后可大量生成的NO,有清除病原微生物、杀伤多种病原体的作用;同时,TNF-α在某些情况下也表现出抗炎效应:TNF-α在感染和自身免疫反应中,可激活吞噬细胞杀灭病原体以及诱导巨噬细胞分泌其他生物活性物质,对抗细菌感染。本研究在对RAW264.7细胞活力的影响的实验中,发现柴葛疏表颗粒作用的浓度>50.0 μg·mL-1时,对细胞有增殖作用,此时柴葛疏表颗粒通过如何调节细胞因子减轻炎症反应,对释放NO、TNF-α、IL-1β的影响是抑制、促进或是达到一定程度的平衡,是否还有其他的信号通路和细胞因子参与,有待进一步研究。

综上所述,柴葛疏表颗粒具有良好的抗炎作用,其机制可能与调节炎症因子的释放有关。

The authors have declared that no competing interests exist.
参考文献
[1] 吕晓君,杨雅婷,周素文,等.不同工艺柴葛疏表颗粒主要药效学筛选[J].医药导报,2014,33(7):885-886.
目的：比较5种工艺条件下所得柴葛疏表颗粒的抗炎、镇痛效果,以筛选最佳工艺方法。方法通过腹腔给予0.6%醋酸溶液制备小鼠急性腹膜炎模型,统计给药后小鼠扭体次数,观察镇痛作用。通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型观察抗炎作用。结果柴葛疏表颗粒不同工艺提取物均有镇痛效果,与阴性组小鼠比较,扭体次数减少；工艺1,2,5所得提取物及挥发油均能降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度。结论在相同实验条件下,柴葛疏表颗粒不同工艺提取物均有镇痛作用,工艺1,2,5所得提取物及挥发油的抗炎效果较好。
DOI:10.3870/yydb.2014.07.012      URL    
[本文引用:1]
[2] 杨雅婷,吕晓君,周素文,等.柴葛疏表颗粒药效学研究[J].医药导报,2016,35(2):137-140.
目的：观察柴葛疏表颗粒的解热、抗炎、镇痛作用。方法动物按体质量随机分为空白对照组、吲哚美辛组(给予吲哚美辛)、风热感冒颗粒组(给予风热感冒颗粒)及柴葛疏表颗粒大、中、小剂量组(给予相当于生药26，13，6.5 g?kg－1)，灌胃给药，连续5 d。通过酵母致大鼠发热模型观察其解热作用，通过1％角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型及二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型观察其抗炎作用，通过0.6％醋酸致小鼠急性腹膜炎模型及小鼠足部接触热板观察其镇痛作用。结果与空白对照组比较，柴葛疏表颗粒大剂量组在酵母造模后0.5 h，中剂量组在酵母造模后4~6 h可抑制大鼠体温升高；柴葛疏表颗粒大剂量组在角叉菜胶造模后1，2，3 h，柴葛疏表颗粒中剂量组在角叉菜胶造模后2，3，4 h能较好抑制大鼠足趾肿胀度；柴葛疏表颗粒大、中、小剂量组对二甲苯所致小鼠耳部炎症的抑制率分别为58.2％，52.0％，53.9％；柴葛疏表颗粒大、中、小剂量组对醋酸所致小鼠扭体次数的抑制率分别50.5％，68.8％，58.1％；热板法中柴葛疏表颗粒大、中、小剂量组均可延长小鼠痛阈值。结论柴葛疏表颗粒具有较好的解热、抗炎及镇痛作用。
[本文引用:1]
[3] 杨帆,白祥军,刘开俊,等.雷公藤内酯醇对内毒素激活小鼠腹腔巨噬细胞分泌促炎症介质NO 和IL-6的影响[J].医药导报,2010,29(1):9-12.
[本文引用:1]
[4] 刘静,刘瑛,李宾,等.槐定碱抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子分泌及机制[J].细胞与分子免疫学杂志,2015,31(5):585-589.
[本文引用:1]
[5] 赵凯华,赵烽,刘珂.腺梗豨莶提取物对脂多糖活化巨噬细胞释放一氧化氮的抑制作用[J].烟台大学学报(自然科学与工程版),2009,22(2):137-140.
用脂多糖（LPS）诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264．7释放一氧化氮（NO），Griess法测定培养上清中NO释放量并计算抑制率，MTT法测定细胞存活率评价药物的细胞毒性，以检测腺梗豨莶不同溶剂萃取部位对活化巨噬细胞释放炎症介质NO的抑制作用．结果表明，石油醚及乙酸乙酯部位对活化巨噬细胞释放NO的抑制作用明显强于正丁醇部位及水层，即石油醚及乙酸乙酯部位为腺梗豨莶抑制活化巨噬细胞释放NO的主要活性部位，半数抑制浓度（IC50）值分别为6．0和6．5μg·mL^-1，其作用强度优于该植物的主要活性成分奇壬醇（IC50为37．5μg·mL^-1），推断该活性部位中应含有奇壬醇以外的其他活性化合物．以上结果为进一步阐明腺梗豨莶的抗炎作用物质基础提供了一定的理论基础．
DOI:10.3969/j.issn.1004-8820.2009.02.013      URL    
[本文引用:1]
[6] 范书铎,赵红艳,王翠花,等.黄岑苷对发热大鼠解热作用的实验研究[J].中国医科大学学报,1995,24(4):358-360.
[本文引用:1]
[7] GUO M,ZHANG N,LI D,et al.Baicalin plays an anti-inflammatory role through reducing nuclear factor-κB and p38 phosphorylation in S.aureus-induced mastitis[J].Int Immunopharmacol,2013,16(2):125-130.
DOI:10.1016/j.intimp.2013.03.006      URL    
[本文引用:1]
[8] 厉世伟,司宁宁,李龙,等.连翘有效成分对炎症模型的作用[J].中兽医医药杂志,2012,31(1):16-19.
[本文引用:1]
[9] SCHINELLA G R,TOURNIER H A,PRIETO J M,et al.Antioxidant activity of anti-inflammatory plant extracts[J].Life Sci,2002,70(9):1023-1033.
The antioxidant properties of twenty medical herbs used in the traditional Mediterranean and Chinese medicine were studied. Extracts from Forsythia suspensa, Helichrysum italicum, Scrophularia auriculata, Inula viscosa, Coptis chinensis, Poria cocos and Scutellaria baicalensis had previously shown anti-inflammatory activity in different experimental models. Using free radical-generating systems H. italicum, I. viscosa and F. suspensa protected against enzymatic and non-enzymatic lipid peroxidation in model membranes and also showed scavenging property on the superoxide radical. All extracts were assayed at a concentration of 100 g/ml. Most of the extracts were weak scavengers of the hydroxyl radical and C. chinensis and P. cocos exhibited the highest scavenging activity. Although S. baicalensis inhibited the lipid peroxidation in rat liver microsomes and red blood cells, the extract showed inhibitory actions on aminopyrine N-demethylase and xanthine oxidase activities as well as an pro-oxidant effect observed in the Fe 3+-EDTA - H 2O 2 system. The results of the present work suggest that the anti-inflammatory activities of the same extracts could be explained, at least in part, by their antioxidant properties.
DOI:10.1016/S0024-3205(01)01482-5      PMID:11860151      URL    
[本文引用:1]
[10] 王士群,庞丽萍,朱宇珍,等.LKB-1表达差异细胞系中黄芩苷和顺铂联合用药研究[J].中国现代应用药学,2014,31(8):907-911.
黄芩苷是黄芩中提取的黄酮类天然成分,具有显著的抗炎、抗肿瘤、促代谢等生理活性。腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是调控能源代谢的主要途径,由上游LKB-1或CaMKKβ蛋白激酶调控。最新研究发现黄芩苷对于LKB-1低表达的细胞系中可通过CaMKKβ途径激活AMPK。本研究通过等效线图解法和Chou-Talalay法定性及定量评估了黄芩苷和顺铂在LKB-1表达差异的细胞系的相互作用。细胞凋亡结果发现:相比LKB-1高表达的肿瘤细胞系HepG2,黄芩苷在LKB-1低表达细胞系A549能够增强顺铂对凋亡的诱导;相反,对于高表达LKB-1的正常细胞系LO2,黄芩苷起到保护作用。
URL    
[本文引用:1]
[11] 汪东海,陈敏,姜志强,等.黄芩苷消除鲍曼不动杆菌耐药质粒的实验研究[J].中国现代应用药学,2012,29(5):400-404.
[本文引用:1]
[12] 粟英,向毓明. 抗病毒药物联合黄芩苷治疗重症流感的临床疗效观察[J].中国医院药学杂志,2014,34(4):306-308.
目的:探讨抗病毒药物联合黄芩苷治疗重症H1N1流感的临床疗效及作用机制.方法:将收治的63例重症 H1N1流感患者按照分层随机分组法分为观察组和对照组,对照组给予常规抗病毒药物治疗,观察组给予抗病毒药物联合黄芩苷治疗,观察2组治疗前后临床症 状、实验室指标及细胞免疫功能改善情况.结果:观察组肺部影像学检查及临床症状改善情况均显著优于对照组,2组间差异有显著性(P＜0.05);观察组细 胞免疫功能下降情况得到显著改善,明显优于对照组,2组差异有显著性(P＜0.05);观察组临床疗效及实验室检测指标均显著优于对照组,2组间差异有显 著性(P＜0.05).结论:抗病毒药物联合黄芩苷能显著改善重症H1N1流感患者临床症状,在提高患者免疫力同时缩短病程,具有重要的临床应用价值.
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2014.04.16      URL    
[本文引用:1]
[13] 刘娟,郭宇,胡孟洋,等.葛根素固体脂质纳米粒抗肝损伤作用研究[J].中国现代应用药学,2016,33(9):1102-1106.
目的制备葛根素固体脂质纳米粒（puerarin solid lipid nanoparticles,Pue-SLN）,对Pue-SLN进行体外释药考察,并探讨Pue-SLN对CCl4诱导的急性肝损伤大鼠的治疗作用。方法采用乳化-超声分散法制备Pue-SLN。大鼠腹腔注射CCl4造成急性肝损伤模型。48只大鼠随机分成6组：正常组、模型组、甘草酸二胺阳性对照组（13.5 mg·kg^-1）、Pue-SLN高浓度组（27 mg·kg^-1）、中浓度组（13.5 mg·kg^-1）、低浓度组（6.75 mg·kg^-1）。分别测定大鼠血清中丙氨酸转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、天门冬氨酸转移酶（AST）的活力,肝组织匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量,计算肝脏指数,并对肝组织进行组织形态学检查。结果 Pue-SLN各剂量组均能抑制肝损伤大鼠血清中ALT、AST、ALP活性,降低肝匀浆中MDA含量,增强SOD、GSH-PX活性,改善肝组织的病理形态。结论 Pue-SLN对CCl4诱导的大鼠急性肝损伤具有治疗作用。
URL    
[本文引用:1]
[14] 李国峰,秦玉花,杜鹏强 .葛根素对缺氧复氧心脏微血管内皮细胞的保护作用[J].中国医院药学杂志,2016,36(1):37-40.
<p><strong>目的:</strong>为了解综合医院中双环醇老年人群用药特征。<strong>方法:</strong>以全国18家大型三甲医院医院信息系统数据库中使用双环醇片的1085例老年住院患者为研究对象,利用频数统计及关联规则分析其基本情况、合并疾病、合并用药。<strong>结果:</strong>患者年龄66~74岁居多,占75.48%;性别为男:女&asymp;2:1;住院天数集中在15~28 d;合并西药以双环醇片+营养补充药最常见;合并中药以双环醇片+清热祛湿剂最常见;一种中药合并一种西药以甘草酸注射剂+还原型谷胱甘肽为主;关联分析中以甘草酸注射剂+呋塞米/胸腺肽/螺内酯最常见。<strong>结论:</strong>在中医药治疗肝病的临床中,医生应注意运用清热解毒祛湿、活血化淤、扶正固本的原则来辨证遣方和联合用药;双环醇片与甘草酸注射剂联合运用可能在治疗肝炎和预防肝癌方面产生一定的协同作用;双环醇与胸腺肽联合使用可能在治疗慢性乙型肝炎、预防老年人群肿瘤的发生和预防及治疗化疗药物所致肝损害方面均产生协同作用;双环醇片与甘草酸注射剂、还原型谷胱甘肽、螺内酯片、呋塞米、胸腺肽的多项联合用药可能在临床肝硬化腹水的治疗上产生积极的协同作用。</p>
[本文引用:1]
[15] 张聪聪. 葛根素对外周血内皮祖细胞缺氧/复氧损伤的保护作用[J].中国医院药学杂志,2017,37(13):1228-1231.
目的:研究葛根素对外周血内皮祖细胞(EPCs)缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合,使用专用培养基EGM-2,成功分离纯化EPCs,通过形态学、细胞表面分子标志物检测、内皮祖细胞吞噬功能对其鉴定;采用Krebs液建立缺氧/复氧损伤模型,用葛根素干预后,采用MTT法测定细胞活力、2,4-二硝基苯肼显色法测定细胞外乳酸脱氢酶(LDH)释放量、黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量、硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量;Western blot法考察胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达。结果:与模型组相比,葛根素20.8 mg·L~(-1)及41.6 mg·L~(-1)组显著提高细胞活力(P0.05,P0.01);葛根素20.8 mg·L~(-1)及41.6 mg·L~(-1)能显著降低NO、MDA含量和LDH释放量(P0.01);葛根素20.8 mg·L~(-1),41.6 mg·L~(-1),83.2 mg·L~(-1)均显著提高缺氧/复氧后细胞SOD活性(P0.01),并上调细胞HO-1、胞核Nrf2蛋白表达(P0.01),显著降低胞浆Nrf2蛋白表达(P0.01)。结论:葛根素可显著拮抗缺氧/复氧对EPCs的损伤,可能与其抑制细胞过氧化损伤,增强细胞抗氧化能力有关。
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2017.13.04      URL    
[本文引用:1]
[16] 张炜,张汉明,郭美丽,等.连翘的药理学研究[J].中国现代应用药学,2000,17(1):7-10.
连翘为木犀科植物连翘Ｆｏｒｓｙｔｈｉａｓｕｓｐｅｎｓａ(Ｔｈｕｎｂ.)Ｖａｈｌ的干燥果实,味苦,无毒,性微寒,具有清热止吐、清肝利胆、除湿退黄、通调三焦、畅达血脉、保肝护心等作用。近年来,关于连翘及其同属近缘植物化学成分的报道很多,本文仅就其生物学活性及药理?..
DOI:10.3969/j.issn.1007-7693.2000.01.004      URL    
[本文引用:1]
[17] 胡建军,张丹丹,陈俊杰,等.葛根素预处理对LPS诱导RAW264.7细胞活化的影响[J].中国中药杂志,2012,37(20):3112-3116.
目的:观察葛根素预处理对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7活化和分泌细胞因子的影响,探讨其抗炎机制。方法:取对数期生长良好的RAW264.7细胞,随机分为空白对照组、LPS组、葛根素预处理+LPS组。CCK-8法检测葛根素对RAW264.7的细胞毒性作用,Giemsa染色法观察细胞形态学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)的变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)动态测定NF-κB p65 mRNA的表达。结果:当葛根素的浓度为100,200,400μmol·L-1时,与1 mg·L-1LPS共培养均未显示出细胞毒性作用(P0.05);与空白对照组相比,LPS组可明显改变RAW264.7细胞的形态(胞体增大,形态不规则,伪足大量伸出),葛根素100μmol·L-1组干预后可明显抑制LPS导致的细胞形态学变化,葛根素200,400μmol·L-1干预组的抑制效果更显著,但2组之间无明显差异;葛根素预处理可使细胞上清液中TNF-α,MIP-2以及细胞内NF-κB p65 mRNA的表达受到抑制(P0.05),并随着葛根素浓度的增加,抑制效果逐渐增加(P0.05),但未达到对照组水平。结论:葛根素是一种安全有效的天然抗炎药物,可显著下调炎症细胞因子(如TNF-α,MIP-2)的表达,其作用机制可能与下调NF-κB p65 mRNA的表达有关。
DOI:10.4268/cjcmm20122023      URL    
[本文引用:1]
[18] 俞建, 胡文志, 季玲,等.葛根素抑制脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞表达诱导型一氧化氮合酶[J].中国康复理论与实践,2010,16(9):835-836.
<FONT face=Verdana>目的观察葛根素对脂多糖（LPS）诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞表达诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的影响。方法用脂多糖刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7，与不同浓度的葛根素进行培养,采用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）和免疫蛋白印迹法测定（Western blotting）方法分别检测RAW264.7巨噬细胞iNOS mRNA和蛋白质表达。结果随着葛根素的浓度的增加，RAW264.7细胞iNOS的mRNA及其蛋白质表达逐渐减少(<I>P</I>&lt;0.01)。结论葛根素可以通过调节RAW264.7细胞表达iNOS发挥抗炎的作用。</FONT>
Magsci    
[本文引用:1]
[19] BREUILLARD C L,CURIS E,LE PLENIER S,et al.Nitric oxide production by peritoneal macrophages from aged rats:a short term and direct modulation by citrulline[J].Biochimie,2017,133(2):66-73.
DOI:10.1016/j.biochi.2016.10.020      URL    
[本文引用:1]
[20] KOBAYASHI Y.The regulatory role of nitric oxide in proin-flammatory cytokine expression during the induction and resolution of inflammation[J].Leukoc Biol,2010,88(6):1157-1162.
DOI:10.1189/jlb.0310149      URL    
[本文引用:1]
[21] ELMALI N,BAYSAL O,HARMA A,et al.Effects of resveratrol in inflammatory arthritis[J]. Inflammation,2007,30(1/2):1-6.
Summary: Nuclear factor kappa B (NF-κB), is a pivotal transcription factor involved in the activation of the TNF-α and IL-1β genes. Activation of NF-κB in synovial cells is a feature seen in arthritis patients. Resveratrol, a polyphenolic, natural phytoalexin found with particularly high levels in grape skin and red wine is potent and specific inhibitor of TNF-α and IL-1β induced NF-κB activation. We aimed to determine the in vivo effects of intra-articular injections of resveratrol on cartilage and synovium in an experimental rabbit inflammatory arthritis model. Materials and methods: Arthritis was induced by intra-articular injection of three times of 5002μg lipopolysaccharide (LPS) at day020, 4 and 8 at 4-day intervals into the knee joints of rabbits. To the test group, 1002μMol/kg resveratrol in the DMSO was injected in the knees at day020 and then it was continued once daily for 202weeks. To the control group the same time and amount of DMSO was injected the knees of rabbits. All rabbits were killed 102week after the last injection and cartilage tissue and synovium were evaluated with semiquantitative scoring histologically. Results: According to control group in the resveratrol group, significantly decreased cartilage destruction was determined by H&E staining ( p 65=650.04). Loss of matrix proteoglycan content in the cartilage was much lower, as determined by safranin O staining ( p 65=650.03). We also observed marked synovial inflammation after intra-articular injection to control knees, but not in the resveratrol treated group knees ( p 65=650.01). Conclusion: This study suggests that intra-articular injection of resveratrol may protect cartilage against the development of experimentally induced IA.
DOI:10.1007/s10753-006-9012-0      PMID:17115116      URL    
[本文引用:1]
[22] 陈昶. 一氧化氮在脓毒症中的双向作用及治疗应用[J].金陵医院学报,1996,9(4):339-342.
[本文引用:1]
[23] 陈杰,李瑞明,许静,等.蟛蜞菊内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞环氧化酶2、NO及TNF-α的影响[J].中国临床药理学与治疗学,2012,17(2):171-174.
目的：研究蟛蜞菊内酯对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导RAW264.7细胞COX-2、NO及TNF-&alpha;的作用。方法： ELISA方法检测0.2、2、20 &mu;mol?L-1不同浓度蟛蜞菊内酯对终浓度为10 &mu;g?mL-1LPS诱导RAW264.7细胞产生TNF-&alpha;, NO 及PGE2的影响，Western blot方法检测蟛蜞菊内酯对LPS诱导COX-2 酶蛋白表达的影响。结果：LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞产生的COX-2酶蛋白，蟛蜞菊内酯低中高三个浓度均能抑制LPS诱导产生的COX-2酶蛋白表达。小鼠RAW264.7细胞株产生的PGE2都可以被 LPS诱导增加，与空白组比有显著差异。蟛蜞菊内酯低中高三个浓度均能抑制LPS诱导产生的PGE2 、NO和TNF-&alpha; ，呈现剂量依赖性。结论: 蟛蜞菊内酯抗炎的作用机制可能为抑制COX2的蛋白表达，进而抑制的PGE2生成，也可能与抑制NO和TNF-&alpha;生成有关。
DOI:      Magsci     URL    
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柴葛疏表颗粒
脂多糖
RAW264.7细胞
炎症因子
granule
Lipopolysaccharide
RAW264.7 cell
Inflammatory factor
作者
吕晓君
周素文
LYU Xiaojun
ZHOU Suwen