大孔吸附树脂分离纯化了哥王中西瑞香素的工艺

赖红芳, 潘立卫, 黄秀香, 覃光全

河池学院化学与生物工程学院,宜州 546300

LAI Hongfang, PAN Liwei, HUANG Xiuxiang, QIN Guangquan

College of Chemistry and Bio-engineering, Hechi University, Yizhou 546300, China

通信作者黄秀香(1969-),女,壮族,广西都安人,教授, 硕士,研究方向:天然有机化学。电话:0778-3141892, E-mail:hxx1372@163.com。

作者简介赖红芳(1975-),女,壮族,广西柳州人,副教授,硕士,研究方向:天然有机化学。ORCID:0000-0003-1967-6425。电话:0778-3141892,E-mail:laihongfang263@163.com。

基金资助: 广西教育厅科研重点资助项目(KY2015ZD104)

中图分类号: R282.71;TQ460.6 文献标识码: B 文章编号: 1004-0781(2019)01-0084-05

摘要:

目的探讨大孔吸附树脂纯化分离了哥王中西瑞香素的最佳工艺条件。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定西瑞香素的含量,采用静态吸附和动态吸附结合的方法从8种树脂中优选出一种后对其工艺进行优化。结果 HPD600是纯化了哥王中西瑞香素的优选树脂,最佳吸附条件为上样浓度90 μg ·mL^-1,上样液体体积45 mL,上样速度1.5 mL·min^-1,吸附率达97.5%;较佳的洗脱条件:乙醇浓度90%,洗脱剂体积为30 mL,洗脱速度为1.5 mL·min^-1,解吸率为96.4%。结论大孔吸附树脂HPD600能有效分离纯化了哥王中西瑞香素。

关键词: 了哥王 ; 西瑞香素 ; 大孔树脂 ; 纯化工艺

Abstract:

Objective To investigate the best purification conditions of the dephnoretin from Wikstroemia indica Linn by macroporous resin. Methods The content of dephnoretin was determined by HPLC method. The 8 kinds of macroporous resins was selected by static and dynamic adsorption and desorption ,and the purification parameters was optimized. Results HPD600 was the best resin to purifiy daphne of Wikstroemia indica Linn; The optimum adsorption conditions for the sample concentration was 90 μg·mL^-1, the upper sample volume was 45 mL,the sample rate was 1.5 mL·min^-1, the adsorption rate reached 97.5%; the ethanol concentration was 90% for better conditions of elution, the eluent volume was 30 mL,the elution rate was 1.5 mL·min^-1, the desorption rate was 96.4%. Conclusion HPD600 macroporous adsorption resin can effectively separate and purify dephnoretin of Wikstroemia indica Linn.

Key words: Linn ; Dephnoretin ; Macroporous resin ; Purification technology

了哥王(Wikstroemia indica Linn,别名Indian st ringbush)属瑞香科荛花属植物^[1,2],有黄皮子、南岭荛花、小金腰带等别称。其性味苦、辛微温、毒性较大,有清热解毒、消肿散结、逐水散瘀等功能,具有抗肿瘤、抗炎镇痛、抗病毒等多种药理作用^[3]。人们常用了哥王与其他中草药配伍,用于治疗坐骨神经痛、淋巴结肿大、软组织损伤、带状疱疹后遗神经痛、风湿痛、恶性肿瘤、肝硬化等症^[4],因主治男性病症疗效好,有利于男性,因此有了哥王之称。目前,了哥王检测出多种化学成分,分别是山萘酚、牛蒡苷元、南荛酚、松脂酚、芫花素^[5]、西瑞香素^[6]等。其中西瑞香素为香豆素类化合物,别称了哥王素,是了哥王药材中主要成分,具有抗病毒、抗炎、抗肿瘤^[7,8]等药理作用,也是民间药物穿王消炎片、了哥王片等主要成分和相关药品质量的主要考察指标成分之一^[9]。

大孔吸附树脂不溶于酸、碱及各种有机溶剂,具有化学性质和物理性质稳定性高、吸附速度快、选择性好、比表面积大和吸附量大等优点^[10],是一类具有很好吸附效果的有机高分子聚合物。近年来,大孔吸附树脂在分离纯化多酚、黄酮类多种活性物质的应用越来越普遍^[11]。目前对了哥王中西瑞香素的研究主要是分离纯化方法、结构及含量测定等^[12,13],关于其分离纯化工艺笔者未见报道。本实验选用8种不同型号大孔吸附树脂,利用静态吸附从8种不同型号大孔吸附树脂中筛选出一种吸附-解吸效果最好的大孔吸附树脂,通过优化吸附与解吸纯化工艺,考察大孔吸附树脂对了哥王中西瑞香素的纯化效果的影响,为开发以西瑞香素为主的药品及功能性食品提供理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪(四元泵,VWD 检测器,柱温箱,自动进样器)、Agilent 1260 series色谱工作站、Agilent 8453型紫外-可见分光光度计(美国安捷伦公司);KQ250DE超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);AUW220D型天平(日本岛津公司,感量:0.01 mg);MilliporeD-Q3超纯水机(美国密理博公司)。

1.2 药材与试剂

了哥王购于玉林中草药市场,经河池学院化学与生物工程学院邓晰朝副教授鉴定为了哥王(Wikstroemia indica Linn)根茎。西瑞香素标准品(陕西华昱生物科技有限公司,批号:51118,含量≥99.5%);色谱纯甲醇(美国Tedia公司);大孔吸附树脂HPD600、HPD450、D4020、AB-8、DM130、HP20、D101、NKA-9(郑州华溢科技新材料股份有限公司);无水乙醇及磷酸为分析纯。

2 实验方法

2.1 西瑞香素的测定条件

高效液相色谱仪:色谱柱为Kramasil C₁₈ ;流动相为甲醇-0.1 %磷酸溶液(55:45);流速为0.6 mL·min^-1;紫外光检测波长为346 nm;柱温为28 ℃;进样量为10 μL。

2.2 标准曲线的绘制

精密称取西瑞香素标准品3 mg于小烧杯中,加入70%乙醇15 mL超声,使之溶解,然后转移到50 mL量瓶中,再用70%乙醇定容,摇匀,即得60 μg·mL^-1的标准品储备液。分别用移液管移取标准品储备液,体积为0.5,1.0,3.0,5.0,7.0,9.0 mL,置于比色管中,加70%乙醇定容至10 mL,摇匀,过孔径0.45 μm有机膜,在“2.1”项条件下测得不同浓度西瑞香素标准对照品溶液的峰面积。以西瑞香素质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

2.3 了哥王中西瑞香素超声提取

将处理好的了哥王根茎切成片,粉碎后保存,精密称量了哥王粉末10 g置于250 mL锥形瓶中,以料液比为1:20,提取温度为40 ℃,功率为90 W,提取溶剂为70%乙醇,超声时间为0.4 h,超声提取2次,合并2次滤液,旋转蒸发去除部分溶剂,得了哥王中西瑞香素粗提液,冷藏备用。

2.4 8种大孔树脂静态吸附与解吸的筛选

2.4.1 静态吸附实验分别称取8种大孔树脂树脂2.0 g于250 mL锥形瓶中,加入浓度为46.3 μg·mL^-1样品溶液25 mL,常温,放在摇振床上振荡24 h,转速180 r·min^-1,滤过,滤液定容至25 mL,溶液过孔径0.45 μm有机膜滤过,用“2.2”项的条件测定滤液中西瑞香素的峰面积,代入回归方程计算西瑞香素的质量浓度,根据以下公式(1)计算大孔树脂吸附率,对大孔树脂的吸附性能进行筛选。

A= $\frac{C_{0} V_{0} - C_{1} V_{1}}{C_{0} V_{0}}$ ×100% (1)

公式(1):A 为吸附率(%); C₀为西瑞香素的起始质量浓度(mg ·mL^-1);V₀为起始体积(mL);C₁为吸附后西瑞香素的质量浓度(mg ·mL^-1);V ₁为吸附溶液体积(mL)。

2.4.2 静态解吸实验将充分吸附后的大孔树脂用纯化水冲洗至大孔树脂表面无提取残留液,然后抽干,再加入70%乙醇溶液25 mL,常温,置于摇床上振荡24 h,转速180 r·min^-1,充分解吸后过滤,滤液定容至25 mL,溶液过孔径0.45 μm有机膜,用“2.2”项条件测定滤液中西瑞香素的峰面积,代入回归方程计算西瑞香素的质量浓度,按公式(2) 计算解吸率,对大孔树脂解吸能力进行筛选。

B= $\frac{C_{2} V_{2}}{C_{0} V_{0} - C_{1} V_{1}}$ ×100% (2)

公式(2)中:B为解吸率(%);C₀为西瑞香素的起始质量浓度(mg ·mL^-1);V₀为起始体积(mL);C₁为吸附后西瑞香素的质量浓度(mg ·mL^-1);V₁为吸附溶液体积(mL) ;C₂为解吸液中西瑞香素的质量浓度(mg ·mL^-1);V₂为吸附溶液体积(mL)。

富集回收率=吸附率×解吸率。

2.5 大孔树脂HPD600对了哥王中西瑞香素纯化工艺的吸附优化

2.5.1 上样质量浓度的考察称取5份预先处理好的大孔树脂HPD600 3.0 g,湿法装柱。将西瑞香素质量浓度分别为39.3,48,61.7,86.4,144 μg·mL^-1的了哥王粗提取液15 mL,以相同体积流速通过大孔树脂树脂柱滴下,完全吸附后,冲洗干净,定容,溶液经孔径0.45 μm有机膜滤过,用“2.2”项的条件测定后计算吸附率。

2.5.2 上样体积流速的考察称取5份预先处理好的大孔树脂HPD600 3.0 g,湿法装柱。选取西瑞香素质量浓度约90 μg·mL^-1 的了哥王粗提取液30 mL上柱,以不同体积流速0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mL·min^-1通过大孔树脂滴下,分别收集流出液,冲洗干净,定容,溶液经孔径0.45 μm有机膜滤过,用“2.2”项的条件测定后计算吸附率。

2.5.3 上样体积的考察称取预先处理好的大孔吸附树脂HPD600 3.0 g,湿法装柱,选取西瑞香素约为90 μg·mL^-1 的了哥王粗提取液90 mL,进行动态吸附。样液加入流速为1.5 mL·min^-1,通过大孔树脂滴下,分段收集流出液,流速同样为1.5 mL·min^-1,每份5 mL,收集18份。溶液经过孔径0.45 μm有机膜,用“2.2”项条件测定后计算吸附率。

2.6 大孔吸附树脂HPD600对了哥王中西瑞香素纯化工艺的解吸优化

2.6.1 洗脱剂体积分数的考察称取5份处理的大孔吸附树脂HPD600 3.0 g,湿法装柱,量取西瑞香素浓度约90 μg·mL^-1样品液45 mL,流速1.5 mL·min^-1进行动态吸附,吸附完全之后,先用水10 mL冲洗,再分别以50%,60%,70%,80%,90%乙醇各30 mL进行洗脱,收集溶液,定容,溶液过孔径0.45 μm有机膜滤过,用“2.2”项条件测定后计算解吸率。

2.6.2 洗脱剂体积流速的考察称取5份处理好的大孔吸附树脂HPD600 3.0 g,湿法装柱,取西瑞香素浓度约为90 μg·mL^-1的样品液45 mL,流速为1.5 mL·min^-1进行动态吸附,吸附完全之后,先用水10 mL冲洗,再用90%乙醇10 mL分别以0.5,1.5,2.5,3.5,4.5 mL·min^-1流速滴下,收集溶液,定容,溶液经孔径0.45 μm有机膜滤过,用“2.2”项条件测定后计算解吸率。

2.6.3 洗脱剂用量的考察称取预先处理好的大孔树脂HPD600 3.0 g,湿法装柱,取样品液40 mL,含西瑞香素90 μg·mL^-1,流速为1.5 mL·min^-1,进行动态吸附,吸附完全后,先用水10 mL冲洗,用90%乙醇以1.5 mL·min^-1流速进行解吸,每5 mL 流出液为1管收集,直到流出液接近无色时,终止收集。溶液过孔径0.45 μm有机膜滤过,用“2.2”项条件测定后计算解吸率。

2.7 验证实验

2.7.1 验证吸附实验称取5份预先处理好的大孔树脂HPD600 3.0 g,湿法装柱, 按吸附单因素实验找出的最佳实验条件进行动态吸附,吸附完全后,先用水10 mL冲洗,收集溶液,溶液过孔径0.45 μm有机膜滤过,用“2.2”项的条件测定后计算吸附率。

2.7.2 验证解吸实验采用“2.7.1”项抽干的大孔树脂按解吸单因素找出的最佳实验条件进行洗脱,收集其溶液,溶液过孔径0.45 μm有机膜滤过,用“2.2”项的条件测定后计算解吸率及富集回收率。合并洗脱液,制成了哥王西瑞香素粉末,计算纯度。

P(%)=C₂V₂ /M ×100 (3)

式中:P为样品中西瑞香素的纯度;C₂为洗脱液中西瑞香素浓度(mg ·mL^-1);V₂为洗脱液体积(mL);M为西瑞香素样品的质量(干重,mg)^[14]。

3 结果

3.1 西瑞香素标准品和样品高效液相色谱图

对西瑞香素标准品的高效液相色谱图及了哥王样品溶液的高效液相色谱图进行分析,西瑞香素出峰时间为4.9 min,其峰型对称,分离效果好,结果见图1。

图1 西瑞香素标准品和了哥王提取液的高效液相色谱图
A.西瑞香素标准品;B.了哥王提取液

Fig.1 HPLC chromatogram of dephnoretin standard and Wikstroemia indica Linn extraction solution
A.dephnoretin standard;B.Wikstroemia indica Linn extraction solution

3.2 标准曲线绘制

以西瑞香素质量浓度作为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果回归方程为A=61.811X-74.102,R²=0.999 7,A是峰面积,X是西瑞香素质量浓度,单位为μg·mL^-1。

3.3 8种大孔树脂静态实验的结果与分析

根据实验结果分析,大孔树脂HPD600的吸附率与解吸率在这些树脂中最佳,所以选择大孔树脂HPD600进行下一步动态纯化实验。结果见表1。

树脂种类	树脂类型	吸附率	解吸率
D101	非极性	44.4	45.5
HP20	非极性	44.9	46.0
HPD450	弱极性	44.0	49.2
NKA-9	极性	43.2	46.6
HPD600	极性	48.7	50.6
D4020	非极性	46.8	45.2
DM130	弱极性	44.3	22.3
AB-8	弱极性	37.3	44.6

表1 8种大孔树脂对西瑞香素吸附率和解吸率

Tab.1 Adsorption rate and desorption rate of eight macroporous resins for dephnoretin

3.4 大孔树脂HPD600对了哥王中西瑞香素纯化工艺的吸附优化

3.4.1 上样质量浓度的考察以“2.5.1”项测得西瑞香素的峰面积代入回归方程计算西瑞香素质量浓度,并计算该大孔树脂的吸附率,结果吸附率分别为70.4%,79.6%,89.8%,96.3%,96.7%,见图2。

图2 上样浓度对树脂吸附效果的影响

Fig.2 Impact of different initial concentrateion on adsorption effect of resin

实验结果表明,当浓度>86.4 μg·mL^-1时吸附率基本没有变化,由于浓度过高吸收杂质过多,杂质会覆盖在大孔树脂表面,会影响纯化效果;浓度过低不利于吸附,吸附率低,因此上样浓度约90 μg·mL^-1,可为工业生产提供参考。

3.4.2 上样体积流速的考察以“2.5.2”项测得西瑞香素的峰面积代入回归方程式计算西瑞香素的质量浓度,并计算相应吸附率,结果吸附率分别为97.0%,97.2%,96.4%,95.8%,93.7%,见图3。

图3 不同吸附流速对树脂吸附效果的影响

Fig.3 Impact of different adsorption velocity on the adsorption effect of resin

实验结果表明,随着上样溶液流速逐渐增大,大孔树脂HPD600对了哥王中西瑞香素的动态吸附率逐渐下降,由于上样溶液的流速越小,与大孔树脂接触面积越大,大孔树脂表面的吸附效果越好,流速加快,泄漏量也跟着加大,从而影响吸附效果。在上样溶液流速分别为0.5,1.0和1.5 mL·min^-1时,大孔树脂对样液中西瑞香素的吸附率相差不大,但过柱速率却相差1倍,所以通过综合考虑过柱速率与吸附率,选择上样样液流速为1.5 mL·min^-1。

3.4.3 上样体积的考察以“2.5.3”项测得西瑞香素的峰面积代入回归方程式计算每管(5 mL)西瑞香素的浓度,结果1~18号管西瑞香素的浓度分别为0.0,2.0,2.4,2.2,2.2,2.4,3.6,5.0,8.8,29.4,52.9,62.4,71.5,79.4,82.8,87.5,88.0,88.1 μg·mL^-1。

实验结果表明,当流出液收集到第9 个5 mL 的时候,西瑞香素溶液开始大量泄漏,当西瑞香素浓度约为90 μg·mL^-1 、样品液为45 mL时,基本达到饱和,建议上样液体体积为45 mL。

当了哥王中西瑞香素浓度约为90 μg·mL^-1,上样体积为45 mL,上样流速为1.5 mL·min^-1时,大孔树脂HPD600对了哥王中西瑞香素吸附最好。

3.5 大孔吸附树脂HPD600对了哥王中西瑞香素纯化工艺的解吸优化

3.5.1 洗脱剂体积分数的考察以“2.6.1”项测得西瑞香素的峰面积代入回归方程式计算每管西瑞香素的质量浓度。结果解吸率分别为23.3%,50.4%,80.4%,92.9%,97.7%,见图4。

图4 不同浓度乙醇的洗脱效果

Fig.4 Elution effect of different concentration of ethanol

实验结果表明,随着乙醇浓度逐渐增大,解吸率也随着逐渐增大,当乙醇浓度达90%时,解吸了哥王中西瑞香素效果比较好,如果用无水乙醇进行洗脱,洗脱下来杂质随之增多,影响纯化效果。因此选用90%乙醇对了哥王中西瑞香素进行洗脱。

3.5.2 洗脱剂体积流速的考察以 “2.6.2”项测得西瑞香素的峰面积代入回归方程式计算西瑞香素的浓度。结果解吸率分别为57.5%,58.1%,50.3%,47.2%,39.6%,见图5。

图5 不同解析流速对洗脱效果的影响

Fig.5 Impact of different desorption velocity on desorption effect

实验结果表明,90%乙醇体积流速越快,解吸率越低。上样样液流速分别为0.5和1.5 mL·min^-1时,大孔树脂对样液中西瑞香素的解吸率相差不大,但通过柱速率却相差1倍,通过综合考虑过柱速率与解吸率,因此选择1.5 mL·min^-1为洗脱剂体积流速。

3.5.3 洗脱剂用量的考察以 “2.6.3”项测得西瑞香素的峰面积代入回归方程式计算出每管(5 mL)西瑞香素的质量浓度,当测到浓度接近于零时,停止。1~12号管中西瑞香素的浓度分别为0.0,259.7,192.8,140.6,78.4,41.5,13.6,10.7,7.0,4.6,4.3,4.1 μg·mL^-1。

实验结果表明:当第6管以后,洗脱液中西瑞香素含量很少,所以应加90%乙醇洗脱剂体积为30 mL。

当洗脱了哥王中西瑞香素时,90%乙醇为洗脱剂,洗脱体积为30 mL,洗脱流速为1.5 mL·min^-1时,对吸附后了哥王中西瑞香素的大孔树脂HPD600解吸最好。

3.6 验证实验

按吸附最佳条件即:西瑞香素浓度约为90 μg·mL^-1,上样体积为45 mL,上样流速为1.5 mL·min^-1时重复实验5次,以“2.7.1”项测得西瑞香素的峰面积代入回归方程式计算西瑞香素的质量浓度,并计算大孔树脂HPD600的吸附率,结果吸附率分别为97.7%,96.2%,97.0%,97.2%,97.0%;按解吸最佳条件即:90%乙醇为洗脱剂,洗脱体积为30 mL,洗脱流速为1.5 mL·min^-1进行洗脱,以“2.7.2”项测得西瑞香素的峰面积代入回归方程式计算出西瑞香素的质量浓度,并计算大孔树脂HPD600的解吸率,结果解吸率为98.0%,91.7%,98.1%,97.3%,97.3%,富集西瑞香素回收率为95.7%,88.2%,95.1%,94.5%,94.3%。纯化后西瑞香素纯度由29%提高到53%。

4 讨论

通过实验可知,大孔树脂HPD600对了哥王中西瑞香素具有良好的吸附和解吸性能,了哥王样品原液中的西瑞香素大部分被树脂吸附,而且解吸的效果也很好。说明大孔吸附树脂HPD600是分离纯化了哥王中西瑞香素的优良材料。

本实验结果表明,HPD600纯化了哥王中西瑞香素较佳吸附条件为上样浓度约为90 μg ·mL^-1,上样液体体积为45 mL,上样速度为1.5 mL·min^-1,吸附率达97.5%;较佳的洗脱条件为乙醇浓度90%,洗脱剂体积为30 mL,洗脱速度1.5 mL·min^-1,解吸率为96.4%,富集西瑞香素回收率93.6%,西瑞香素含量明显升高,说明该纯化工艺效果良好。该实验结果为了哥王中西瑞香素的工业化纯化提供了理论参考。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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[5]	耿立冬,张村,肖永庆.了哥王化学成分研究[J].中国中药杂志,2006,31(6):817-819. 目的:对了哥王的茎皮进行化学成分研究。方法:硅胶及ODS柱色谱分离,光谱分析鉴定化合物结构。结果:分离了6个化合物,分别鉴定为西瑞香素-7-O-β-D-葡萄糖苷(1),槲皮苷(2),大黄素甲醚(3),山柰酚-3-芸香糖苷(4),芫花苷(5),伞形香青酰胺(6)。结论:6个化合物均为首次从该植物中分离得到。 DOI:10.3321/j.issn:1001-5302.2006.10.010 URL [本文引用:1]
[6]	么焕开,仲英,尹俊亭.了哥王的化学成分研究(Ⅰ)[J].中草药,2007,38(5):669-670. 了哥王,学名南岭荛花Wikstroemia indicaC.A.Meyer,始载于《岭南采药录》,为瑞香科荛花属植物,根及根皮供药用。该植物为半常绿小灌木,生于山脚及山坡潮湿灌丛中,广东、广西、福建、台湾、浙江、江西、湖南、四川等地均有分布。其性味苦寒、微辛,有毒;具有清热利尿、解毒杀虫 DOI:10.3321/j.issn:0253-2670.2007.05.010 URL [本文引用:1]
[7]	何宇新,马育彪,李玲,等.反相高效液相色谱法测定不同产地无患子药材中常春藤皂苷元的含量[J].时珍国医国药,2010,21(9):2189-2190. 目的建立高效液相色谱法测定酸水解后无患子药材中常春藤皂苷元的含量。方法采用盐酸加热回流水解,氯仿索氏回流提取皂苷元。结果常春藤皂苷元的线性范围为10.04～60.24μg,平均回收率为99.34%,RSD为1.25%。结论所建立的高效液相色谱（HPLC）方法重复性好,专属性强,为无患子药材质量控制标准的建立提供科学依据。 DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2010.09.026 URL [本文引用:1]
[8]	杨振宇,郭薇,吴东媛,等.了哥王中西瑞香素的提取分离及抗肿瘤作用研究[J].天然产物研究与开发,2008,20(3):522-526. 研究西瑞香素（daphnoretin）的体外抗肿瘤作用。采用溶剂提取法、硅胶柱层析、重结晶法从中药了哥王中分离西瑞香素并用薄层色谱法和高效液相色谱法测定纯度。应用MTT法观察不同浓度的西瑞香素对体外培养的人肺腺癌细胞AGZY- 83-a、人喉癌细胞Hep2和人肝癌细胞HepG2的抑制作用。采用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察细胞形态的变化并检测细胞内钙离子浓度。经紫外光谱、质谱和核磁共振光谱确定提取分离西瑞香素的结构，其纯度为99.75%。西瑞香素对体外培养的人肺腺癌细胞AGZY-83-a、人喉癌细胞 Hep2和人肝癌细胞HepG2均有明显抑制作用，且呈浓度依赖性。其对上述三种肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50值分别为8.73、9.71和 31.34g/mL。激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）检测结果表明应用西瑞香素处理肿瘤细胞72 h后，细胞内钙离子浓度显著升高（P〈0.05）。西瑞香素体外对人肺腺癌细胞AGZY-83-a、人喉癌细胞Hep2和人肝癌细胞HepG2均有明显抑制作用，机制可能与细胞内钙超载有关。 DOI:10.3969/j.issn.1001-6880.2008.03.036 URL [本文引用:1]
[9]	张立,刘慧琼,肖玥,等.了哥王叶子化学成分研究(Ⅰ)[J].亚太传统医药,2012,8(8):41-43. 对瑞香科荛花属植物了哥王 [Wikstroemia indica(L.)C.A.Mey]的叶子进行化学成分研究。方法:用甲醇提取及柱色谱等方法进行分离,薄层色谱跟踪检测,波谱法鉴定结构。结果:从该植物叶子中共分离鉴定出6个化合物,分别是西瑞香素(1)、异西瑞香素B(2)、杨梅素(3)、槲皮素(4)、山奈酚(5)、芫花素(6)。结论:首次报道了哥王叶子的化学成分。 DOI:10.3969/j.issn.1673-2197.2012.08.018 URL [本文引用:1]
[10]	陈保红,刘轶华.羊耳菊总黄酮的大孔树脂纯化工艺优化[J].医药导报,2015,34(2):263-266. 目的:探讨羊耳菊总黄酮的大孔树脂纯化工艺条件。方法:考察7种不同型号大孔树脂纯化羊耳菊总黄酮的工艺条件。结果:最佳工艺为采用AB-8大孔树脂;最佳动态吸附条件为上柱液浓度 1.04 g/L,上柱流速为2倍体积/h,pH值为5.06。最佳洗脱条件为4倍体积的700 g/L乙醇洗脱,洗脱流速控制在2倍体积/h。结论:AB-8大孔树脂对羊耳菊总黄酮具有良好的吸附和解析效果。 DOI:10.3870/yydb.2015.02.035 URL [本文引用:1]
[11]	杨丽,王宏伟,李洪波,等.大孔树脂法富集黄芩籽种壳总黄酮[J].医药导报,2017,36(4):420-424. 目的优选富集纯化黄芩籽种壳总黄酮的大孔树脂及工艺条件.方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定野黄芩苷含量.以野黄芩苷作指标成分,运用吸附-解吸实验优选大孔树脂型号;以单因素设计和正交实验考察大孔树脂富集纯化黄芩籽种壳总黄酮工艺.结果 AB-8型大孔树脂吸附-洗脱效率最高,较理想的纯化工艺条件为:上样浓度30.0 g·L-1,最佳吸附量0.3 g·g-1,吸附流速1.0 mL·min-1,树脂柱径高比1∶3,除杂需纯化水量20 BV,5 BV 70％乙醇洗脱.结论该工艺条件下AB-8型大孔树脂富集纯化黄芩耔种壳总黄酮效率较高,工艺条件科学、简便,重复性好. DOI:10.3870/j.issn.1004-0781.2017.04.016 URL [本文引用:1]
[12]	佟立今,孙立新,孙丽霞,等.了哥王化学成分的分离与鉴定[J].中国药物化学杂志,2015,25(1):50-53. [本文引用:1]
[13]	刘慧琼,徐祖疆,王定勇,等.了哥王中西瑞香素对照品的制备及鉴定[J].广东药学院学报,2012,28(1):37-39. 目的建立从了哥王[Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey]茎皮中制备西瑞香素对照品的方法。方法采用萃取、硅胶柱层析和重结晶方法对酶水解后了哥王茎皮的甲醇提取物进行分离纯化,通过MS、IR、1H-NMR和13C-NMR进行结构鉴定,通过TLC法和HPLC法对对照品进行纯度检测。结果从了哥王茎皮中分离纯化出西瑞香素对照品,质量分数〉99.0%。结论该方法制备的西瑞香素对照品符合中药化学对照品的相关要求,可作为了哥王药材及其制剂质量控制用的化学对照品。 DOI:10.3969/j.issn.1006-8783.2012.01.010 URL [本文引用:1]
[14]	曹增梅,黄和.大孔树脂纯化番石榴多酚的工艺优化[J].食品工业科技,2013,34(7):215-218. 考察大孔吸附树脂对番石榴多酚的吸附性能和纯化效果,确立番石榴多酚纯化的较优工艺.通过吸附、解吸实验,筛选出适合分离纯化番石榴多酚的大孔树脂,并确立其纯化工艺参数.结果表明,NKA-9是纯化番石榴多酚的最佳树脂,较佳吸附条件为上样多酚浓度为1.2mg/mL,pH2.0,上样速率为1mL/min,吸附率达到90.5％；较佳的洗脱条件为乙醇浓度 50％,pH3.0,洗脱速率1mL/min,解吸率为89.3％. URL [本文引用:1]

六种瑞香科植物中双黄酮类化合物的分布

2003

... 了哥王(Wikstroemia indica Linn,别名Indian st ringbush)属瑞香科荛花属植物^[1,2],有黄皮子、南岭荛花、小金腰带等别称.其性味苦、辛微温、毒性较大,有清热解毒、消肿散结、逐水散瘀等功能,具有抗肿瘤、抗炎镇痛、抗病毒等多种药理作用^[3].人们常用了哥王与其他中草药配伍,用于治疗坐骨神经痛、淋巴结肿大、软组织损伤、带状疱疹后遗神经痛、风湿痛、恶性肿瘤、肝硬化等症^[4],因主治男性病症疗效好,有利于男性,因此有了哥王之称.目前,了哥王检测出多种化学成分,分别是山萘酚、牛蒡苷元、南荛酚、松脂酚、芫花素^[5]、西瑞香素^[6]等.其中西瑞香素为香豆素类化合物,别称了哥王素,是了哥王药材中主要成分,具有抗病毒、抗炎、抗肿瘤^[7,8]等药理作用,也是民间药物穿王消炎片、了哥王片等主要成分和相关药品质量的主要考察指标成分之一^[9]. ...

了哥王片治疗急性扁桃体炎、急性咽炎、急性气管-支气管炎的临床观察

2014

了哥王研究进展

2001

了哥王化学成分及临床应用研究进展

2011

了哥王化学成分研究

2006

了哥王的化学成分研究(Ⅰ)

2007

反相高效液相色谱法测定不同产地无患子药材中常春藤皂苷元的含量

2010

了哥王中西瑞香素的提取分离及抗肿瘤作用研究

2008

了哥王叶子化学成分研究(Ⅰ)

2012

羊耳菊总黄酮的大孔树脂纯化工艺优化

2015

... 大孔吸附树脂不溶于酸、碱及各种有机溶剂,具有化学性质和物理性质稳定性高、吸附速度快、选择性好、比表面积大和吸附量大等优点^[10],是一类具有很好吸附效果的有机高分子聚合物.近年来,大孔吸附树脂在分离纯化多酚、黄酮类多种活性物质的应用越来越普遍^[11].目前对了哥王中西瑞香素的研究主要是分离纯化方法、结构及含量测定等^[12,13],关于其分离纯化工艺笔者未见报道.本实验选用8种不同型号大孔吸附树脂,利用静态吸附从8种不同型号大孔吸附树脂中筛选出一种吸附-解吸效果最好的大孔吸附树脂,通过优化吸附与解吸纯化工艺,考察大孔吸附树脂对了哥王中西瑞香素的纯化效果的影响,为开发以西瑞香素为主的药品及功能性食品提供理论依据. ...

大孔树脂法富集黄芩籽种壳总黄酮

2017

了哥王化学成分的分离与鉴定

2015

了哥王中西瑞香素对照品的制备及鉴定

2012

大孔树脂纯化番石榴多酚的工艺优化

2013

... 式中:P为样品中西瑞香素的纯度;C₂为洗脱液中西瑞香素浓度(mg ·mL^-1);V₂为洗脱液体积(mL);M为西瑞香素样品的质量(干重,mg)^[14]. ...