辣椒素对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的影响

引用本文

任公平, 吕正鑫, 孙琳林. 辣椒素对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的影响[J]. 医药导报, 2016,35(2): 132-136
Gongping REN, Hui NA, Zhengxin LYU, et al. Effects of Capsaicin on Human Large Cell Lung Carcinoma NCI-H460[J]. HERALD OF MEDICINE,2016,35(2): 132-136 复制到剪切板

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《医药导报》编辑部

辣椒素对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的影响

任公平¹, 吕正鑫², 孙琳林¹

1.牡丹江医学院红旗医院中西医结合科,牡丹江 157011

2.黑龙江省佳木斯市中医医院糖尿病科,佳木斯 154002

作者简介: 任公平(1981-),男,内蒙古呼和浩特人,主治医师,硕士,研究方向:中西医结合防治老年病。电话:0453-6602056,E-mail:gongpingren@163.com。

通信作者: 孙琳林(1978-),女,黑龙江牡丹江人,副主任医师,副教授,博士,研究方向:中西医结合防治老年病。电话:0453-6602056,E-mail:springlin999@163.com。

收稿日期: 2015-01-04 修回日期: 2015-05-23

摘要

目的观察辣椒素对人大细胞肺癌细胞NCI-H460增殖、迁移与侵袭能力的影响,探讨其抗非小细胞肺癌的可能机制。方法体外培养NCI-H460细胞,实验组以不同终浓度辣椒素进行处理,对照组加入等体积二甲亚砜,其余条件与实验组完全一致。采用平板克隆形成实验、划痕修复实验、Transwell小室细胞侵袭实验,观察辣椒素对NCI-H460细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并采用Western blot分析检测E-cadherin和N-cadherin、Vimentin、Snail的表达。结果 100,200,300 μmol·L^-1辣椒素下NCI-H460细胞克隆形成率分别为(91.17±24.38)%,(43.22±12.91)%和(15.71±4.26)%,对照组为(99.53±21.25)%;25,50,100 μmol·L^-1辣椒素对NCI-H460细胞迁移率分别为(85.83±17.43)%,(37.92±10.16)%和(21.08±6.39)%,对照组为(93.04±20.23)%;NCI-H460细胞侵袭穿膜细胞数分别为(99.0±18.2),(75.0±17.9)和(52.0±14.1),对照组为(107.0±20.4);中、高浓度辣椒素可显著抑制NCI-H460细胞增殖、迁移与侵袭能力( P<0.05),显著上调E-cadherin表达水平,并显著下调N-cadherin、Vimentin、snail表达水平( P<0.05)。结论辣椒素能明显抑制NCI-H460细胞增殖,降低迁移和侵袭能力,其机制可能与上调E-cadherin表达并与其下调N-cadherin、Vimentin、Snail表达有关。

关键词: 辣椒素; 增殖; 迁移; 侵袭; NCI-H460细胞

中图分类号:R585.5 文献标志码:A 文章编号:1004-0781(2016)02-0132-05 doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2016.02.006

Effects of Capsaicin on Human Large Cell Lung Carcinoma NCI-H460

Gongping REN¹, Hui NA², Zhengxin LYU³, Linlin SUN¹

1.Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Hongqi Hospital,Mudanjiang Medical College,Mudanjiang 157011,China

2.Department of Diabetes,Hospital of Traditional Chinese Medicine of Jiamusi City,Heilongjiang Province,Jiamusi 154002,China

Abstract

Objective To investigate effects of capsaicin on proliferation,migration and invasion of human large cell lung carcinoma NCI-H460 and discuss the possible mechanisms by which capsaicin inhibits non-small cell lung cancer.Methods NCI-H460 cells were cultured in vitro,the test group treated with capsaicin at various concentrations.The control group treated with the same volume of dimethyl sulfoxide, the other experimental methods the same as the test group.Colony formation assay,wound healing assay,and transwell chamber invasion assay were used to detect the effects of capsaicin on proliferation,migration and invasion of NCI-H460 cells.Western blotting was used to detect the protein expression of E-cadherin,N-cadherin,vimentin and snail.Results The rate of colony formation of 100,200,300 μmol·L^-1 of capsaicin were (91.17±24.38)%,(43.22±12.91)% and (15.71±4.26)%,respectively,the control group was (99.53±21.25)%.the rate of migration of NCI-H460 cells of 25,50,100 μmol·L^-1 of capsaicin were (85.83±17.43)%,(37.92±10.16)% and(21.08±6.39)%,respectively,the control group was (93.04±20.23)%.The number of invasion of NCI-H460 cells of 25,50,100 μmol·L^-1 of capsaicin were (99.0±18.2),(75.0±17.9)and(52.0±14.1),respectively,the control group was (107.0±20.4).The middle and high-dose capsaicincould inhibit proliferation,migration and invasion of NCI-H460 cells ( P<0.05),and E-cadherin expression level was significantly up-regulated and N-cadherin,Vimentin,Snail expression level was significantly down-regulated ( P<0.05).Conclusion Capsaicin can inhibit proliferation,migration and invasion of NCI-H460 cells,the mechanism may be related to up-regulation of E-cadherin and down-regulation of N-cadherin,Vimentin and Snail expression levels.

Keyword: Capsaicin; Proliferation; Migration; Invasion; NCI-H460 cells

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肺癌是我国发病率和病死率占首位的恶性肿瘤,其中80%患者为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其治疗效果尚不令人满意,尤其以NSCLC为甚^[1]。据预测,到2020年,中国将有550万例新发肺癌患者,病死例数将达400万例^[2]。但是即使是在手术切除的早期NSCLC患者中,也有2/3患者存在复发和转移的危险,侵袭和转移是患者死亡和治疗效果不理想的主要原因^[3,4],而 E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、snail被证实是与多种恶性肿瘤转移侵袭相关的蛋白。目前放射治疗(放疗)、化学治疗(化疗)等治疗肺癌的手段已经进入平台期,其分子机制尚不明了,因此探讨肺癌分子水平侵袭转移机制尤为必要。辣椒素(capsaicin)是香草酰胺类生物碱,又名辣椒碱,是辣椒属植物红辣椒的活性成分。近年来的研究显示其具有镇痛、降脂减肥等多种药理活性,在体外对多种肿瘤细胞具有杀伤或抑制作用。虽然辣椒素具有抗癌作用^[5],但是其与NSCLC的研究笔者鲜见报道。笔者在本研究观察辣椒素对人大肺癌细胞NCI-H460细胞增殖、迁移与侵袭能力及对E-cadherin和N-cadherin、Vimentin、Snail的影响,为明确辣椒素治疗肺癌提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

人大细胞肺癌NCI-H460细胞购自中科院上海细胞库;RPMI-1640培养液购自美国Gibco公司,批号:755295;辣椒素(含量>99%)和Hoechst33342均购自美国Sigma公司,批号分别为100081-201408,B2261;牛血清清蛋白(bovine serum albumin,BSA)购自PAA 公司,批号:715396;二甲亚砜(DMSO)购自美国Amresco公司,批号:3557A37;Transwell小室购自美国Corning公司,批号:31409028;基质胶Matrigel购自美国BD公司,批号:354234; E-cadherin、N-cadherin、vimentin鼠抗人单克隆抗体均购自美国ProMab公司,批号分别为:bs-1475R,bs-1419R,bs-1489R;snail兔抗人多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司,批号:A5316;HRP标记抗鼠IgG二抗及HRP标记抗兔IgG二抗购自上海碧云天生物技术有限公司,批号:BSE-0410G。

1.2 细胞培养

NCI-H460细胞保存在含有10% BSA的RPMI-1640营养培养液(含 L-谷氨酰胺,青霉素100 U·mL^-1和链霉素100 U·mL^-1),37 ℃、5% CO₂及饱和湿度下培养。当NCI-H460细胞达80%汇合度时,用0.05%胰蛋白酶/0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)消化。按照细胞密度2×10⁶个细胞/孔接种于超低吸附6孔板中,37 ℃、5% CO₂及饱和湿度下培养48 h。收集贴壁细胞经EDTA处理制备成单细胞悬液,然后用RPMI-1640培养液洗涤细胞。收集对数生长期细胞,备用。

1.3 药物

辣椒素溶解于DMSO,配成300 μmol·L^-1溶液,-20 ℃保存。临用时,以完全培养液将辣椒素稀释到所需浓度。

1.4 平板克隆形成实验

参考文献^[6]方法,取对数生长期NCI-H460细胞,将实验组细胞加入终浓度为100,200,300 μmol·L^-1辣椒素^[7],37 ℃、5%CO₂及饱和湿度下培养24 h。对照组加入等体积DMSO,其余条件与实验组完全一致。调整细胞密度至1×10⁴个·mL^-1,取细胞悬液200 μL接种于平皿中,加入培养液至10 mL,37 ℃、5%CO₂及饱和湿度下培养。10 d后终止培养,弃去培养液,磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次,95%乙醇固定15 min,PBS洗涤1次。结晶紫染色10 min,清水冲洗后晾干。每组接种3个平皿。肉眼计数可见的克隆数,计算克隆形成率。克隆形成率(%)=(克隆数/接种细胞数)×100%

1.5 划痕修复实验

取对数生长期NCI-H460细胞,按照细胞密度每孔5×10⁴个接种于6孔板中,待细胞单层生长铺满板底时,用移液枪头沿培养板底部划“一”字型划痕,加入终浓度为25,50,100 μmol·L^-1的辣椒素,37 ℃、5% CO₂及饱和湿度下培养24 h。对照组加入等体积DMSO,其余条件与实验组完全一致。倒置显微镜下检测细胞向致伤区迁移的相对距离并摄像,计算细胞迁移率。细胞迁移率(%)=(1-药物组细胞迁移面积/对照组细胞迁移面积)×100%。每组实验重复3次。

1.6 Transwell小室体外侵袭实验

参考文献^[8]方法,Transwell小室用前铺上0.5% Matrigel膜基质50 μL,37 ℃孵育过夜。取对数生长期NCI-H460细胞,加入终浓度为25,50,100 μmol·L^-1辣椒素,37 ℃、5% CO₂及饱和湿度下培养24 h。对照组加入等体积DMSO,其余条件与实验组完全一致。调整细胞密度5×10⁴个·mL^-1,分别取200 μL接种于Transwell小室内室,并在Transwell小室下室加入含有10% BSA的完全培养液。孵育24 h后,取出Transwell小室去除未穿膜细胞。甲醇固定15 min后,再以10 mg·mL^-1Hoechst33342染色30 min。OlympusIX51荧光显微镜计数穿过微孔膜的细胞数。每组细胞随机计数视野10个,取其平均值。实验重复3次。

1.7 Western blot分析蛋白表达

取对数生长期的NCI-H460细胞,加入终浓度为25,50,100 μmol·L^-1辣椒素,37 ℃、5% CO₂及饱和湿度下培养24 h。对照组加入等体积DMSO,其余条件与实验组完全一致。用细胞裂解液(20 mmol·L^-1 Tris-HCl,1.5% Triton X-100,150 mmol·L^-1 NaCl,10%甘油,1 mmol·L^-1 Na₄P₂O₇,50 mmol·L^-1 NaF,1 mmol·L^-1 PMSF)和蛋白酶抑制药(5 μmol·L^-1 AEBSF-HCl,5 μmol·L^-1 EDTA,10 mmol·L^-1 leupeptin,1.5 mmol·L^-1 E-64,pH值=7.4)裂解细胞后,收集裂解液,Bradford法测定蛋白质含量。取蛋白质20 μg加入2×上样缓冲液,95 ℃变性5 min。随后进行7.5%SDS-PAGE凝胶电泳。电泳后,电转至0.45 μm硝酸纤维素膜,用含5%脱脂奶粉PBST(25 mmol·L^-1,Tris pH值=7.5,150 mmol·L^-1 NaCl,0.1% 聚山梨酯20)封闭1 h,分别加入E-cadherin抗体、N-cadherin抗体、vimentin抗体、snail抗体(1:1 000稀释)4 ℃孵育过夜,PBST洗涤3次,每次5 min。加入HRP标记的二抗(1:2 000稀释)室温孵育2 h,PBST洗涤3次,每次5 min。按同样的方法与β-actin抗体孵育。电致化学发光(electrochemiluminescence,ECL)试剂显色,通过Bio-Rad凝胶成像进行目的条带的表达检测及分析。蛋白的相对表达强度=目标蛋白表达强度/β-actin蛋白表达强度。

1.8 统计学方法

采用SPSS17.0版软件进行数据分析。正态计量数据用均数±标准差( $\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}$ ±s)表示,正态资料组间比较采用 t检验,多样本均数采用单因素方差分析。以 P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 辣椒素对NCI-H460细胞的增殖抑制作用

平板克隆形成实验结果显示,辣椒素终浓度为200,300 μmol·L^-1时,克隆形成率分别为(43.22±12.91)%和(15.71±4.26)%,与对照组(99.53±21.25)%比较,差异有统计学意义( P<0.05),明显抑制NCI-H460细胞克隆形成能力,说明辣椒素对NCI-H460细胞的增殖有抑制作用,并呈浓度依赖性。辣椒素终浓度为100 μmol·L^-1时,NCI-H460细胞克隆形成率(91.17±24.38)%,与对照组比较,虽然降低,但是对NCI-H460细胞的增殖无明显毒性作用,差异无统计学意义( P>0.05)。因此,本研究后续实验均以辣椒素终浓度≤100 μmol·L^-1进行。

2.2 辣椒素对NCI-H460细胞体外迁移能力的影响

划痕修复实验结果显示,划痕24 h后,辣椒素终浓度为50,100 μmol·L^-1时,对NCI-H460细胞迁移具有明显抑制作用,并呈浓度依赖性,细胞迁移率分别为(37.92±10.16)%和(21.08±6.39)%,与对照组(93.04±20.23)%比较,差异有统计学意义( P<0.05)。辣椒素终浓度为25 μmol·L^-1时,NCI-H460细胞迁移率(85.83±17.43)%,与对照组比较,虽然降低,但差异无统计学意义( P>0.05)。结果见图1。

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	图1 不同浓度辣椒素对NCI-H460细胞体外迁移能力的影响(×100)A.对照组;B.25 μmol·L^-1辣椒素组;C.50 μmol·L^-1辣椒素组;D.100 μmol·L^-1辣椒素组Fig.1 Effects of different concentration of capsacin on in vitro migration of NCI-H460 cells(×100)A.control group;B.25 μmol·L^-1 capsacin group;C.50 μmol·L^-1 capsacin group;D.100 μmol·L^-1 capsacin group

2.3 辣椒素对NCI-H460细胞体外侵袭能力的影响

Transwell小室细胞体外侵袭实验结果显示,辣椒素终浓度为50,100 μmol·L^-1时,NCI-H460细胞侵袭穿膜细胞数均显著下降,并呈浓度依赖性,分别为(75.0±17.9)和(52.0±14.1),与对照组(107.0±20.4)比较,差异有统计学意义( P<0.05)。辣椒素终浓度为25 μmol·L^-1时,NCI-H460细胞侵袭穿膜细胞数(99.0±18.2),与对照组比较,虽然减少,但差异无统计学意义( P>0.05)。结果见图2。

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	图2 辣椒素对NCI-H460细胞体外侵袭能力的影响(×200)A.对照组;B.25 μmol·L^-1辣椒素组;C.50 μmol·L^-1辣椒素组;D.100 μmol·L^-1辣椒素组Fig.2 Effects of different concentration of capsacin on in vitro invasion of NCI-H460 cells(×200)A.control group;B.25 μmol·L^-1 capsacin group;C.50 μmol·L^-1 capsacin group;D.100 μmol·L^-1 capsacin group

2.4 Western blot分析结果

Western blot分析结果表明,辣椒素终浓度为50,100 μmol·L^-1时,显著升高E-cadherin表达水平,并呈浓度依赖性,与对照组比较,差异具有统计学意义( P<0.05)。辣椒素终浓度为50,100 μmol·L^-1时,显著降低N-cadherin、vimentin、snail表达水平,并呈浓度依赖性,与对照组比较,差异具有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)。辣椒素终浓度为25 μmol·L^-1时,E-cadherin和N-cadherin、vimentin、snail表达水平与对照组比较,差异无统计学意义( P>0.05)。结果见图3,表1。

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	图3 Western blot分析辣椒素对NCI-H460细胞蛋白表达A.对照组;B.25 μmol·L^-1辣椒素组;C.50 μmol·L^-1辣椒素组;D.100 μmol·L^-1辣椒素组Fig.3 Western blot analysis of the effect of capsacin on NCI-H460 cellsA.control group;B.25 μmol·L^-1 capsacin group;C.50 μmol·L^-1 capsacin group;D.100 μmol·L^-1 capsacin group

表1 4组NCI-H460细胞的E-cadherin、N-cadherin、vimentin、snail相对表达强度 Tab.1 Relative expression intensity of E-cadherin,N-cadherin,Vimentin,snail in four groups of NCI-H460 cells

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

组别	E-cadherin	N-cadherin
对照组	0.21±0.03	0.46±0.11
辣椒素
25 μmol·L^-1组	0.24±0.03	0.43±0.11
50 μmol·L^-1组	0.73±0.16^*1	0.26±0.03^*1
100 μmol·L^-1组	0.82±0.19^*2	0.15±0.02^*2
组别	vimentin	snail
对照组	0.93±0.24	0.95±0.26
辣椒素
25 μmol·L^-1组	0.90±0.21	0.91±0.23
50 μmol·L^-1组	0.82±0.22^*1	0.65±0.14^*1
100 μmol·L^-1组	0.79±0.17^*1	0.61±0.10^*2

与对照组比较, t=4.533,3.308,3.636,2.760,3.884,^*1 P<0.05, t=5.493,4.802,3.114,^*2 P<0.01

Compared with control group, t=4.533,3.308,3.636,2.760,3.884,^*1 P<0.05, t=5.493,4.802,3.114,^*2 P<0.01

表1 4组NCI-H460细胞的E-cadherin、N-cadherin、vimentin、snail相对表达强度 Tab.1 Relative expression intensity of E-cadherin,N-cadherin,Vimentin,snail in four groups of NCI-H460 cells

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s

3 讨论

辣椒素可通过多种途径在体内外发挥抗癌作用,如诱导人结肠癌HCT116细胞和胰腺癌BxPC-3细胞凋亡^[5,9],抑制小细胞肺癌细胞H69和H82增殖^[10]。另外还有报道称,辣椒素可下调血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)而抑制NSCLC血管生成^[11]。然而辣椒素对人大细胞肺癌NCI-H460细胞是否具有抑制作用目前尚不明了。因此,笔者以不同终浓度辣椒素作用于NCI-H460细胞,观察辣椒素对NCI-H460细胞体外增殖的影响。结果发现,辣椒素对NCI-H460细胞增殖有一定的抑制作用。此结果进一步说明辣椒素可作为抗NSCLC选择药物。

肺癌因其病死率高已经引起学者的广泛关注,侵袭和转移是导致癌症患者死亡的主要原因^[12,13]。研究证实,上皮-间质转变(epithelial-to-mesenchymal transitions,EMT)可改变细胞的行为,在大多数情况下,使细胞转移能力增强,是促进癌症细胞原位侵袭和远处转移的一个关键因素^[14]。因此,本研究通过划痕修复实验和Transwell小室细胞体外侵袭实验,观察辣椒素对NCI-H460细胞迁移与侵袭能力的影响。结果发现NCI-H460细胞迁移与侵袭能力随着辣椒素浓度增加而逐渐降低,提示辣椒素对NCI-H460细胞抑制作用可能与抑制其迁移与侵袭能力有关。

EMT的主要特征包括细胞形态从上皮型转化为间质型,上皮细胞标志分子E-cadherin下调和间质细胞标志分子N-cadherin,vimentin的上调。E-cadherin和N-cadherin,vimentin是EMT的重要标志物。E-cadherin是一种依赖Ca²⁺的细胞间跨膜黏连糖蛋白分子,主要存在于上皮组织中,参与细胞间的连接,具有抑制癌症侵袭转移的作用。E-cadherin的表达下调或抑制和功能丧失都可以启动EMT,癌症细胞经过这种细胞表型的转化获得更高的侵袭性^[15,16]。当E-cadherin的表达下降,N-cadherin,vimentin表达增高时,肿瘤细胞骨架系统排列发生变化,细胞生物学性状改变,黏附功能下降,易于脱离原发灶,向周围组织侵袭或转移^[17]。本研究证实,NCI-H460细胞中E-cadherin低表达,而N-cadherin和vimentin高表达,提示NCI-H460细胞迁移和侵袭与E-cadherin、N-cadherin、vimentin密切相关。在对E-cadherin表达调控的研究中发现,snail是EMT中的主要调节蛋白,是含有锌指结构的DNA结合蛋白。snail能够通过转录调节抑制E-cadherin基因的表达,引起上皮细胞向间质细胞表型的转变,诱导EMT的发生^[18]。本研究结果亦证实,NCI-H460细胞中snail高表达,提示NCI-H460细胞迁移和侵袭与snail也密切相关。鉴于E-cadherin、N-cadherin、vimentin和snail与NCI-H460细胞迁移和侵袭的密切关系,本研究Western blot分析结果进一步显示,辣椒素能够上调E-cadherin表达而下调N-cadherin、vimentin、snail表达。故此可以推测,辣椒素上调NCI-H460细胞E-cadherin表达,下调N-cadherin、vimentin、snail表达可抑制NSCLC转移和侵袭能力。

综上所述,辣椒素可抑制NCI-H460细胞增殖,迁移和侵袭能力,具体机制可能与其上调NCI-H460细胞E-cadherin表达,下调N-cadherin、vimentin、snail表达有关。至于辣椒素是否通过其他机制抑制NCI-H460细胞增殖,迁移和侵袭能力,例如Akt信号通路,本研究将进行进一步研究。

(志谢:本研究在数据统计分析过程中得到黑龙江幼儿师范高等专科学校那辉老师的热情指导和帮助,特此表示感谢!)

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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[14]	KAFKA A, TOMAS D, BEROS V, et al. Brain metastases from lung cancer show increased expression of DVL1, DVL3 and beta-catenin and down-regulation of E-cadherin[J]. Int J Mol Sci, 2014, 15(6): 10635-10651. [本文引用:1]
[15]	张铭, 张一鸣, 董一善, 等. 宫颈癌组织中Slug基因及其蛋白质的表达与意义[J]. 临床检验杂志, 2011, 29(8): 618-621. [本文引用:1]
[16]	钱玉珺, 成向明, 王斌, 等. LY294002对多柔比星诱导的人乳腺癌上皮-间质转化作用的影响[J]. 中国医学科学院学报, 2012, 34(4): 319-323. [本文引用:1]
[17]	谢建中, 魏嘉, 梁佳, 等. 肝细胞癌组织中E-cadherin、N-cadherin、vimenn的表达变化及意义[J]. 山东医药, 2010, 50(22): 90-91. [本文引用:1]
[18]	况里杉, 周向东. 人小细胞肺癌细胞H446 Snail基因表达及其在顺铂耐药中的作用[J]. 第三军医大学学报, 2013, 35(12): 1197-1199. [本文引用:1]

2014

0.0

徐慧琳, 戈伟, 曹德东, 等. 重组人血管内皮抑素联合同步放化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效和安全性 Meta 分析[J]. 医药导报, 2014, 33(9): 1237-1242.

目的：系统评价重组人血管内皮抑素联合同步放化疗与同步放化疗比较治疗晚期非小细胞肺癌( NSCLC)的有效性和安全性。方法计算机系统检索Cochrane图书馆、PubMed、中国生物医学文献数据库、中国学术期刊全文数据库、 EMbase、维普数据库、万方数据库所收录的相关研究,检索时间截止至2013年8月。研究对象为NSCLC患者,治疗组采用重组人血管内皮抑素联合同步放化疗,对照组仅用同步放化疗,比较两组疗效及安全性。使用Cochrane 手册5.1.0版的质量评价标准对纳入研究进行质量评价,使用RevMan 5.1.0版软件进行数据分析。结果最终纳入5项研究,共217例患者。 Meta分析结果表明：与对照组比较,治疗组有效率提高[OR=2.62,95%CI(1.41,4.86),P=0.002]。在临床获益率 [OR=2.08,95%CI(0.92,4.73),P=0.08]、1年生存率 [OR=1.18,95%CI(0.53,2.66),P=0.68]、生活质量改善 [OR=1.57,95%CI(0.40,6.07),P=0.52]、白细胞减少 [OR=1.25,95%CI(0.72,2.17),P=0.43]、放射性食管炎 [OR=1.16,95%CI(0.42,3.21),P=0.77]、放射性肺炎 [OR=2.47,95%CI(0.34,17.68),P=0.37]等方面,两组均差异无统计学意义。结论与仅用同步放化疗比较,重组人血管内皮抑素联合同步放化疗治疗晚期NSCLC可提高疗效,两组生活质量改善情况及毒副反应发生率相当。受纳入研究质量限制和可能存在的发表偏倚影响,上述结论尚需更多高质量的随机对照试验加以验证。

... 肺癌是我国发病率和病死率占首位的恶性肿瘤,其中80%患者为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其治疗效果尚不令人满意,尤其以NSCLC为甚 ^{[ 1]} ...

2014

0.0

王宏羽, 张湘茹. 脂质体紫杉醇联合卡铂与紫杉醇联合卡铂一线治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和安全性的比较[J]. 中国医学科学院学报, 2014, 36(3): 305-307.

Objective To compare the efficacy and safety between liposome-paclitaxel plus carboplatin(LPC)and paclitaxel plus carboplatin(PC)as first-line treatment for advanced non-small cell lung cancer(NSCLC). Methods Totally 54 chemotherapy-nave NSCLC patients were equally and randomly assigned into LPC group and PC group. Liposome-paclitaxel was injected on D1 at a dosage of 175 mg/m²;the same dose and administration with paclitaxel injection in the PC group for a maximum of 2 cycles. The efficacy and adverse reactions after 2 cycles of chemotherapy were compared between these two groups. Results The overall response rate(CR+PR)was 44.4% in the LPC group and 33.3% in the PC group after 2 cycles of chemotherapy respectively(P=0.577). In the LPC group and PC group,the incidences of myelodepression was 81.5% and 63.0%,respectively(P=0.080),gastrointestinal toxicity was 96.3％ and 77.8％ respectively(P=0.100),and allergic reactions was 0 and 11.1％,respectively(P=0.000).The median time to progression was 6 months and 5 months,respectively(P=0.420). Conclusion LPC group has the same efficacy with PC group and less adverse reactions than PC group.

目的比较脂质体紫杉醇联合卡铂与紫杉醇联合卡铂一线治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和安全性。方法 54例初治的晚期NSCLC患者随机分为两组,每组27例,分别给予脂质体紫杉醇(175 mg/m²)+卡铂 AUC5方案(试验组)和紫杉醇注射液(175 mg/m²)+卡铂AUC5方案(对照组)化疗,两组化疗周期均为21 d,均不少于2周期。化疗2周期后,比较两组患者的疗效和不良反应。结果试验组和对照组在治疗总有效率(显效+有效)(44.4%比33.3%,P=0.577)、骨髓抑制发生率(81.5% 比63.0%,P=0.080)、胃肠道反应发生率(96.3%比77.8%,P=0.100)和肿瘤中位进展时间(6个月比5个月,P=0.420)方面差异均无统计学意义。试验组的过敏反应发生率为0,明显低于对照组的11.1%(P=0.000)。结论脂质体紫杉醇联合卡铂与紫杉醇联合卡铂方案一线治疗晚期NSCLC的疗效相当,但过敏反应发生率明显低于紫杉醇联合卡铂方案。

... 据预测,到2020年,中国将有550万例新发肺癌患者,病死例数将达400万例 ^{[ 2]} ...

2014

0.0

鲁芬, 肖贵华, 薛军, 等. 肺癌细胞中miR-96对其侵袭和迁移的影响[J]. 肿瘤防治研究, 2014, 41(6): 588-592.

Abstract：Objective To investigate the expression of miR-96 in lung cancer tissues and demonstrate the
regulative effects of miR-96 ASO on the invasion and migration of lung cancer cells in vitro. Methods The
expression of miR-96 in 116 cases of lung cancer tissues and their adjacent tissues were detected by fl uorogenic
quantitative PCR method. The effects of miR-96 ASO on the invasion and migration ability of lung cancer
cells were measured by transwell assay and wound healing assay. Invasion-related protein expression was
analyzed by Western blot. Results In 116 cases of lung cancer, the expression of miR-96 in 63.80%(74/116)
of lung cancer tissues was significantly higher than that in adjacent tissues(P<0.05). miR-96 expression in
lung cancer cells in miR-96 ASO transfection group was significantly lower than that in MOCK and NC
group(P<0.05). Transwell and wound healing assay results showed that the invasion and migration ability was
decreased greatly after transfected with miR-96 ASO, furthermore, down -regulation of miR-96 resulted in
obvious inactivation of MMP2 and MMP9(P<0.05). Conclusion miR-96 was up-regulated in human lung
cancerous tissue. Reducing the expression of miR-96 can effectively inhibit the invasion and migration of lung
cancer cells. miR-96 may become a new target for regulating the invasion and migration ability in lung cancer.

目的分析miR-96在肺癌组织中的表达情况；体外研究miR-96反义寡核苷酸（ASO??对肺
癌细胞侵袭和迁移的影响。方法运用荧光定量PCR法检测116例肺癌组织及相应癌旁组织中miR-96
的表达；通过miR-96 ASO降低肺癌细胞中miR-96的表达，采用Transwell实验和划痕实验观察miR-96
ASO对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响，Western blot法检测侵袭相关蛋白的表达变化。结果在116
例肺癌病例中，63.80%（74/116）的肺癌组织miR-96表达明显高于相应癌旁组织（P<0.05）；与空
白对照组和转染随机ASO组相比，miR-96 ASO可以显著降低miR-96的表达（P<0.05）；Transwell实
验和划痕实验结果显示转染miR-96 ASO后，肺癌细胞的侵袭迁移能力明显下降，同时相关侵袭蛋白
MMP2和MMP9表达下降（P<0.05）。结论 miR-96在肺癌组织中表达上调, 降低miR-96的表达可有
效抑制肺癌细胞的侵袭和迁移。miR-96有望成为肺癌侵袭转移调控的新靶点。

... 但是即使是在手术切除的早期NSCLC患者中,也有2/3患者存在复发和转移的危险,侵袭和转移是患者死亡和治疗效果不理想的主要原因 ^{[ 3, 4]},而 E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、snail被证实是与多种恶性肿瘤转移侵袭相关的蛋白 ...

2011

0.0

洪伟俊, 宁允叶, 胥武剑, 等. 组蛋白去乙酰化酶5在非小细胞肺癌迁移中的作用研究[J]. 中国癌症杂志, 2011, 21(4): 277-282.

背景与目的:组蛋白乙酰化状态受组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)和组蛋白乙酰化酶(histone acetyltransferases,HATs)调节,进而调控基因转录.HDACs和HATs失衡是肿瘤发生发展的重要分子机制.组蛋白去乙酰化酶5(histone deacetylase 5,HDAC5)在多数肿瘤中表达降低,然而其在非小细胞肺癌细胞迁移中的作用尚未见报道.本研究旨在检测HDAC5基因在非小细胞肺癌中的差异性表达,研究HDAC5基因过表达对肺腺痛NCI-H1299细胞迁移的影响.方法:采用real time RT-PCR、Western blot检测28例非小细胞肺癌手术标本中HDAC5 mRNA和蛋白表达;将野生型HDAC5(HDAC5wt)基因转染到NCI-H1299细胞中,将细胞分为转染HDAC5wt基因的实验组(HDAC5wt)、未转染任何质粒的正常对照组(control)、转染空质粒的阴性对照组(vector).通过MTT方法比较3组细胞的生长情况;利用划痕、Transwell方法检测HDAC5基因过表达对细胞迁移能力的影响.结果:对照组相比,约71.4%(20/28)非小细胞肺癌患者手术标本中HDAC5 mRNA和蛋白表达明显降低;MTT结果显示在第2～5天,实验组D490值显著性低于正常对照组及阴性对照组,而在24 h时,3组细胞增殖差异无统计学意义;Transwell迁移实验结果显示实验组跨膜细胞的数目为158.3±19.4,较正常对照组(247.0±12.1)及阴性对照组(236.0±14.9)均显著减少(P<0.05);划痕实验结果显示HDAC5基因过表达后,H1299细胞划痕愈合程度明显降低.结论:HDAC5基因在非小细胞肺癌中低表达;体外过表达HDAC5基因可抑制NCI-H1299细胞迁移.

2014

0.0

... 虽然辣椒素具有抗癌作用 ^{[ 5]},但是其与NSCLC的研究笔者鲜见报道 ...

... 3 讨论辣椒素可通过多种途径在体内外发挥抗癌作用,如诱导人结肠癌HCT116细胞和胰腺癌BxPC-3细胞凋亡 ^{[ 5, 9]},抑制小细胞肺癌细胞H69和H82增殖 ^{[ 10]} ...

2014

0.0

... 4 平板克隆形成实验参考文献 ^{[ 6]}方法,取对数生长期NCI-H460细胞,将实验组细胞加入终浓度为100,200,300 μmol·L ^-1辣椒素 ^{[ 7]},37 ℃、5%CO ₂及饱和湿度下培养24 h ...

2007

0.0

廖新明, 李兴红, 陈志芬. 辣椒素对人结肠癌SW-480生长及Bc-l2/Bax表达的影响[J]. 实用医院临床杂志, 2007, 4(4): 39-41.

目的探讨辣椒素对人结肠癌SW-480细胞的作用及机制.方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测SW-480细胞生长情况;透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析细胞凋亡;蛋白印迹法(Western blot)检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白表达.结果辣椒素对SW-480细胞有明显生长抑制及诱导凋亡作用,并呈剂量、时间依赖性;光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳显示出特征性凋亡梯状带,随着作用时间延长,细胞内Bax蛋白表达逐渐增高、Bcl-2蛋白表达逐渐降低.结论辣椒素能明显抑制人结肠癌SW-480细胞生长,诱导细胞凋亡可能是其主要作用机制,调节Bcl-2、Bax蛋白表达是其诱导细胞凋亡的作用机制之一.

2013

0.0

史立宏, 陶蓉, 王云甲, 等. Gab2对人肺癌细胞A549侵袭能力影响及其机制的探讨[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2013, 20(16): 1207-1212.

目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Grb2binding protein-2,Gab2)对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响及其机制。方法:将质粒pGCsilencerU6/GFP/Neo- RNAi-Gab2#1、pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#2和对照空载质粒转染到A549细胞中,建立Gab2低表达的siGab2/A549#1、siGab2/A549#2细胞和对照SCR/A549细胞。应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测小分子干扰 RNA(siRNA)干扰Gab2表达后的基因和蛋白表达水平。趋化运动实验检测细胞的迁移能力;体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力;蛋白质印迹法检测 siRNA干扰Gab2表达后,A549细胞在胰岛素样生长因子-1(insulinlike growth factor-1,IGF-1)刺激下基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metal-loproteinase-9,MMP-9)的表达及磷酸化Akt(pAkt)、磷酸化人雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamy-cin,pmTOR)的活化情况。结果:siRNA干扰Gab2表达后,RT-PCR测定A549细胞Gab2mRNA相对表达量为 1.340±0.009,Scr/A549细胞为1.201±0.074,siGab2#1/A549细胞为0.315±0.008,siGab2#2 /A549细胞为0.289±0.007。蛋白印迹法检测A549细胞Gab2蛋白表达量为0.205±0.003,Scr/A549细胞为 0.241±0.004,siGab2#1/A549细胞为0.128±0.002,siGab2#2/A549细胞为0.066±0.001。 siGab2#2/A549细胞与A549细胞比较Gab2基因表达显著降低,t=168.032,P0.001;Gab2蛋白表达也显著降低,t=64.352,P0.001。siGab2#2/A549细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于SCR/A549细胞,t值分别为5.101和 10.812,P值分别为0.029和0.002。在IGF-1刺激下,siGab2/A549细胞的MMP-2、MMP-9蛋白的表达量不再有明显变化,t值分别为-2.051和-2.652,P值分别为0.054和0.064。siGab2/A549细胞中pAkt、pmTOR的活化也显著抑制。结论:Gab2可能通过调节Akt/mTOR信号通路,促进A549细胞的侵袭能力。

... 6 Transwell小室体外侵袭实验参考文献 ^{[ 8]}方法,Transwell小室用前铺上0 ...

2011

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2010

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2014

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... 另外还有报道称,辣椒素可下调血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)而抑制NSCLC血管生成 ^{[ 11]} ...

2015

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... 肺癌因其病死率高已经引起学者的广泛关注,侵袭和转移是导致癌症患者死亡的主要原因 ^{[ 12, 13]} ...

2014

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... 肺癌因其病死率高已经引起学者的广泛关注,侵袭和转移是导致癌症患者死亡的主要原因 ^{[ 12, 13]} ...

2014

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... 研究证实,上皮-间质转变(epithelial-to-mesenchymal transitions,EMT)可改变细胞的行为,在大多数情况下,使细胞转移能力增强,是促进癌症细胞原位侵袭和远处转移的一个关键因素 ^{[ 14]} ...

2011

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张铭, 张一鸣, 董一善, 等. 宫颈癌组织中Slug基因及其蛋白质的表达与意义[J]. 临床检验杂志, 2011, 29(8): 618-621.

... E-cadherin的表达下调或抑制和功能丧失都可以启动EMT,癌症细胞经过这种细胞表型的转化获得更高的侵袭性 ^{[ 15, 16]} ...

2012

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钱玉珺, 成向明, 王斌, 等. LY294002对多柔比星诱导的人乳腺癌上皮-间质转化作用的影响[J]. 中国医学科学院学报, 2012, 34(4): 319-323.

Objective To study the effect of LY294002 on the adriamycin- induced epithelial-mesenchymal transition in human breast carcinoma cells. Methods Human breast carcinoma cells MCF-7 was cultured in vitro and then exposed to adriamycin with or without LY294002. The protein expression levels of Akt, phosphorylated-Akt (p-Akt), Snail, and E-cadherin was detected by Western blot analysis. The mRNA expressions of Snail and E-cadherin were determined by RT-PCR. Results Adriamycin significantly increased the protein expression of Snail and depressed the protein expression of E-cadherin (P<0.05). The pre-treatment with LY294002 significantly reversed the changes of activities and levels of the above proteins (P<0.05). Conclusion LY294002 could reverse the adriamycin-induced epithelial-mesenchymal transition in human breast carcinoma cells by regulating the expressions of Snail and E-cadherin through suppressing PI3K/Akt signaling pathway.

目的研究LY294002对阿霉素（ADM）诱导的人乳腺癌细胞上皮-间质转化作用的影响。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF-7，以ADM与或不与PI3K特异抑制剂LY294002共同处理，采用Western blot法检测Akt、p-Akt、Snail和E-cadherin蛋白水平的变化，RT-PCR检测Snail与E-cadherin mRNA的表达。结果 ADM可通过磷酸化上调Akt活性，增加Snail蛋白水平及降低E-cadherin的表达（P

... E-cadherin的表达下调或抑制和功能丧失都可以启动EMT,癌症细胞经过这种细胞表型的转化获得更高的侵袭性 ^{[ 15, 16]} ...

2010

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... 当E-cadherin的表达下降,N-cadherin,vimentin表达增高时,肿瘤细胞骨架系统排列发生变化,细胞生物学性状改变,黏附功能下降,易于脱离原发灶,向周围组织侵袭或转移 ^{[ 17]} ...

2013

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况里杉, 周向东. 人小细胞肺癌细胞H446 Snail基因表达及其在顺铂耐药中的作用[J]. 第三军医大学学报, 2013, 35(12): 1197-1199.

目的观察锌指转录因子 snail在耐顺铂(cisplatin,CDDP)的人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)H446/CDDP细胞中的表达情况,探讨snail表达在人SCLC顺铂耐药中的作用。方法培养H446细胞系和H446 /CDDP细胞系,采用MTT法检测H446/CDDP的耐药指数;分别提取人SCLC顺铂耐药细胞H446/CDDP及其亲代细胞H446的mRNA及总蛋白,应用sybgreen实时荧光RT-PCR、Western blot方法检测snail mRNA及蛋白表达水平。结果 H446/CDDP细胞snail蛋白及mRNA表达水平较H446细胞显著性升高(P0.05)。结论 SCLC的顺铂耐药性可能与snail表达水平增高有关。

... snail能够通过转录调节抑制E-cadherin基因的表达,引起上皮细胞向间质细胞表型的转变,诱导EMT的发生 ^{[ 18]} ...