2.1.1 酯交换反应 在乌桕梓油中加入4%氢氧化钠乙醇溶液,75 ℃反应6 h。回收乙醇,分得上层,用盐酸溶液调节pH值至4~5,水洗至中性,干燥,得混合脂肪酸乙酯。

2.1.2 一次尿素包合 将混合脂肪酸乙酯-尿素-95%乙醇(6:2:7) (W/W/W)75 ℃搅拌包合50 min。冷却至-5 ℃,搅拌3 h。抽滤,乙醇洗涤滤饼3次,合并洗涤液和滤液,回收乙醇,得混合不饱和脂肪酸乙酯(Ⅰ)。

2.1.3 二次尿素包合 (Ⅰ)-尿素-95%乙醇(1:1:4)(W/W/W)75 ℃搅拌包合70 min。冷却至-10 ℃,搅拌2 h。抽滤,乙醇洗涤滤饼3次,滤饼加入到80 ℃水中,充分搅拌完全溶解,用10%盐酸溶液调节pH值至2~3,回收乙醇,得混合不饱和脂肪酸乙酯(Ⅱ)。

2.1.4 亚铜离子络合萃取 取氯化亚铜干粉-三乙胺盐酸盐离子液体(1:1.3) (W/W)逐渐加热至120 ℃,氮气保护,维持反应10 h,冷却至室温,得到黑色均匀液体氯化亚铜三乙胺盐酸盐离子液体络合剂(Ⅲ)。取(Ⅲ)-(Ⅱ)(3:1)(V/V)氮气保护25 ℃条件下反应5 h,有黄色固体析出,滤过,石油醚洗涤滤饼3次,滤饼加入到一定量的纯化水中,80 ℃加热2 h,得油层和水层,分出油层,干燥,得到α-亚麻酸乙酯(Ⅳ)。

2.1.5 水解反应 取(Ⅳ)-氢氧化钾-90%乙醇(1:0.5:9) (W/W/W)在氮气保护下,于70~80 ℃进行皂化反应3 h,回收乙醇,加入3倍量的水,搅拌至皂化物完全溶解,加入稀盐酸调节pH值至2~3,静置分层,油层干燥,回收溶剂,脱色,得到无色的α-亚麻酸(Ⅴ)。

2.2.1 α-亚麻酸甲酯化反应 称取α-亚麻酸约8 mg,置于10 mL具塞试管,加甲醇2 mL,三氟化硼乙醚溶液1 mL,振摇,于70 ℃反应10 min,冷却至室温,精密加入正己烷及饱和氯化钠溶液各2 mL,漩涡振摇,静置,吸出水层,加入无水碳酸钠2 g,干燥,上层液即为甲酯化供试品溶液^[4]。

2.2.2 气相色谱条件 DB-WAX弹性石英毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.50 μm),进样口温度270 ℃,检测器温度280 ℃,分流比为100:1,尾吹流量35 mL·min^-1。检测器:氢火焰离子检测器,氢气流量为35 mL·min^-1,空气流量为350 mL·min^-1。程序升温:初温150 ℃,以13 ℃·min^-1的速率上升至175 ℃,再以4 ℃·min^-1上升至215 ℃,保持8 min。载气:氮气(N₂),柱流量1.3 mL·min^-1,进样量1 μL,进样方式为手动进样。以α-亚麻酸甲酯为对照品,采用气相色谱外标法测定含量。

2.2.3 结果 分别精密称取3批纯制前和纯制后的脂肪酸约8 mg,按“2.2.1”项下操作得供试品溶液。精密称取α-亚麻酸甲酯对照品10.05 mg,置10 mL量瓶中,精密加入正己烷,溶解制成每毫升含α-亚麻酸甲酯1.050 mg对照品溶液;再精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2 μL,注入气相色谱仪,计算含量,结果见表1。