目的 比较不同产地水辣蓼药材中两种黄酮类成分芦丁、槲皮素的含量,为最佳产地的确定提供实验依据。方法 采用高效液相色谱法测定药材中芦丁、槲皮素含量,测定得到的16批药材含量数据采用SAS 9.0版软件进行离差平方和聚类分析,将结果与产地进行分类。结果 建立的方法稳定良好,线性、精密度、重复性、加样回收率均合格。测得16个产地来源药材芦丁含量0.657 8~0.997 5 mg·g-1,槲皮素含量0.498 7~0.686 0 mg·g-1。聚类分析可将16个产地分为两大类,前9类为南水辣蓼,后7类为北水辣蓼,南水辣蓼两种成分含量均比北水辣蓼高。结论 不同产地水辣蓼质量有差异,与地域呈一定相关性。
Objective To identify the content of rutin and quercitin in Polygonum hydropiper Linn in 16 different locations. To provide a reference for determining the best producing area of Polygonum Hydropiper Linn. Methods The contents of rutin and quercitin were determined by HPLC. Producing areas were classified by the method of Ward clustering analysis using SAS 9.0. Results The established HPLC method was stable, accurate,and reproducible. Linearity, precision, reproducibility, sample recovery rate were qualified.The contents of rutin and quercitin from 16 localities were determined. The content of rutin was 0.657 8-0.997 5 mg·g-1,the content of quercitin was 0.498 7-0.686 0 mg·g-1. Polygonum bydropiper L. from 16 localities were divided into two categories by cluster analysis, the first 9 were South Polygonum Hydropiper Linn and the latter 7 were North Polygonum Hydropiper Linn.The contents of rutin and quercitin were higher in the first 9 categories. Conclusion Different areas result in different qualities.There is a certain correlation between locality and quality.
水辣蓼为蓼科植物水辣蓼(
日本岛津高效液相色谱仪(LC-20AD泵,SIL-20A自动进样器,SPD-M20A检测器);KQ5200DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);分析天平(赛多利斯仪器系统有限公司,型号:BSZZ4S,感量:0.001 mg)。
2.1.1 对照品溶液的配制 精密称取芦丁和槲皮素对照品10 mg,用甲醇溶解于10 mL量瓶中,配制成1 mg·mL-1溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取干燥水辣蓼药材粉碎,粉末过孔径250 μm(四号)筛,精密称1.0 g,置具塞锥形瓶中,精密加入60%乙醇50 mL,45 ℃超声提取30 min,冷却至室温后,60%乙醇补足重量。滤过,将续滤液水浴蒸干,甲醇溶解至5 mL量瓶中,过孔径0.45 μm微孔滤膜,续滤液进入高效液相色谱中检测。
Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流速 1.0 mL·min-1;柱温:25 ℃; 检测波长:360 nm ;进样量:10 μL,流动相:乙腈-0.1%乙酸溶液(20:80)等度洗脱。分离色谱见
2.3.1 线性关系考察 精密称取适量芦丁、槲皮素对照品储备液配制成芦丁浓度5.213,10.23,20.56,50.12,100.5,200.2 μg·mL-1,槲皮素浓度5.182,10.16,20.33,50.82,101.6,203.2 μg·mL-1标准混合对照液。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,得到回归方程分别为
2.3.2 重复性实验 精密称取同一批药材粉末6份(编号1),按照供试品溶液制备方法制备,HPLC测定得到6份芦丁、槲皮素的含量,RSD分别为0.213%和0.356%,均小于3%,符合要求。
2.3.3 精密度实验 取同一对照品溶液(芦丁50.12 μg·mL-1,槲皮素50.82 μg·mL-1)按照上述色谱条件连续进样5次,芦丁和槲皮素日间精密分别为1.211%和1.233%,日内精密度分别为0.155%和0.215%。
2.3.4 稳定性实验 取同一份对照品溶液(芦丁50.12 μg·mL-1,槲皮素50.82 μg·mL-1),按照上述色谱条件分别于0,4,8,12,24,48 h进样,RSD分别为0.233%和0.456%,表明样品在48 h内稳定。
2.3.5 回收率实验 精取同一已知含量的水辣蓼分别置9个三角瓶中,每3份一组,按样品中芦丁和槲皮素含量的 120%,100%,80% 分别加入适量芦丁和槲皮素对照品溶液,然后按“2.1.2”项方法制备,测定,芦丁和槲皮素对照品平均加样回收率分别为99.78%和97.281%,RSD分别为0.123%1.451%,加样回收率合格。
本实验采用离差平方和方法对数据进行聚类分析。此法效仿方差分析的基本思想,即合理的分类使得类内离差平方和较小,而类间离差平方和较大[9]。数据统计分析软件为SAS 9.0版。
按照“2.2”项方法对16批药材中芦丁、槲皮素含量进行测定,对比见
将上述结果经过聚类分析可分为两类:1~9号一类,10~16号为一类,基本可以分为南水辣蓼(芦丁平均含量为0.818 7 mg·g-1,槲皮素平均含量为0.585 7 mg·g-1)和北水辣蓼(芦丁平均含量0.715 4 mg·g-1,槲皮素平均含量为0.554 9 mg·g-1),两类对比,南水辣蓼两种成分含量均比北水辣蓼高。见
中药材辣蓼通常指蓼科植物水辣蓼或旱辣蓼的干燥全草,产于我国南北各地,多生于溪边、山坡、湿地[10]。本实验研究了解不同产地水辣蓼中两种黄酮成分含量差异,当聚类分析分成两类时,按地区分为南北两大类,南水辣蓼含量更高。其中9号产地为吉林白城湿地附近,含量较北水辣蓼高,可被分到第一类中。当聚类分析分为四类时,即1~4号产地、5~9号产地、10~12号产地、13~16号产地,产地明确被分为我国东南、西南、东北、中部地区,其中西南贵州地区水辣蓼芦丁、槲皮素含量最高。提示湿度高的地区水辣蓼质量更高,为水辣蓼的种植和质量提升提供理论依据。
The authors have declared that no competing interests exist.