中国科技论文统计源期刊　中文核心期刊  
美国《化学文摘》《国际药学文摘》
《乌利希期刊指南》
WHO《西太平洋地区医学索引》来源期刊  
日本科学技术振兴机构数据库（JST）
第七届湖北十大名刊提名奖  
医药导报
医药导报, 2018, 37(9): 1111-1114
doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2018.09.020
双贝胶囊的质量标准
Quality Standard of Shuangbei Capsules
权小英1,, 马善波2, 党碧艳3, 缪珊3,
1.西安市莲湖区北院门西大街社区卫生服务中心,西安 710000
2.第四军医大学西京医院药剂科,西安 710032
3.第四军医大学药物研究所,西安 710032
QUAN Xiaoying1,, MA Shanbo2, DANG Biyan3, MIAO Shan3,
1.The Bei Yuan-men Street of West Street Community Health Service Center in Xi'an Lianhu District,Xi'an 710000,China
2.Department of Pharmacy,Xijing Hospital
3.Institute of Materia Medica,the Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,China

作者简介 权小英(1973-),女,陕西西安人,主管药师,学士,研究方向:药学质量管理。电话:029-87628515,E-mail:qxy970906@126.com。

通信作者 缪珊(1973-),女,陕西西安人,主管药师,博士,研究方向:中药新药研发。电话:029-84772228,E-mail:49864959@qq.com。
中图分类号: R286;R927.11     文献标识码: B     文章编号: 1004-0781(2018)09-1111-04
摘要:

目的 建立双贝胶囊的质量标准。方法 采用薄层色谱法对双贝胶囊中土贝母、浙贝母、连翘进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对双贝胶囊中土贝母苷甲进行定量分析。结果 薄层色谱鉴别分离效果好,专属性强;土贝母苷甲含量在0.182~0.912 mg·mL-1范围内线性关系良好,r=0.9997;平均加样回收率99.31%,RSD 0.49%。结论 该方法简单、准确、专属性强、重复性好,可有效控制双贝胶囊的质量。
关键词: 双贝胶囊 ; 土贝母苷甲 ; 质量标准 ; 色谱 ; 薄层 ; 色谱法 ; 高效液相色谱

Abstract:

Objective To establish a quality standard of Shuangbei Capsules. Methods Fritillaria thunbergii,Fritillaria thunbergii Miq,Forsythia in Shuangbei capsules were identified by thin-layer chromatography (TLC). The content of tubeimoside I was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). Results The characteristic identification by TLC was distinct and specific. There was a good liner relationship with contents of tubeimoside Ⅰ in the ranges of 0.182-0.912 mg·mL-1 with good correlation coefficient r=0.9997. The average recovery was 99.31% and RSD was 0.49%. Conclusion The established methods are simple,accurate,exclusive,reproducible and suitable for the quality control of Shuangbei capsules.
Key words: capsules ; Tubeimoside I ; Quality control standard ; Chromatography ; thin-layer ; Chromatography ; high performance liquid

双贝胶囊由土贝母、浙贝母、山慈姑、连翘等六味中药组成的复方制剂。本方系依据治疗乳岩的效验方及多年经验加减化裁而来,临床主要用于乳腺癌、乳腺腺瘤、乳腺增生等癌前病变的治疗和预防等。为有效控制制剂质量,笔者对处方中的土贝母、浙贝母、连翘进行定性鉴别[1,2,3,4,5]。本方以土贝母为君药,其主要有效成分为土贝母苷甲,现代药理研究证实:“土贝母糖苷Ⅰ具有很强的抗癌作用”,与乳腺癌的病因病机非常符合。土贝母味苦,性微寒。功能清热解毒,散结消肿,且有抗癌之力。《本草从新》用此“治外科证痰毒”,《本草纲目拾遗》、《姚希周经验方》等古书中曾明确用于乳岩的治疗。《现代中药大辞典》谓土贝母用于:“急性乳腺炎、乳腺小叶增生、乳癌等,有解毒散结之效”;浙贝母味苦,性寒。功能清热化痰,散结消肿。《本草求原》谓其“功专解毒,兼散痰滞”并明确用于“乳炎”。选择它作为鉴别对控制样品质量有临床意义;连翘味苦,性微寒,具有清热解毒、消肿散结功效。近代著名医家张锡纯强调连翘“善理肝气,既能舒肝气之郁,又能平肝气之盛”,而乳腺癌几乎均与肝气郁结有关。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定土贝母中有效成分土贝母苷甲的含量[5,6,7,8,9,10],为该品种的质量控制和评价指标提供实验依据。

1 仪器与试药
1.1 仪器

日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪附双泵,SPD-M20A二极管阵列检测器,SIL-10AF自动进样器,LC solution软件,CTO-10AS柱温箱;电子分析天平(R200D型,德国Sartorius公司,感量:0.1/0.01 mg);台式天平 (BL310型,德国Sartorius公司);电子恒温水浴锅(北京科伟永兴实验仪器有限公司);薄层色谱成像系统(CAMAG公司,REPROSTAR3型)。

1.2 试药

土贝母苷甲对照品(批号:111735-200306),贝母素甲对照品(批号:110750-200305),连翘苷对照品(批号:110821-200508)均由中国食品药品检定研究院提供;硅胶G板(青岛海洋化工厂);双贝胶囊(第四军医大学药物研究所提供,批号:170301,170302,170303);甲醇为色谱纯试剂,水为超纯水,美国Millipore纯水系统,其他均为分析纯试剂。

2 方法与结果
2.1 薄层鉴别

2.1.1 土贝母薄层色谱鉴别 取20粒胶囊内容物,混匀,精密称取5.0 g,加入70%乙醇50 mL,超声处理30 min,取出,放冷,滤过,量取滤液25 mL,蒸干,残渣加水10 mL溶解,用水饱和的正丁醇提取4次(20,20,10,10 mL),合并正丁醇提取液,蒸干,残渣加甲醇5 mL使溶解,溶液加入已处理好的中性氧化铝柱上(100~200目,内径1.0~1.5 cm,用70%乙醇15 mL预洗),收集70%乙醇洗脱液80 mL,蒸干,残渣加甲醇1 mL使其溶解,作为供试品溶液。另取缺土贝母阴性对照(按处方及制备工艺制备成不含土贝母制成的阴性对照样品)5.0 g,按上述制备方法,制成土贝母阴性对照溶液。再取土贝母苷甲对照品,加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典2015年版四部》通则0502)实验,吸取上述三种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-水(13:7:2)10 ℃以下放置的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,热风吹至斑点清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰,见图1。


图1 双贝胶囊中土贝母的TLC图1,3,4.双贝胶囊样品;2.土贝母苷甲对照品;5.缺土贝母阴性对照

Fig.1 TLC image of Fritillaria thunbergii in Shuangbei capsule1,3,4.samples of Shuangbei capsule;2.reference substance of tubeimoside I;5.negative reference substance without Fritillaria thunbergii

2.1.2 浙贝母薄层色谱鉴别 取20粒胶囊内容物,混匀,精密称取5.0 g,加浓氨水2 mL和苯20 mL,摇匀,浸泡过夜,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加三氯甲烷1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取缺浙贝母阴性对照样品(按处方及工艺制备成不含浙贝母制成的阴性对照样品)5.0 g,按上述制备方法制成浙贝母阴性对照溶液。再取贝母素甲对照品,三氯甲烷制成每毫升含1 mg的溶液,作为供试品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典2015年版四部》通则0502)实验,吸取上述三种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液(17:2:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰,见图2。


图2 双贝胶囊中浙贝母的TLC图1,2,5.双贝胶囊样品;3.贝母素甲对照品;4.缺浙贝母阴性对照

Fig.2 TLC image of Fritillaria thunbergii Miq in Shuangbei capsule1,2,5.samples of Shuangbei capsule;3.reference substance of Fritillary;4.negative reference substance without Fritillaria thunbergii Miq

2.1.3 连翘薄层色谱鉴别 取20粒胶囊内容物,混匀,精密称取5.0 g,加石油醚(30~60 ℃)20 mL,超声处理15 min,滤过,弃去滤液,药渣挥干石油醚,加甲醇20 mL,超声处理20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加1 mL溶解,作为供试品溶液。另取缺连翘阴性对照(按处方及制备工艺制备成不含连翘制成的阴性对照样品)5.0 g,按上述制备方法,制成缺连翘阴性对照溶液。再取连翘苷对照品,加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0502)实验,吸取上述三种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(8:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,热风吹至斑点清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰,见图3。


图3 双贝胶囊中连翘的TLC图1,2,5.双贝胶囊样品;3.连翘苷对照品;4.缺连翘阴性对照

Fig.3 TLC image of Forsythia in Shuangbei capsule1,2,5.samples of Shuangbei capsule;3.reference substance of Forsythia glycosides;4.negative reference substance without Forsythia

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm,瑞士Kromasil公司);流动相:甲醇-水(67:33);检测波长:214 nm;流速:1.0 mL·min-1。柱温:室温;进样量:20 μL,此条件下

土贝母苷甲峰的理论板数不低于4000,土贝母苷甲与其他组分的分离度不低于1.5。

2.2.2 对照品溶液的配制 精密称取土贝母苷甲对照品18.24 mg于20 mL量瓶中加甲醇至刻度,得浓度为0.912 mg·mL-1对照品溶液,作为对照品储备液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取20粒胶囊内容物,混匀,精密称取2.0 g,精密加入70%乙醇50 mL,精密称重,超声处理30 min,取出,放冷,用70%乙醇补足减失的重量,滤过,精密量取续滤液25 mL,蒸干,残渣加水10 mL溶解,用水饱和的正丁醇提取4次(20,20,10,10 mL),合并正丁醇提取液,蒸干,残渣加甲醇定容至5 mL量瓶中,用微孔滤膜(孔径0.45 μm)滤过,作为供试品溶液。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例及工艺自制不含土贝母的空白样品,按供试品溶液的制备方法制备成阴性对照溶液。

2.2.5 测定结果 精密吸取上述溶液,按“2.2.1”项色谱条件进行测定,结果供试品溶液在与对照品溶液相对应的位置上有相同的色谱峰,而阴性对照无干扰,说明其专属性强,色谱图见图4。


图4 双贝胶囊中土贝母苷甲的HPLC图 A.阴性溶液;B.对照品溶液;C.供试品溶液;1.土贝母苷甲

Fig.4 HPLC chromatogram of tubeimoside I in Shuangbei capsule A.negative reference solution without Fritillaria thunbergii;B.reference solution;C.sample solution;1.tubeimoside I

2.2.6 标准曲线制备和考察 精密量取储备液1,2,3,4,5 mL分别置于5 mL量瓶中,加80%甲醇稀释至刻度,分别得到浓度为0.182 4,0.364 8,0.547 2,0.729 6,0.912 mg·mL-1的对照品溶液,按“2.2.1”项下的色谱条件进行测定,记录峰面积,以浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制线性回归方程:Y=212 148X+2 271 230,r=0.999 7,结果表明:土贝母苷甲在0.182~0.912 mg·mL-1范围内呈良好线性关系。

2.2.7 精密度考察 精密称取同一批号的双贝胶囊(批号:170301),按“2.2.3”项方法制成供试品溶液,按 “2.2.1”项色谱条件测定,重复进样5次,测得供试品溶液RSD=0.63%(n=5),表明精密度良好。

2.2.8 稳定性考察 精密称取同一批号的双贝胶囊(批号:170302),按“2.2.3”项方法制成供试品溶液,按“2.2.1”项色谱条件分别间隔0,1,2,4,8 h进行测定,结果供试品RSD=0.68%(n=5),结果表明土贝母苷甲在15 h内稳定性。

2.2.9 重复性考察 精密称取同一批号(170303)样品5份,按“2.2.3”项制备方法制成供试品溶液,按“2.2.1”项色谱条件进行检测,土贝母苷甲的平均含量为每粒0.68 mg,RSD=0.77%(n=5)。

2.2.10 加样回收率实验 精密称取含量已知的样品6份,加入一定量的土贝母苷甲对照品,按“2.2.3”项制备方法制成供试品溶液,在按“2.2.1”项色谱条件进行测定,测得平均加样回收率为99.31%,RSD=0.49%,测定结果见表1。

表1 土贝母苷甲加样回收率测定结果
Tab.1 Determination results of recovery rate of tubeimoside I
取样量/
g		 原有量 加入量 测得量 回收率/
%
mg
1.679 6 3.695 1 3.50 7.188 2 99.80
1.676 9 3.733 2 3.50 7.184 6 98.61
1.620 8 3.565 8 3.50 7.028 6 98.94
1.667 3 3.668 1 3.50 7.139 4 99.18
1.598 3 3.516 0 3.50 7.010 3 99.84
1.684 8 3.706 6 3.50 7.188 4 99.48

表1 土贝母苷甲加样回收率测定结果

Tab.1 Determination results of recovery rate of tubeimoside I

2.2.11 样品含量测定 精密称取3批双贝胶囊样品各2.0 g,按“2.2.3”项制备方法制成供试品溶液,再按“2.2.1”项下的色谱条件进行测定,测定结果见表2。

表2 双贝胶囊中土贝母苷甲的含量测定结果
Tab.2 Results of content determination on tubeimoside I in Shuangbei capsules mg·g-1
批号 称样量/g 含量 平均含量
170301 2.000 7 0.340
2.000 3 0.325 0.332
170302 2.000 2 0.330
2.000 5 0.330 0.330
170303 2.005 1 0.345
2.002 2 0.335 0.340

表2 双贝胶囊中土贝母苷甲的含量测定结果

Tab.2 Results of content determination on tubeimoside I in Shuangbei capsules mg·g-1

3 讨论

在薄层色谱中,曾对土贝母、浙贝母和连翘的供试品制备及展开系统的方法进行优选。采用薄层色谱法鉴别土贝母中主要有效成分土贝母苷甲。经土贝母苷甲的薄层色谱条件实验,选择不同展开体系:①三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(12:3:8:2:2);②三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)10 ℃以下放置的下层液。结果条件②展开最佳,经阴性对照实验及3批样品的实验观察,表明本法成立。经贝母素甲的薄层色谱条件实验,选择不同展开体系:①醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液(17:2:1);②三氯甲烷-甲醇-浓氨水(20:5:0.5),结果条件①展开最佳,经阴性对照实验及3批样品的实验观察,表明本法成立,阴性无干扰。经连翘苷的薄层色谱条件实验,选择不同展开体系:①三氯甲烷-甲醇-甲酸(8:1:0.1);②三氯甲烷-甲醇(8:1);③正己烷-三氯甲烷-甲醇(10:10:1.8);结果条件②展开最佳,经阴性对照实验及3批样品的实验观察,表明本方法成立。

经过多次实验研究,最终优选出制样过程简单,分离度好的薄层鉴别项,且不受其他成分干扰,专属性强,重复性好,结果可靠,可作为双贝胶囊的定性指标。

The authors have declared that no competing interests exist.
参考文献
[1] 胡军林,顾承刚,吴宁.乳癖舒片的质量标准研究[J].中国医药指南,2014,12(17):82-83.
[本文引用:1]
[2] 赵文静,菅原颖,王艳宏,等.仙鹿消癖胶囊中淫羊藿、浙贝母、当归的薄层鉴别研究[J].中医药信息,2011,28(4):62-63.
目的 建立仙鹿消癖胶囊的薄层色谱鉴别方法.方法 采用薄层色谱法对处方中淫羊藿、浙贝母、当归进行定性鉴别.结果 在薄层色谱图中可检出淫羊藿、浙贝母、当归的特征斑点,斑点清晰且阴性对照无干扰.结论 所建立的方法简便、可行、专属性强,可用于仙鹿消癖胶囊的质量控制.
DOI:10.3969/j.issn.1002-2406.2011.04.029      URL    
[本文引用:1]
[3] 焦玉,胡然.海藻消瘤胶囊的质量控制[J].河北医药,2014,36(14):2197-2200.
目的建立海藻消瘤胶囊的质量控 制方法。方法根据处方药物组成,确定其制备工艺,采用薄层色谱法对制剂中的浙贝母、金银花、陈皮进行鉴别,高效液相色谱法测定制剂中盐酸小檗碱的含量。结 果定性鉴别方法准确、专属性强。盐酸小檗碱进样浓度在6.42~64.2μg/ml范围内与其峰面积呈良好线性关系,平均回收率为97.07%,RSD为 0.71%(n=6)。结论质量控制方法准确、快速、重现性好,能有效控制该制剂的质量。
DOI:10.3969/j.issn.1002-7386.2014.14.055      URL    
[本文引用:1]
[4] 石克,冉海琳.桑菊感冒冲剂中连翘、甘草的薄层色谱鉴别[J].海峡药学,2009,21(9):43-44.
目的研究桑菊感冒冲剂中连翘、甘草的薄层鉴别方法。方法采用连翘、连翘苷、甘草为对照,对3批桑菊感冒冲剂进行薄层色谱鉴别。结果3批供试品色谱中,在与连翘对照药材、连翘苷对照品、甘草对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点和荧光斑点。结论该法专属性强,操作易行,可用于桑菊感冒冲剂中连翘、甘草的鉴别。
DOI:10.3969/j.issn.1006-3765.2009.09.020      URL    
[本文引用:1]
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部) [M].北京:中国医药科技出版社,2015:6,17,170,292.
[本文引用:2]
[6] 冯素香,郝蕊,吴兆宇,等.连翘中连翘苷和多糖的提取工艺优化及含量测定[J].医药导报,2016,35(12):1348-1351.
目的通过正交设计优选出闪式提取法提取连翘苷的最优工艺。方法以提取物中连翘苷含量为指标,以乙醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,采用正交实验法优选连翘苷的闪提最优工艺;对闪式提取和回流提取连翘苷后的药渣提取多糖,并比较多糖的提取率。结果闪式提取的最佳工艺为:电压120 V,加10倍量70%乙醇闪式提取1 min,提取2次。此条件下连翘苷的含量为4.50 mg·g-1;回流法提取连翘苷的含量为4.06 mg·g-1。闪式提取和回流提取法的药渣中多糖的出膏率分别为2.16%,1.51%。结论闪式提取的连翘苷的含量及药渣中多糖的出膏率均高于回流提取,该工艺稳定可行。
DOI:10.3870/j.issn.1004-0781.2016.12.013      URL    
[本文引用:1]
[7] 叶玉杰,舒翔,刘敏,等.贝马喷膜剂的质量控制[J].医药导报,2013,32(7):939-941.
目的 研究贝马喷膜剂的质量控制方法.方法 采用薄层层析(TLC)法对贝马喷膜剂中的马鞭草进行定性鉴别,高效液相色谱法对土贝母苷甲进行定量测定.色谱柱为Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(65:35);流速为1.0 mL·min-1;检测波长214 nm;柱温为室温.结果 薄层色谱法中,供试品与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,斑点清晰、分离效果好、阴性对照无干扰.土贝母苷甲在5～80 mg·L-1范围内线性关系良好,平均回收率为100.20%(RSD＝1.92%,n＝6).结论 该方法操作简便、准确可控,可用于贝马喷膜剂的质量控制.
DOI:10.3870/yydb.2013.07.032      URL    
[本文引用:1]
[8] 金良,康俊琪.HPLC法测定土贝消肿汤中熊果酸和土贝母苷甲的含量[J].陕西中医学院学报,2010,33(3):87-88.
目的建立土贝消肿汤中熊果酸和土贝母苷甲的含量共同测定方法。方弦采用RP—HPLC法，色谱柱为Kromasil C18色谱柱（250×4．6mm，5μm）及保护柱；流动相为甲醇-0．05％盐酸（氨水调PH至2．88）梯度洗脱，体积流量为1．0ml／min，检测波长为210nm。结果熊果酸进样量在0．051—1．275μg范围内线性关系良好，回归方程为Y=9028．1X＋4863．1（R^2=0．9998），平均加样回收率为101．28％，RSD=1．51％；土贝母苷甲进样量在0．114—2．28μg范围内线性关系良好，回归方程为Y=2080．5X-1751．4（R^2=0．9999），平均加样回收率为99．90％，RSD=1．52％。结论此方法准确、可靠、重复性好，可作为土贝消肿汤中熊果酸和土贝母苷甲含量共同测定方法。
URL    
[本文引用:1]
[9] 崔瀚明,程慧平,刘明喜,等.HPLC法测定甲肿消及大鼠血清中土贝母苷甲的含量[J].中国中医药信息杂志,2008,15(11):37-38.
[本文引用:1]
[10] 黄瑾,张杰,顾正兵,等.高效液相色谱法同时测定土贝母中土贝母苷甲、乙和丙的含量[J].中国药业,2016,25(1):58-60.
[本文引用:1]
资源
摘要
PDF下载数    
RichHTML 浏览数    
摘要点击数    
分享
导出
EndNote | Ris | Bibtex
相关文章:
关键词（key words）
双贝胶囊
土贝母苷甲
质量标准
色谱
薄层
色谱法
高效液相色谱
capsules
Tubeimoside I
Quality control standard
Chromatography
thin-layer
Chromatography
high performance liquid
作者
权小英
马善波
党碧艳
缪珊
QUAN Xiaoying
MA Shanbo
DANG Biyan
MIAO Shan