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医药导报, 2019, 38(5): 632-635
doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2019.05.022
壳聚糖山苓祛斑凝胶的高效液相指纹图谱*
Fingerprint Analysis of the Chitosan Shanling Quban Gels by HPLC
陈军, 熊鑫, 余南才

摘要:

目的 建立壳聚糖山苓祛斑凝胶的高效液相(HPLC)指纹图谱分析方法。方法 采用Agilent C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸,梯度洗脱,检测波长286 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2010年版)软件处理图谱。结果 建立了壳聚糖山苓祛斑凝胶的HPLC指纹图谱,以阿魏酸为参照物,标出10个共有峰,10批壳聚糖山苓祛斑凝胶指纹图谱相似度均>0.9。结论 该实验所建立的HPLC指纹图谱专属性强,且操作方法简便可靠,可用于壳聚糖山苓祛斑凝胶的质量评价。

关键词: 山苓祛斑凝胶 ; 阿魏酸 ; 指纹图谱

Abstract:

Objective To establish HPLC fingerprint and control the quality of chitosan Shanling Quban gels. Methods HPLC was applied to analyze the constituents of chitosan Shanling Quban gels. Using Agilent C18 Columns (4.6 mm×200 mm,5 μm). According to the National Pharmacopoeia Commission "HPLC Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System" (2010 Edition), the chromatography was performed with methanol -0.1% phosphoric acid as mobile phase in gradient elution. The detection wavelength was 286 nm and the flow rate and column temperature was seted at 1.0 mL·min-1 and 30 ℃, respectively. Results The HPLC fingerprints of chitosan Shanling Quban gels were established, and 10 common characteristic peaks were labeled. The similarity of HPLC fingerprint was 0.9 for 10 batches of samples. Conclusion The HPLC fingerprint profile established in this experiment is highly specific and the method is simple and reliable which could reflect the quality of chitosan Shanling Quban gels.

Key words: gels ; Ferulic acid ; Fingerprint

壳聚糖山苓祛斑凝胶是由茯苓、白芷、白术、白芨、当归、丁香等12味药材组成,临床上主要用于治疗黄褐斑,为我院中医部周利副主任医师经验方,具有活血行气、祛斑养颜的功效,本方临床使用多年,用于治疗黄褐斑,疗效确切。本方涉及多味中药,化学成分较复杂,且还受各味药材的产地、用药部位和制备工艺的影响,仅以尿囊素、羟基红花黄色素A的含量测定作为质量控制的方法,难以全面准确地反映该制剂的质量。而指纹图谱能在一定程度上反映其质量的可控性、稳定性及真实性。质量控制方式及技术体系[1,2,3,4,5,6,7]能全面地反映制剂的内在特征。本实验采用高效液相色谱(HPLC)法建立壳聚糖山苓祛斑凝胶的指纹图谱检测方法,为提高壳聚糖山苓祛斑凝胶的质量控制标准和全面的质量检查提供参考。

1 仪器与试药
1.1 仪器

Waters e2695高效液相色谱仪(紫外检测器,四元泵,柱温箱),BP211D电子天平(德国赛多利斯公司,Max210g ,d=0.01mg)。

1.2 试药

欧前胡素(批号:110826-201616)、异欧前胡素(批号:110827-201611)、阿魏酸(批号:110773-201614)、丁香酚(批号:110725-201615)均购自中国食品药品检定研究院;壳聚糖山苓祛斑凝胶自制,批号分别为:20170510,20170512,20170520,20170525,20170527,20170601,20170603,20170605,20170610,20170613,甲醇为色谱纯(美国TEDIA公司),二氯甲烷、磷酸为分析纯(天津市白世化工有限公司),纯化水自制。

2 方法与结果
2.1 色谱条件

AgilentC18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相为甲醇(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱(0~10 min,25%A;>10~28 min,25%A→55%A;>28~45 min,55%A→85%A;>45~50 min,85%A→25%A)[8,9,10,11,12,13,14],检测波长286 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,进样量10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备 分别精密称取减压干燥至恒重的欧前胡素、异欧前胡素、阿魏酸、丁香酚对照品适量至量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,再分别精密移取上述对照品适量至同一量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得混合对照品溶液(欧前胡素123.5 μg·mL-1、异欧前胡素108.4 μg·mL-1、阿魏酸122.9 μg·mL-1、丁香酚96.6 μg·mL-1)。

2.2.2 试品溶液制备 精密称取本品(批号:20170510)5 g至烧杯中,加入纯化水15 mL溶解后转移至分液漏斗中,加二氯甲烷萃取3次,每次20 mL,合并二氯甲烷,水浴蒸干,残渣用甲醇溶解并定容于25 mL量瓶中,经孔径0.45 μm 微孔滤膜滤过,作为供试品溶液,备用[15,16,17]

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度实验 取壳聚糖山苓祛斑凝胶(批号:20170510),按“2.2.2”项方法制备供试品溶液,按“2.1”项色谱条件连续自动进样6次进行测定,记录色谱图,以阿魏酸为参照峰,测得样品各共有峰相对保留时间RSD<1.0%,相对峰面积RSD<3.0%,说明该仪器的精密度良好。

2.3.2 稳定性实验 取壳聚糖山苓祛斑凝胶(批号:20170510),按“2.2.2”项方法制备供试品溶液,按“2.1”项色谱条件测定,分别于0,3,5,10,15,20 h自动进样,记录色谱图,以阿魏酸为参照峰,测得样品各共有峰相对保留时间RSD<2.0%,相对峰面积RSD<5.0%,表明供试品溶液在20 h内稳定性良好。

2.3.3 重复性实验 取同一批号(20170510)壳聚糖山苓祛斑凝胶,按“2.2.2”项方法平行制备6份供试品溶液,按“2.1”项色谱条件测定,记录色谱图,以阿魏酸为参照峰,测得样品各共有峰相对保留时间RSD<3.0%,相对峰面积RSD<5.0%,表明该方法的重复性良好。

2.4 指纹图谱的建立及分析

2.4.1 指纹图谱的建立 取10批壳聚糖山苓祛斑凝胶的供试品,分别按“2.2.2”项方法制备供试品溶液10份,按“2.1”项色谱条件测定,记录色谱图,将10批壳聚糖山苓祛斑凝胶的液相色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2010版)软件进行评价,建立壳聚糖山苓祛斑凝胶的指纹图谱[18,19],并生成对照色图谱R(图1)。

图1 10批壳聚糖山苓祛斑凝胶HPLC指纹图谱及对照图谱

Fig.1 HPLC fingerprint and reference fingerprint of ten batches of chitosan Shanling Quban gel

2.4.2 共有峰的标定及参照峰的选择 对供试品溶液的色谱图进行分析,标定了壳聚糖山苓祛斑凝胶中出峰时间稳定、特征明显的10个共有峰为特征峰(图2),并确定了其中2,5,7,9号峰分别为欧前胡素、阿魏酸、异欧前胡素、丁香酚(图3)。其中5号峰阿魏酸的保留时间居中,分离度好,峰面积大,易于辨认,故选为本品指纹图谱的参照峰。

图2 共有峰色谱图

Fig.2 Common peaks of the chromatogram

图3 混合对照品色谱图
2.欧前胡素;5.阿魏酸;7.异欧前胡素;9.丁香酚

Fig.3 Chromatogram of the mixed reference
2.imperatorin;5.ferulic acid;7.isoimperatorin;9.eugenol

2.4.3 指纹图谱相似度评价 对10批壳聚糖山苓祛斑凝胶所测得的色谱图采用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2010版)软件进行分析,进过数据匹配,以中位法建立指纹图谱,得10批样品和对照指纹图谱的相似度均>0.9(表1)。并以5号峰阿魏酸为参照物,计算各共有色谱峰的相对保留时间和相对峰面积,见表2,3。

表1 10批壳聚糖山苓祛斑凝胶指纹图谱相似度结果
Tab.1 Similarity results of the fingerprints for ten batches of chitosan Shanling Quban gel
批号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 R
S1 1.000 0.995 0.976 0.975 0.996 0.998 0.998 0.996 0.998 0.996 0.997
S2 0.995 1.000 0.977 0.976 0.999 0.997 0.997 0.999 0.996 0.998 0.998
S3 0.976 0.977 1.000 0.998 0.977 0.978 0.978 0.977 0.978 0.976 0.986
S4 0.975 0.976 0.998 1.000 0.976 0.977 0.977 0.976 0.977 0.975 0.985
S5 0.996 0.999 0.977 0.976 1.000 0.977 0.998 0.999 0.997 0.999 0.998
S6 0.998 0.997 0.978 0.977 0.997 1.000 1.000 0.998 0.999 0.996 0.998
S7 0.998 0.997 0.978 0.977 0.998 1.000 1.000 0.998 0.999 0.997 0.999
S8 0.996 0.999 0.977 0.976 0.999 0.998 0.998 1.000 0.997 0.998 0.998
S9 0.998 0.996 0.978 0.977 0.997 0.999 0.999 0.997 1.000 0.997 0.998
S10 0.996 0.998 0.976 0.975 0.999 0.996 0.997 0.993 0.997 1.000 0.997
R 0.997 0.998 0.986 0.985 0.998 0.998 0.999 0.998 0.998 0.997 1.000

表1 10批壳聚糖山苓祛斑凝胶指纹图谱相似度结果

Tab.1 Similarity results of the fingerprints for ten batches of chitosan Shanling Quban gel

3 讨论
3.1 波长的选择

本制剂中所含的大部分药材在2015版《中华人民共和国药典》及其他文献均无或极少HPLC检测方法,故选取白芷、当归、柴胡、丁香、红花等有HPLC法的几味药材来选定检测波长,其中,柴胡和红花的检测波长分别为210和403 nm,紫外光吸收少,壳聚糖山苓祛斑凝胶样品的整体峰吸收较差,不利于制剂指纹图谱的采集,故参考文献,选取白芷中欧前胡素、异欧前胡素、当归中阿魏酸、丁香中丁香酚结合全波长扫描来选取检测波长,其中286 nm处色谱峰信息丰富,基线平稳,特征峰明显,故选取286 nm作为壳聚糖山苓祛斑凝胶指纹图谱的检测波长。

3.2 流动相的选择

本制剂考察了乙腈-磷酸、甲醇-磷酸等常用的指纹图谱流动相系统,其中在甲醇-磷酸条件下,色谱峰峰型良好,特征峰多,并结合梯度洗脱,色谱峰分离度好,故选择甲醇-磷酸作为壳聚糖山苓祛斑凝胶指纹图谱的检测流动相。

本实验对10批壳聚糖山苓祛斑凝胶的指纹图谱进行相似度计算,10批壳聚糖山苓祛斑凝胶的相似度、相对保留时间和相对峰面积均在合理的范围内,表明壳聚糖山苓祛斑凝胶各批次成分间性质稳定,说明该制剂的制备工艺纯熟,本实验建立的壳聚糖山苓祛斑凝胶指纹图谱方法简单,易操作,可用于完善其质量标准的研究。

表2 10批壳聚糖山苓祛斑凝胶共有峰的相对保留时间
Tab.2 Relative retention time of common peaks for ten batches of chitosan Shanling Quban gel
批号 峰号
1 2 3 4 6 7 8 9 10
S1 0.4302 0.6462 0.8085 0.9478 1.0626 1.1936 1.3183 1.4790 1.5261
S2 0.4324 0.6478 0.8092 0.9473 1.0623 1.1935 1.3179 1.4771 1.5234
S3 0.4301 0.6464 0.8074 0.9474 1.0624 1.1913 1.3159 1.4826 1.5285
S4 0.4294 0.6445 0.8069 0.9457 1.0623 1.1925 1.3175 1.4763 1.5224
S5 0.4298 0.6455 0.8075 0.9469 1.0630 1.1932 1.3182 1.4780 1.5246
S6 0.4303 0.6451 0.8070 0.9470 1.0631 1.1930 1.3178 1.4774 1.5240
S7 0.4281 0.6446 0.8080 0.9466 1.0633 1.1932 1.3182 1.4781 1.5246
S8 0.4308 0.6459 0.8080 0.9466 1.0648 1.1934 1.3190 1.4799 1.5270
S9 0.4274 0.6446 0.8076 0.9460 1.0667 1.1931 1.3172 1.4791 1.5236
S10 0.4274 0.6446 0.8076 0.9460 1.0667 1.1931 1.3172 1.4791 1.5236

表2 10批壳聚糖山苓祛斑凝胶共有峰的相对保留时间

Tab.2 Relative retention time of common peaks for ten batches of chitosan Shanling Quban gel

表3 10批壳聚糖山苓祛斑凝胶共有峰的相对峰面积
Tab.3 Relative peak area of common peaks for ten batches of chitosan Shanling Quban gel
批号 峰号
1 2 3 4 6 7 8 9 10
S1 0.1726 0.4575 0.0160 0.0702 0.0657 0.9562 0.0641 0.3451 0.0424
S2 0.1761 0.4615 0.0154 0.0709 0.0650 0.9519 0.0673 0.3448 0.0441
S3 0.1747 0.4663 0.0165 0.0745 0.0646 1.0452 0.0666 0.3483 0.0465
S4 0.1699 0.4544 0.0157 0.0747 0.0640 0.9498 0.0636 0.3488 0.0479
S5 0.1760 0.4648 0.0160 0.0743 0.0658 0.9629 0.0642 0.3583 0.0542
S6 0.1750 0.4617 0.0155 0.0740 0.0658 0.9536 0.0644 0.3552 0.0494
S7 0.1741 0.4638 0.0153 0.0757 0.0648 0.9556 0.0663 0.3535 0.0467
S8 0.1667 0.4572 0.0158 0.1018 0.0649 1.0094 0.0657 0.3475 0.0472
S9 0.1770 0.4965 0.0158 0.0798 0.0693 1.0185 0.0719 0.3585 0.0474
S10 0.1746 0.4947 0.0158 0.0783 0.0687 1.0155 0.0692 0.3622 0.0507

表3 10批壳聚糖山苓祛斑凝胶共有峰的相对峰面积

Tab.3 Relative peak area of common peaks for ten batches of chitosan Shanling Quban gel

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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[11] 项妤,张贵君,甘德全.HPLC测定CO2超临界萃取的当归油药效组分[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(8):64-67.
目的:测定CO2超临界萃取的当归油药效组分藁本内酯、正丁烯基 苯酞、正丁基苯酞.方法:采用HPLC,ZORBAX-Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm× 25 cm,5 μm),流动相0.05 mol· L-1醋酸铵水溶液(pH 4.0±0.2)(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~10 min,30%B;10~60 min,30~60% B;60~65 min,60% B;65 ~70 min,60~30%B),检测波长274 nm,流速1.0 mL· min-1,柱温25℃.结果:超临界萃取的当归油药效组分藁本内酯、正丁烯基苯酞、正丁基苯酞分别在0.4610~20.842 6μg,0.012 6~0.4768μg,0.0228~0.8251μg呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为101.27%,99.12%,97.14%.结 论:HPLC可用于超临界萃取的当归油药效组分测定,为建立当归油及其制剂与临床疗效对应的质量标准提供了新的思路和方法.
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[12] 曾彬,刘玉红,刘云华,.HPLC指纹图谱对比研究川芎和当归的化学成分[J].华西药学杂志,2012,27(5):578-581.
目的对比川芎、当归药材水溶性和脂溶性成分的HPLC指纹图谱。方法分别收集12批川芎、10批当归药材,采用HPLC建立指纹图谱;色谱条件为LUNA C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-1%冰醋酸,进行梯度洗脱,检测波长280 nm,流速1.0 mL.min-1,柱温35℃。结果分别建立了川芎、当归药材水溶性和脂溶性成分的HPLC指纹图谱共有模式。结论所建立的指纹图谱可作为区分川芎、当归药材的参考依据。
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[13] 曹伟宇,贺文娟,雷丸,.HPLC法同时测定干髓糊剂中丁香酚和麝香草酚的含量[J].中国药房,2017,28(30):4268-4271.
目的建立高效液相色谱法同时测定干髓糊剂中丁香酚和麝香草酚含量的方法。方法采用Wonda Cract C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇(A)-0.2%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,检测波长:274 nm;流速1.0 m L·min~(-1)。结果丁香酚和麝香草酚分别在0.02~0.19 mg·m L~(-1)(r=0.9997)和0.03~0.30 mg·m L~(-1)(r=0.9996)浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.34%、98.31%,RSD分别为1.09%、1.58%。结论本研究所建立的方法简便,准确,专属性强,可用于干髓糊剂中丁香酚和麝香草酚的含量测定。
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[14] 张锐,卢金清,江汉美,.高效液相色谱法测定不同产地丁香中丁香酚含量研究[J].亚太传统医药,2015,11(12):36-38.
目的:采用高效液色谱(HPLC)法对不同产地丁香中丁香酚的含量进行比较研究.方法:采用DIONEX Acclaim120-C18色谱柱(4.6mm&#215; 250mm,5μm),以甲醇-水(65∶35)为流动相,检测波长为280nm,流速为1.0mL/min.结果:丁香酚在2.164~10.82μg范围内与峰面积呈良好的线性关系:Y=15.999 5X-5.712 2,r=0.999 9;平均加样回收率为99.93%(RSD=0.06%,n-6),不同产地丁香中丁香酚的含量有显著差异,其中以印尼产丁香含量较高,其次为广东产丁香.结论:该方法操作简便、重现性好,可作为丁香中丁香酚含量的测定方法,为完善丁香质量控制体系提供科学依据.
DOI:10.11954/ytctyy.201512016      URL    
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[15] 陈军,舒祥,余南才.山苓祛斑凝胶剂提取物质量标准研究[J].中国民族民间医药,2016,25(21):11-13.
目的:建立山苓祛斑凝胶的质量标准。方法:运用HPLC法测定祛斑凝胶提取物中尿囊素、阿魏酸含量作为评价指标,流动相分别为乙腈-0.085%磷酸-水(5∶95)、(17∶83),流速为0.5m L/min、1m L/min,柱温30℃,检测波长为224nm、316nm。结果:尿囊素、阿魏酸线性范围0.368~2.208μg、0.424~2.544μg,精密度RSD 0.55%、0.92%,稳定性RSD 1.4%、1.5%,重复性RSD 0.95%、0.55%。祛斑凝胶剂中尿囊素、阿魏酸含量分别为11.2mg/g、4.5mg/g。结论:该方法重复性好,质量可控,可为该凝胶制剂进行中试、生产提供参考。
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[16] 郭红叶,匡颖,闫小平,.祛斑凝胶剂质量标准[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(14):45-47.
with RSD of 1.46%. Conclusion: This method could be adopted as a standard for quality control of Quban gels and provide a reference for industrial production of this preparation.
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[17] 黄燕,戴余雯,焦海胜,.神经性皮炎凝胶剂的质量标准研究[J].时珍国医国药 ,2016,27(11):2646-2649.
目的 建立神经性皮炎凝胶剂的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对制剂中苦参、黄柏、木贼进行定性鉴别;运用高效液相色谱法对制剂主药苦参中苦参碱及氧化苦参碱进行含量测定。采用Inertsil氨基柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-无水乙醇-3%磷酸水溶液(79:10:11)为流动相,流速1.0 mL·min^-1;检测波长205 nm;柱温25℃。结果苦参、黄柏、木贼的定性鉴别方法专属性强,阴性无干扰;苦参碱在0.0132~0.066mg·mL^-1范围内线性关系良好(r=0.9998),平均加样回收率为95.98%,RSD=1.04%;氧化苦参碱在0.0456~0.228mg·mL^-1范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为95.45%,RSD=1.20%。结论 所建立的定性定量方法操作简便、准确、稳定且无干扰,可用于该制剂的质量控制。
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[18] 张立军,李芸,戴海蓉,.高乌头炮制品的HPLC指纹图谱研究及其2种生物碱成分含量测定[J].中国现代应用药学,2018,35(1):57-62.
目的建立不同产区高乌头炮制品的HPLC指纹图谱,并测定2种生物碱成分的含量,为高乌头制品质量控制提供参考依据。方法通过HPLC梯度洗脱建立高乌头炮制品的指纹图谱,并采用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)、主成分分析和聚类分析对指纹图谱进行分析。结果建立了高乌头炮制品指纹图谱,10批高乌头制品的相似度0.90,标定共有峰18个,并对其中2主要成分(高乌甲素、冉乌头碱)进行含量测定;聚类分析将所有批次高乌头制品分为4类,反映了10批不同产区高乌头制品的质量特征;主成分分析筛选出累计贡献率达到88.8%的4个主成分,得到决定高乌头药材质量7个化学成分。结论该方法重复性好、特征性强,可用于高乌头炮制品全面质量评价。
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[19] 王露晨,张欢欢,余陈欢,.石荠苧黄酮提取物的指纹图谱与含量测定分析[J].中国现代应用药学,2018,35(2):199-203.
目的 建立石荠苧黄酮提取物的指纹图谱,并测定5个指标成分的含量。方法 采用Hypersil BDS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速设为1.0 mL·min-1,柱温为30 ℃,检测波长270 nm。结果 得到9批次的石荠苧黄酮提取物HPLC指纹图谱,共标识了13个共有峰,其中5个为黄酮类化合物。各样品色谱图与对照色谱图的相似度均>0.96。木犀草苷、木犀草素、芹菜素、山奈酚和7-甲氧基汉黄芩素分别在19.42~194.2 μg·mL-1、0.520 0~5.200 μg·mL-1、0.214 0~2.140 μg·mL-1、0.134 4~1.344 μg·mL-1和0.013 60~0.136 0 μg·mL-1内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.31%,98.94%,99.15%,100.95%和98.57%,RSD<3%(n=5)。结论 该方法稳定、可靠,可为石荠苧的质量评价提供参考依据。;OBJECTIVE To establish the method of fingerprint analysis and determination of flavonoids from Mosla scabra(MSF) by HPLC. METHODS HPLC separation was carried out on Hypersil BDS C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column with a gradient elution consisted of methanol and 0.1% phosphoric acid aqueous solution. The flow rate was kept at 1.0 mL·min-1. Column temperature was kept constantly at 30℃. The UV absorbance was monitored at 270 nm. RESULTS Nine batches of MSF were collected to generate representative chromatographic fingerprints. Thirteen common peaks were defined in characteristic fingerprints and five selected marker compounds in MSF were well identified by comparing the retention times of the reference standards. The similarity values of 9 samples were all higher than 0.96. Reasonable linear regressions of cynaroside, luteolin, apigenin, kaempferol and 7-methoxy wogonite were obtained in the fingerprints at ranges of 19.42-194.2 μg·mL-1, 0.520 0-5.200 μg·mL-1, 0.214 0-2.140 μg·mL-1, 0.134 4-1.344 μg·mL-1 and 0.013 60-0.136 0 μg·mL-1, respectively. Average recovery rates of five compounds were 100.31%, 98.94%, 99.15%, 100.95% and 98.57%, respectively, with the RSD of less than 3% (n=5). CONCLUSION The method is reproducible and precise and can be used for convenient quality assessment of Mosla scabra.
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山苓祛斑凝胶
阿魏酸
指纹图谱

gels
Ferulic acid
Fingerprint

作者
陈军
熊鑫
余南才

CHEN Jun
XIONG Xin
YU Nancai