Shailong NIU, Xingnai ZHANG, Zhilin WU, et al. .Hepatoprotective Effect of Total Flavones of Artemisia capillaris Thunb. on Acute Hepatic Injury in Rats [J]. HERALD OF MEDICINE,2016,35(3): 246-248
作者简介: 牛筛龙(1964-),男,江苏扬州人,副主任药师,学士,研究方向:医院药学。E-mail:nsl77982@sina.com。
目的 观察茵陈总黄酮预先给药1周对急性肝损伤大鼠的保护作用。方法 将大鼠分为空白对照组、模型对照组、茵栀黄口服液组和茵陈总黄酮小、中、大剂量组,均给药7 d。实验第6天,除空白对照组外,其他组大鼠腹腔注射 D-半乳糖胺盐酸盐500 mg·kg-1。48 h后采血测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,检查肝脏病理特征。结果 与模型对照组ALT[(391.9±181.3) U·L-1]和AST[(403.9±133.8) U·L-1)]比较,茵陈总黄酮大剂量组ALT和AST分别为[(189.2±112.9) U·L-1]和[(231.7±149.9) U·L-1],均显著降低。模型对照组肝细胞多发性碎片状坏死和脂肪变性分别为20和19只,而茵陈总黄酮大剂量组分别为1只和2只。与模型对照组比较,茵陈总黄酮各剂量组肝细胞出现多发性碎片状坏死、脂肪变性、炎细胞浸润和嗜酸性变性情况均不同程度减轻。结论 茵陈总黄酮对急性肝损伤大鼠具有保护作用。
Objective To investigate the protective effect of total flavones of Artemisia capillaris Thunb.on acute hepatic injury in rats.Methods Rats were randomly divided into blank control group,model control group, Yinzhihuang group,and groups of total flavones of Artemisia capillaris Thunb.(low,medium and high dose) in terms of 7-day different treatments.All rats except those in the blank control group were administrated with D-galactosamine hydrochloride (500 mg·g-1,ip) once at the sixth day.Then,concentrations of ALT and AST were detected 48 h later,and the liver samples were collected from each group for pathological examination.Results The serum ALT and AST in high-dose group of total flavones of Artemisia capillaris Thunb.was [(189.2±112.9) and (231.7±149.9) U·L-1],respectively,significantly lower than those in model control group ALT [(391.9±181.3) U·L-1] and AST [(403.9±133.8) U·L-1].Fragmented necrosis,fatty degeneration,inflammatory cells infiltration and acidophilic degeneration of hepatic cells were improved to varying degrees in groups of total flavones of Artemisia capillaris Thunb.compared with model control group.Fragmented necrosis of liver cells and steatosis occurred in 20 and 19 rats,respectively,in the model control group,while those appeared in 1 and 2 rats,respectively,in high-dose group of total flavones of Artemisia capillaris Thunb..Condusion Total flavones of Artemisia capillaris Thunb.are effective in protecting D-galactosamine hydrochloride-induced acute hepatic injury in rats.
中图分类号 R286;R965 文献标识码 A 文章编号 1004-0781(2016)03-0246-03
药物性肝损伤、病毒性肝炎及肝硬化等已成为危害人类健康的主要疾病之一,临床尚缺乏有效的抗肝损伤药物,而中药在肝脏保护方面有着广泛的应用前景。茵陈,又叫茵陈蒿( Artemisia capillaris Thumb.),系菊科蒿属多年生草本植物,为茵陈蒿的干燥地上部分,最早记载于《神农本草经》,分布于全国各地,资源丰富[1]。茵陈具有清湿热、利胆退黄的功效,临床广泛用于治疗肝炎、胆囊炎等症。茵陈中含有多种化学成分,包括香豆素、黄酮、苯氧基色原酮[2]。文献[3]报道茵陈所含黄酮类成分具有很强的保肝、利胆活性,但茵陈总黄酮肝保护相关的药效学研究笔者较少见到。笔者在本研究中以 D-半乳糖胺盐酸盐致大鼠损伤为模型,观察茵陈总黄酮的保肝作用,以期为茵陈总黄酮的进一步开发及肝损伤的治疗提供理论依据。
SD大鼠,清洁级,雄性,体质量200~250 g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司,生产许可证号:SCXK(沪)2013-0006,合格证号:0120853,饲养在第二军医大学实验动物中心动物房。室温:(22±2) ℃,相对湿度:40%~80%,保持通风,光照时间12 h,每笼饲养5只。饲料为标准大鼠颗粒饲料,经高压蒸汽灭菌并烘干;饮用水为纯净水,经高压蒸汽灭菌。
0.9%氯化钠溶液(山东齐都药业有限公司,批号:1B13041204)。茵陈总黄酮(棕褐色粉末,由第二军医大学天然药化课题组按拟定工艺自制,含量:92.6%,批号:20130405,密封避光置4 ℃保存)。茵栀黄口服液(规格:10 mL,北京双鹤高科天然药物有限责任公司,批号:272382)。 D-半乳糖胺盐酸盐( D-galactosamine hydrochloride,购自Sigma 公司,批号:20120828),实验前取15 g,0.9%氯化钠溶液60 mL溶解,1 mol·L-1氢氧化钠溶液调节pH值至7.0,加0.9%氯化钠溶液至150 mL,终浓度2%,以试剂瓶盛装后置4 ℃保存备用。
采用随机分组法(将大鼠编号,对每只大鼠在随机数字表上取随机数字,再按随机数字从小到大排序,按计划分组,即1~20号分到模型对照组,21~40号分到茵陈总黄酮小剂量组,41~60号分到茵陈总黄酮中剂量组,61~80号分到茵陈总黄酮大剂量组,81~100号分到茵栀黄口服液组,101~112号分到空白对照组),将大鼠分为6组,除空白对照组12只外,其余各组均20只。取茵陈总黄酮20 g,0.9%氯化钠溶液溶解,配制成0.2 g·mL-1溶液,灌胃前将上述溶液分别稀释成不同浓度,使各组灌胃体积均为2 mL。①空白对照组灌胃0.9%氯化钠溶液,10 mL·kg-1,qd,连续7 d,给药第6天腹腔注射0.9%氯化钠溶液500 mg·kg-1。②模型对照组灌胃0.9%氯化钠溶液,10 mL·kg-1,qd,连续7 d,给药第6天腹腔注射 D-半乳糖胺盐酸盐500 mg·kg-1。③小剂量组灌胃茵陈总黄酮167 mg·kg-1,qd,连续给药7 d,给药第6天腹腔注射 D-半乳糖胺盐酸盐500 mg·kg-1; ④中剂量组灌胃茵陈总黄酮 550 mg·kg-1,qd,连续给药7 d,给药第6天腹腔注射 D-半乳糖胺盐酸盐500 mg·kg-1;⑤大剂量组灌胃茵陈总黄酮1 100 mg·kg-1,qd,连续给药7 d,给药第6天腹腔注射 D-半乳糖胺盐酸盐500 mg·kg-1。⑥茵栀黄口服液组灌胃茵栀黄口服液 5 mL·kg-1,qd,连续给药7 d,给药第6天腹腔注射 D-半乳糖胺盐酸盐500 mg·kg-1。
腹腔注射 D-半乳糖胺盐酸盐后48 h后摘眼球取血,以全自动生化仪测定天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,若模型对照组AST和ALT活性均显著高于空白对照组( P<0.05),则造模成功[4,5]。,大鼠禁食过夜,自由饮水。称大鼠体质量,摘眼球采全血,处死,剖腹取肝脏,剪取肝左叶一小块肝组织,置10%甲醛溶液固定,病理学检查。实验结束后将全血以3 000 r·min-1离心10 min( r=13.5 cm),分离得血清,编号,待测生化指标。 血清标本由第二军医大学新药评价中心用全自动生化分析仪(日本日立公司,型号7080型)测定ALT、AST活性。肝组织病理学检查由上海东方肝胆外科医院病理科完成,采用石蜡包埋切片、苏木精-伊红(HE)染色,光镜检查,组织学观察指标包括肝细胞多发性碎片状坏死、脂肪变性、嗜酸性变性以及炎细胞浸润等,并根据病变程度,分别以0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示。
采用SPSS13.0版统计软件,大鼠体质量、ALT及AST均以均数±标准差(
与空白对照组比较, D-半乳糖胺盐酸盐处理后,各组大鼠血清ALT水平均明显升高。模型对照组血清ALT较空白对照组显著升高,茵陈总黄酮各剂量组血清ALT较模型对照组明显降低,均差异有统计学意义,并呈剂量依赖性(表1)。茵陈总黄酮小剂量组血清ALT与茵栀黄口服液组相当,茵陈总黄酮中、大剂量组血清ALT均低于茵栀黄口服液组,结果见表1。
 | 表1 6组大鼠ALT与AST测定结果 Tab.1 Determination results of ALT and AST in six groups of rats U·L-1, |
与空白对照组比较, D-半乳糖胺盐酸盐处理后各组血清AST均上升,其中模型对照组显著增加( P<0.01)。茵陈总黄酮各剂量组及茵栀黄口服液组血清AST活性较空白对照组略有升高,差异无统计学意义。茵陈总黄酮小、中、大剂量组血清AST活性均较模型对照组降低,差异有统计学意义,并呈剂量依赖性(表1)。
空白对照组肝脏组织结构正常,未见肝细胞坏死、变性及炎细胞浸润等病理改变。与空白对照组比较,模型对照组肝细胞坏死、变性及炎细胞浸润例数均显著增加。茵陈总黄酮小、中、大剂量组肝细胞损伤均不同程度改善,其中大剂量组肝脏组织结构改善最明显,20只大鼠肝脏样本中19只未出现多发性碎片状坏死,18例未出现肝细胞脂肪变性,19只未出现嗜酸性变性,20只未出现炎细胞浸润,肝组织预保护效果优于茵栀黄口服液组,结果见表2。
| 表2 6组大鼠病理组织学检查结果 Tab.2 Pathological results of six groups of rats 只 |
本研究选用的 D-半乳糖胺盐酸盐诱导大鼠急性肝损伤动物模型由KEPPLER于1968年首次报道。 D-半乳糖胺盐酸盐通过竞争二磷酸尿苷半乳糖使磷酸尿苷耗竭,可引起严重肝细胞损伤,并且该模型的肝组织病理学特征与人类病毒性肝炎极为类似[6]。关于 D-半乳糖胺盐酸盐的用量,不同文献有一定差异,其剂量范围为300~800 mg·kg-1[5,7,8],本实验选用500 mg·kg-1。肝细胞受损后,会释放ALT、AST入血,血清ALT、AST水平是反映肝细胞损伤与否的直接指标[9,10]。本实验模型组ALT和AST显著升高,表明大鼠急性肝损伤造模成功。在给予 D-半乳糖胺盐酸盐12 h后即出现明显升高,48 h达高峰,72~96 h后开始
下降,逐渐恢复正常。因此,本实验选择在 D-半乳糖胺盐酸盐处理后的48 h采集动物血清标本,此时血清ALT和AST正处在高峰期。
茵陈总黄酮各组血清转氨酶水平降低,随给药剂量增加,血清转氨酶活性降低幅度增大。与茵栀黄口服液组比较,茵陈总黄酮中、大剂量组血清ALT和AST水平更低,表明茵陈总黄酮降低血清转氨酶效果优于茵栀黄口服液。病理学结果显示,空白对照组肝脏组织结构基本正常,模型对照组肝脏损伤严重,可见肝细胞变性、坏死、脂肪变性及炎细胞浸润,而茵陈总黄酮各剂量组肝脏损伤程度均不同程度减轻。本实验结果表明,预给予茵陈总黄酮对于急性肝损伤大鼠具有显著保护作用,提示茵陈总黄酮可能具有一定应用前景。
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