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医药导报, 2019, 38(1): 89-91
doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2019.01.020
不同产地水辣蓼药材中两种黄酮类成分含量的测定及聚类分析
Determination and Cluster Analysis of Two Flavones in Polygonum Hydropiper Linn from Different Localities
李明

摘要:

目的 比较不同产地水辣蓼药材中两种黄酮类成分芦丁、槲皮素的含量,为最佳产地的确定提供实验依据。方法 采用高效液相色谱法测定药材中芦丁、槲皮素含量,测定得到的16批药材含量数据采用SAS 9.0版软件进行离差平方和聚类分析,将结果与产地进行分类。结果 建立的方法稳定良好,线性、精密度、重复性、加样回收率均合格。测得16个产地来源药材芦丁含量0.657 8~0.997 5 mg·g-1,槲皮素含量0.498 7~0.686 0 mg·g-1。聚类分析可将16个产地分为两大类,前9类为南水辣蓼,后7类为北水辣蓼,南水辣蓼两种成分含量均比北水辣蓼高。结论 不同产地水辣蓼质量有差异,与地域呈一定相关性。

关键词: 水辣蓼 ; 含量测定 ; 聚类分析

Abstract:

Objective To identify the content of rutin and quercitin in Polygonum hydropiper Linn in 16 different locations. To provide a reference for determining the best producing area of Polygonum Hydropiper Linn. Methods The contents of rutin and quercitin were determined by HPLC. Producing areas were classified by the method of Ward clustering analysis using SAS 9.0. Results The established HPLC method was stable, accurate,and reproducible. Linearity, precision, reproducibility, sample recovery rate were qualified.The contents of rutin and quercitin from 16 localities were determined. The content of rutin was 0.657 8-0.997 5 mg·g-1,the content of quercitin was 0.498 7-0.686 0 mg·g-1. Polygonum bydropiper L. from 16 localities were divided into two categories by cluster analysis, the first 9 were South Polygonum Hydropiper Linn and the latter 7 were North Polygonum Hydropiper Linn.The contents of rutin and quercitin were higher in the first 9 categories. Conclusion Different areas result in different qualities.There is a certain correlation between locality and quality.

Key words: Linn ; Content determination ; Ward clustering analysis

水辣蓼为蓼科植物水辣蓼(Polygonum hydropiper Linn)的全草,味辛,性温,有祛风散瘀、祛湿止痛、消肿解毒等功效。可用于痢疾、肠胃炎、腹泻、脚气、疥癣、风湿关节痛、跌打肿痛等; 外用治毒蛇咬伤、皮肤湿疹等[1]。研究发现,水辣蓼全草主要含黄酮类、挥发油类、鞣质类等[2],其中黄酮类成分主要为黄酮苷及苷元类,具有抗氧化、抗菌等活性[3,4,5]。在医药、食品、植物源农药等方面有着良好的开发前景。芦丁、槲皮素作为对照品控制水辣蓼的质量[6,7,8],在《中华本草》中是以槲皮素作为水辣蓼的薄层对照成分。水辣蓼并无特定道地产区,全国大部分地区均可种植。笔者以芦丁和槲皮素的含量为指标对16批药材进行质量检测,并进行聚类分析,可为水辣蓼的产区选择提供参考。

1 仪器与试药
1.1 仪器

日本岛津高效液相色谱仪(LC-20AD泵,SIL-20A自动进样器,SPD-M20A检测器);KQ5200DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);分析天平(赛多利斯仪器系统有限公司,型号:BSZZ4S,感量:0.001 mg)。

1.2 试药

16批不同产地来源的水辣蓼药材(表1);芦丁、槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院);乙腈(Sigma公司,色谱纯);纯净水(娃哈哈集团有限公司);甲醇、乙醇、乙酸为分析纯。

表1 16批水辣蓼产地
Tab.1 Origin of 16 batches of Polygonum hydropiper Linn
编号 产地 编号 产地
1 广东茂林 9 吉林白城
2 广东广州 10 吉林通化
3 广西玉林 11 辽宁锦州
4 广西南宁 12 辽宁大连
5 贵州湄潭县 13 河北白洋淀
6 贵州六盘水盘县 14 河北邯郸
7 贵州黔东南荔波县 15 陕西商洛
8 贵州安顺 16 陕西汉中

表1 16批水辣蓼产地

Tab.1 Origin of 16 batches of Polygonum hydropiper Linn

2 方法与结果
2.1 溶液的配制

2.1.1 对照品溶液的配制 精密称取芦丁和槲皮素对照品10 mg,用甲醇溶解于10 mL量瓶中,配制成1 mg·mL-1溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 取干燥水辣蓼药材粉碎,粉末过孔径250 μm(四号)筛,精密称1.0 g,置具塞锥形瓶中,精密加入60%乙醇50 mL,45 ℃超声提取30 min,冷却至室温后,60%乙醇补足重量。滤过,将续滤液水浴蒸干,甲醇溶解至5 mL量瓶中,过孔径0.45 μm微孔滤膜,续滤液进入高效液相色谱中检测。

2.2 色谱条件

Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流速 1.0 mL·min-1;柱温:25 ℃; 检测波长:360 nm ;进样量:10 μL,流动相:乙腈-0.1%乙酸溶液(20:80)等度洗脱。分离色谱见图1。芦丁在约8 min出峰,槲皮素在约17 min出峰。

图1 芦丁、槲皮素对照品(A)和水辣蓼药材(B) HPLC色谱图
1.芦丁;2.槲皮素

Fig.1 HPLC chromatograms of rutin and quercitin reference (A) and Polygonum hydropiper Linn (B)
1.rutin;2.quercitin

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密称取适量芦丁、槲皮素对照品储备液配制成芦丁浓度5.213,10.23,20.56,50.12,100.5,200.2 μg·mL-1,槲皮素浓度5.182,10.16,20.33,50.82,101.6,203.2 μg·mL-1标准混合对照液。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,得到回归方程分别为Y=26 802X+20 123,r=0.999 5;Y=30 256X+12 456,r=0.997。结果表明芦丁、槲皮素分别在5.213~200.2 μg·mL-1和5.182~203.2 μg·mL-1两个范围内线性良好。

2.3.2 重复性实验 精密称取同一批药材粉末6份(编号1),按照供试品溶液制备方法制备,HPLC测定得到6份芦丁、槲皮素的含量,RSD分别为0.213%和0.356%,均小于3%,符合要求。

2.3.3 精密度实验 取同一对照品溶液(芦丁50.12 μg·mL-1,槲皮素50.82 μg·mL-1)按照上述色谱条件连续进样5次,芦丁和槲皮素日间精密分别为1.211%和1.233%,日内精密度分别为0.155%和0.215%。

2.3.4 稳定性实验 取同一份对照品溶液(芦丁50.12 μg·mL-1,槲皮素50.82 μg·mL-1),按照上述色谱条件分别于0,4,8,12,24,48 h进样,RSD分别为0.233%和0.456%,表明样品在48 h内稳定。

2.3.5 回收率实验 精取同一已知含量的水辣蓼分别置9个三角瓶中,每3份一组,按样品中芦丁和槲皮素含量的 120%,100%,80% 分别加入适量芦丁和槲皮素对照品溶液,然后按“2.1.2”项方法制备,测定,芦丁和槲皮素对照品平均加样回收率分别为99.78%和97.281%,RSD分别为0.123%1.451%,加样回收率合格。

2.4 聚类分析

本实验采用离差平方和方法对数据进行聚类分析。此法效仿方差分析的基本思想,即合理的分类使得类内离差平方和较小,而类间离差平方和较大[9]。数据统计分析软件为SAS 9.0版。

按照“2.2”项方法对16批药材中芦丁、槲皮素含量进行测定,对比见表2。16个产地来源药材芦丁含量为0.6578~0.9975 mg·g-1,槲皮素含量为0.4987~0.686 mg·g-1。芦丁含量最高的药材来自1号(广东茂林),为(0.9975±0.0280) mg·g-1;槲皮素含量最高的药材来自3号(广西玉林),为(0.7816±0.0112) mg·g-1

表2 16批药材来源及成分含量
Tab.2 Origin and component content of 16 batches of Polygonum hydropiper Linn mg·g-1,x¯±s,n=3
产地编号 芦丁 槲皮素
1 0.997 5±0.028 0 0.678 5±0.013 1
2 0.876 4±0.020 0 0.597 4±0.000 9
3 0.954 2±0.045 0 0.781 6±0.011 2
4 0.876 3±0.059 0 0.527 8±0.006 1
5 0.762 4±0.032 0 0.521 3±0.009 9
6 0.685 3±0.032 0 0.498 7±0.008 7
7 0.876 2±0.040 0 0.612 3±0.012 0
8 0.657 8±0.037 0 0.541 2±0.004 0
9 0.682 3±0.051 0 0.512 3±0.026 0
10 0.647 2±0.004 0 0.459 1±0.031 0
11 0.715 6±0.016 0 0.612 3±0.015 0
12 0.714 3±0.004 0 0.458 9±0.013 0
13 0.756 8±0.049 0 0.513 8±0.003 0
14 0.749 5±0.040 0 0.612 3±0.014 0
15 0.697 8±0.037 0 0.542 1±0.006 0
16 0.726 8±0.017 0 0.685 6±0.009 0

表2 16批药材来源及成分含量

Tab.2 Origin and component content of 16 batches of Polygonum hydropiper Linn mg·g-1,x¯±s,n=3

将上述结果经过聚类分析可分为两类:1~9号一类,10~16号为一类,基本可以分为南水辣蓼(芦丁平均含量为0.818 7 mg·g-1,槲皮素平均含量为0.585 7 mg·g-1)和北水辣蓼(芦丁平均含量0.715 4 mg·g-1,槲皮素平均含量为0.554 9 mg·g-1),两类对比,南水辣蓼两种成分含量均比北水辣蓼高。见图2。

图2 16批水辣蓼聚类分析

Fig.2 Clustering analysis on 16 batches of Polygonum hydropiper Linn

3 讨论

中药材辣蓼通常指蓼科植物水辣蓼或旱辣蓼的干燥全草,产于我国南北各地,多生于溪边、山坡、湿地[10]。本实验研究了解不同产地水辣蓼中两种黄酮成分含量差异,当聚类分析分成两类时,按地区分为南北两大类,南水辣蓼含量更高。其中9号产地为吉林白城湿地附近,含量较北水辣蓼高,可被分到第一类中。当聚类分析分为四类时,即1~4号产地、5~9号产地、10~12号产地、13~16号产地,产地明确被分为我国东南、西南、东北、中部地区,其中西南贵州地区水辣蓼芦丁、槲皮素含量最高。提示湿度高的地区水辣蓼质量更高,为水辣蓼的种植和质量提升提供理论依据。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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辣蓼是一种广泛分布于我国的传统中草药,通常指水辣蓼(Polygonum hydropiper)和旱辣蓼(Polygonumflaccidum)的干燥全草,具有健脾化湿、除湿化滞、止痢止痛、解毒化瘀等功效。近几年两种辣蓼植物提取物在兽药、植物源农药方面进行了较为深入研究,结果表明,水辣蓼和旱辣蓼的作用机制、功效及应用方向存在明显差别。本文对上述两种植物的次生代谢产物种类及其差异进行了综述和对比分析,为辣蓼植物活性成分功能研究与深化利用提供依据。
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[本文引用:1]
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水辣蓼
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李明

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