.[J]. HERALD OF MEDICINE,2016,35(3): 305-307
作者简介: 金鹏飞(1978-),男,浙江衢州人,副主任药师,硕士生导师,博士,研究方向:药物分析。电话:010-85133621,E-mail:j790101@163.com。
目的 应用高效液相色谱(HPLC)技术,建立同时测定复方丁卡因搽剂中盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠含量的方法。方法 采用Alltima C18 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-50 mmol·L-1 磷酸二氢铵溶液(磷酸调pH值至3.0)(35:65)为流动相,流速0.5 mL·min-1,检测波长300 nm。结果 盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠的线性相关系数( r)均>0.999 3;精密度和稳定性良好,RSD均<2.0%;回收率良好,盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠的平均回收率( n=9)分别为100.4%和100.6%。结论 该方法准确、简单、快速,可用于同时测定复方丁卡因搽剂中盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠含量。
复方丁卡因搽剂为我院特色制剂,处方由盐酸丁卡因(0.5%)、磺胺醋酰钠(1%)、氢化可的松(0.05%)、丙酸睾酮(0.05%)等主要成分和西黄蓍胶、鱼肝油、乙醇、水等非活性成分组成,临床主要用于放射治疗后皮肤反应和表皮破损等,在我院已有几十年的应用历史,疗效确切。北京市食品药品监督管理局现行制剂规程(京卫药制字第[049]第F-683)只对磺胺醋酰钠、氢化可的松和丙酸睾酮进行鉴别,没有含量测定项。为了更好地控制复方丁卡因搽剂的质量,笔者在原有质量控制方法的基础上,应用高效液相色谱法同时测定复方丁卡因搽剂中两种主要活性成分盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠的含量。
Wasters 2695 液相色谱分离系统(包括四元梯度泵、自动进样器和柱温箱);Waters 2696 二极管阵列检测器;Empower®色谱工作站;Mettler XP-205电子天平(感量:0.01 mg);Millipore超纯水处理系统。
盐酸丁卡因对照品(北京市燕京药业有限公司提供,批号:100403,纯度:100.6%);磺胺醋酰钠对照品(上海三维制药有限公司提供,批号:0912006,纯度:99.84%);乙腈(购自Fisher公司,色谱纯,批号:136376);磷酸二氢铵(国药集团化学试剂有限公司,分析纯,批号:20130121);实验用水为超纯水。复方丁卡因搽剂由本院制剂室生产,批准文号:京药制字H20063505,批号:20110620,20120104,20120224。不含盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠的空白基质由本院制剂室制备。
色谱柱:Alltima C18 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);乙腈-50 mmol·L-1 磷酸二氢铵溶液(磷酸调pH值至3.0) (35:65)为流动相;流速0.5 mL·min-1;检测波长300 nm;进样量10 μL;柱温为室温。在上述色谱条件下,按盐酸丁卡因色谱峰计算理论板数不低于2 000。 进样前,所有溶液均用孔径0.22 μm尼龙滤膜滤过。
分别取盐酸丁卡因对照品24.63 mg、磺胺醋酰钠对照品50.01 mg精密称定,置50 mL量瓶中,加水适量溶解,并定容,摇匀,即为混合储备液。再精密量取混合储备液2,3,4,5,6 mL于10 mL量瓶,加水定容,摇匀,获得盐酸丁卡因浓度约100,150,200,250,300 mg·L-1,磺胺醋酰钠浓度约为200,300,400,500,600 mg·L-1混合对照品溶液。中间浓度的混合对照品溶液作为含量测定用的混合对照品溶液。
精密量取本品2 mL置于50 mL量瓶,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。
依据处方配制不含盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠的空白基质,精密量取空白基质2 mL,按照“2.3”项操作,制备阴性溶液。
分别对阴性溶液、混合对照品溶液和供试品溶液进样分析,考察样品中其他成分和辅料对定量的干扰。阴性溶液、混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图(图1)显示:样品中其他成分和辅料不干扰盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠的测定。盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠的分离度良好,理论板数均>2 000。
对“2.2”项不同浓度的混合对照品溶液分别进样,以峰面积为纵坐标,浓度(mg·mL-1)为横坐标作标准曲线。得到回归方程和线性相关系数( r)。盐酸丁卡因 Y=80 752 097 X-679 332, r=0.999 7,线性范围98.7~296.0 mg·L-1;磺胺醋酰钠 Y=16 387 028 X-89 719, r=0.999 3,线性范围200.0~600.0 mg·L-1。
将对照品溶液用水逐级稀释后,以信噪比( S/N)约为3.0时的浓度为各成分的最低检测限(LOD),S/N约为10.0时的浓度为各成分的最低定量限(LOQ),测得盐酸丁卡因的LOD和LOQ分别为0.49和0.99 mg·L-1,测得磺胺醋酰钠的LOD和LOQ分别为0.25和0.50 mg·L-1。
对批号为20110620的一份供试品溶液连续进样6次,计算得到盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠色谱峰峰面积的RSD( n=6)分别为0.64%和0.29%,说明仪器精密度良好。
对批号20110620的制剂独立制备供试品溶液6份,分别进样分析,计算得到盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠含量的RSD( n=6)分别为1.74%和1.90%,说明方法重复性良好。
在10 mL量瓶中精密加入“2.4”项空白基质0.4 mL,再分别精密加入“2.2”项混合储备液3,4,5 mL,用水定容,摇匀,滤过,进样分析。每个浓度制备3份,共9份样品。以实际测得量和理论加入量的比值作为回收率。结果(表1)显示,盐酸丁卡因的平均回收率为100.4%,RSD为1.33%( n=9);磺胺醋酰钠的平均回收率为100.6%,RSD为0.81%( n=9)。表明方法回收率良好。
 | 表1 盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠的回收率实验结果 mg, n=9 |
对批号为20110620的供试品溶液分别于0,2,4,8,12 h进样分析,计算得到12 h内盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠色谱峰峰面积RSD( n=5)分别为1.15%和0.23%,表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。
应用建立的方法对批号为20110620,20120104,20120224的复方丁卡因搽剂进行含量测定,每个样品测定2份,取平均值。测定结果显示:批号为20110620样品中盐酸丁卡因的含量为0.46%[g·(100 mL)-1],磺胺醋酰钠的含量为1.02%[g·(100 mL)-1];批号为20120104样品中盐酸丁卡因的含量为0.49%[g·(100 mL)-1],磺胺醋酰钠的含量为1.01%[g·(100 mL)-1];批号为20120224样品
 | 图1 阴性溶液(A)、混合对照品溶液(B)和供试品溶液(C)色谱图 |
中盐酸丁卡因的含量为0.47%[g·(100 mL)-1],磺胺醋酰钠的含量为1.06%[g·(100 mL)-1]。
2010年版《中华人民共和国药典》二部[1]对盐酸丁卡因的原料药采用容量法(酸碱滴定)进行定量,对注射用无菌粉末采用紫外分光光度法进行定量;对磺胺醋酰钠原料药及其制剂均采用容量法(氧化还原滴定)进行定量,但以上方法应用于本制剂时均有干扰。故本质量标准采用专属性更好的高效液相色谱法同时测定两种成分。文献对于药品和医院制剂中盐酸丁卡因或磺胺醋酰钠的单独测定方法已有较多报道[2,3,4,5],但高效液相色谱法同时测定复方丁卡因搽剂中盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠的含量笔者未见报道。
笔者尝试了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-磷酸二氢铵溶液、甲醇-磷酸二氢铵溶液、乙腈-醋酸铵缓冲液、甲醇-醋酸铵缓冲液等流动相,发现乙腈-磷酸盐缓冲液时峰形最好,因而选择乙腈-磷酸二氢铵溶液作为流动相。磷酸二氢铵溶液的浓度(10,20,50,100 mmol·L-1)越高,盐酸丁卡因的峰形越好,但过高的盐浓度和乙腈配比时容易析出结晶而损害仪器和色谱柱,因而最终选择50 mmol·L-1 磷酸二氢铵溶液。流动相缓冲液的pH值对色谱峰峰形和保留时间的影响较大,低pH值有利于改善盐酸丁卡因的峰形,但考虑到常规C18色谱柱的承受能力,选择pH值3.0的缓冲液。
盐酸丁卡因和磺胺醋酰钠均有较好的水溶性,用水作为溶液的配制溶剂既能保证两者的完全溶出,又使氢化可的松、丙酸睾酮、鱼肝油等脂溶性成分不易溶出,有效排除其他成分和辅料对测定的干扰。
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