选取湖北省中西医结合医院口腔科2013年2月—2015年2月诊断为心脾积热型RAU患者。心脾积热型RAU纳入标准:RAU诊断标准参考文献[1],①病史规律,复发性:有至少2次复发性口腔溃疡发病史;②临床表现:口腔黏膜溃疡呈单个或数个反复发作,间歇期不规律;溃疡发生部位多见于非角化黏膜;溃疡呈圆形或椭圆形,中心略凹陷,周围有充血红晕,表面有黄色假膜;轻型溃疡直径2~5 mm;口炎型(疱疹样)溃疡直径稍小,可出现十余个至数十个散在分布的小溃疡;重型(腺周口疮)溃疡可深达黏膜下层,常单发,直径>5 mm,愈后常留有瘢痕;溃疡疼痛明显。中医心脾积热型RAU证候诊断参考国家中医管理局1994年“中医病证诊断疗效标准”中的辨证标准执行:溃疡大小不等,圆形或椭圆形,可由小米粒到绿豆或黄豆大小,溃疡数目较多,周围可红肿高起,中央凹陷。局部灼热疼痛,口渴;心烦失眠,焦虑不安,便干尿赤。舌质舌尖偏红而干,苔黄腻,脉弦细数。排除标准:妊娠、哺乳期妇女;过敏体质及对多种药物过敏者;合并心脑血管、肝、肾等重要脏器严重器质性疾病及造血系统严重原发性疾病,精神病患者。总共入选心脾积热型RAU患者30例,其中男11例,女19例,年龄18~45岁,平均33岁。同时选取体检健康者30例作为健康对照组,其中男13例,女17例,年龄17~44岁,平均31岁。两组间性别组成、年龄差异无统计学意义,具有可比性。RAU组根据药物治疗方法不同,分为左旋咪唑组和愈口宁组各15例。本试验经医院伦理委员会审核同意,患者鉴署知情同意书。
左旋咪唑组给予左旋咪唑(桂林南药股份有限公司生产,批准文号:国药准字H45020360,规格:每片25 mg),每次50 mg,每日2次,口服,服2 d 停5 d,连续服用3周。愈口宁组给予愈口宁组方:土茯苓15 g、蒲公英15 g、白花蛇舌草15 g、玄参12 g、生地12 g、赤芍12 g、丹皮12 g、紫草12 g、茯苓15 g、炒白术12 g、白芨12 g、生甘草10 g。煎剂制备:每次8倍量水浸泡1 h,共煎煮2次,第1次20 min,第2次15 min,浓缩至400 mL,灌装密封,含生药0.385 g·mL-1。煎煮后分装,规格:每袋200 mL(中药购于武汉市汉口国药有限公司天济中药饮片厂,所有批次药材均经华中科技大学同济药学院张长弓教授鉴定),每次200 mL,一日2次,疗程3周。
1.3.1 外周血T淋巴细胞亚群绝对值计数检测 采用流式细胞术,健康对照组和心脾积热型RAU患者治疗前后均无菌采集空腹外周血2 mL,3.8%乙二胺四醋酸(EDTA)抗凝 ,采用直接免疫荧光标记法,加入不同荧光标记的单克隆抗体(迈瑞公司),放入带有微球的样品管内上机检测(BRICTYE E6流式细胞仪,迈瑞公司)。以侧向角散射光(SSC)为纵坐标,前向角散射光(FSC)为横坐标,对淋巴细胞进行设门,吸获细胞后由流式细胞仪系统软件对结果进行分析,得出T 淋巴细胞各亚群包括C
1.3.2 血清中免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和补体C3、C4含量测定 采用单向免疫扩散法检测血清中免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和补体C3、C4含量。
参照中华口腔医学会口腔黏膜病专业委员会2000年通过的试行标准。痊愈:服药15~25 d后口腔黏膜损害区疼痛消除,溃疡面消失,随访1年无复发;显效:服药15~25 d后口腔黏膜损害区疼痛消除、溃疡面消失,随访8个月无复发;无效:服药15~25 d后口腔黏膜损害区疼痛稍减轻,溃疡面变化不大,反复发作。有效率(%)=(痊愈+显效)/总例数×100%。
采用SPSS 16.0 版统计软件进行统计学分析,正态分布的计量资料以均数±标准差(
左旋咪唑和愈口宁组方治疗3周后,C
左旋咪唑和愈口宁治疗3周后,IgG、IgA、C3、C4水平均较治疗前显著降低,均差异有统计学意义(均
经1年随访,左旋咪唑组患者痊愈12例,显效2例,无效1例,有效率93.3%。愈口宁组患者痊愈11例,显效3例,无效1例,有效率93.3%。两组疗效比较差异无统计学意义(
现代医学认为RAU发病机制复杂[5],包括:机体免疫功能异常、病毒感染、代谢障碍、维生素缺乏、内分泌异常、消化功能紊乱和心理精神社会因素等。虽目前尚无统一的病因病机学结论,但多数学者认为RAU是一种与免疫功能状态有关的疾病,因免疫细胞失衡和免疫功能紊乱致口腔黏膜上皮局部发生损伤、破坏、坏死而形成溃疡,所以免疫紊乱是RAU发生和复发的重要因素[6-11]。研究患者的免疫功能也是近年来RAU发病机制的主要研究方向,但迄今研究结果报道不一。多个研究认为细胞免疫在本病中起着重要作用[6-9]。而KORIDZE等[10]报道在RAU患者中CD3、CD4、吞噬细胞活性和自然杀伤细胞降低,而IgM、IgG、IgE、抗菌和抗毒素抗体滴度升高,提示RAU患者存在细胞免疫和体液免疫失衡。林靖雯等[11]报道92.7% RAU患者有不同类型不同程度免疫功能紊乱,各临床变量在体液免疫和细胞免疫指标间差异有统计学意义。
左旋咪唑是一种双向免疫调节药, 具有双向调节功能,能使免疫缺陷或免疫抑制的宿主恢复免疫功能,是一种免疫正常化药物,而不是免疫增强药或抑制药,对正常机体的影响并不显著[12]。目前研究表明左旋咪唑除了用于肠道线虫病的治疗外,还适用于皮肤病、血液系统疾病、乙型肝炎、肿瘤、甲状腺功能亢进症、类风湿关节炎、RAU等免疫调节治疗,有一定的临床疗效。左旋咪唑常作为RAU中药研究的阳性对照药[13-14]。
本课题组此次研究结果显示:心脾积热证型RAU患者存在T 淋巴细胞亚群的比例失调以及免疫球蛋白和抗体的异常,表明心脾积热证型RAU患者存在细胞免疫和体液免疫的失衡;愈口宁能降低C
笔者分析愈口宁具有免疫调节作用的原因,可能如下。①愈口宁方中以土茯苓、茯苓、蒲公英、白花蛇舌草为君药,以玄参、生地、赤芍、丹皮、紫草为臣药,以白芨、茯苓、白术为佐药,以甘草为使药。②现代药理研究表明,许多中药具有免疫调节作用[15]:土茯苓、茯苓、蒲公英、生地、白芨和白术可通过提高人体外周血淋巴母细胞转化率激发机体细胞免疫功能;白花蛇舌草和生地可通过刺激网状内皮系统增生、促进抗体形成而显著增强机体体液免疫功能;茯苓、白芨和白术可通过提高巨噬细胞的吞噬活性,既参与非特异性免疫的第二道防线,又在特异性免疫中起呈递抗原的功能,从而增强机体细胞免疫和体液免疫功能。③愈口宁全方诸药合用,不仅具有免疫调节的作用,且具有清热解毒,凉血止血,消肿敛疮、健脾和胃之功效,具有清而不寒、补而不滞、利不伤阴、涩不敛邪的特点。这种既针对局部症状又强调扶正固本的以全身调节为主的整体治疗观念是取得RAU良好疗效的关键, 也是防止RAU复发的重要原因。
本研究中,无论是RAU组与健康对照组比较,还是RAU组治疗前后比较,IgM水平均差异无统计学意义,IgG水平均差异有统计学意义,分析其原因可能是:IgM是体液免疫应答中最早出现的抗体,是机体抗感染的“先头部队”,半衰期约为10 d。而RAU患者初次来院检查时间不一,且第2次检查是用药3周后进行,因此IgM差异无统计学意义。IgG约占血清总免疫球蛋白的75%~80%,其半衰期约23 d,是再次免疫应答产生的主要抗体,其亲和力高,在体内分布广泛,具有重要的免疫效应,是机体免疫效应的“主力军”。
免疫紊乱虽然是RAU发生和复发的重要因素,但因细胞免疫和体液免疫指标间有一定差异,评判标准不一,因此后续将进一步研究愈口宁影响RAU免疫功能的分子机制,同时进一步优化药物配方组成,为愈口宁的临床推广应用奠定科学的理论基础。
The authors have declared that no competing interests exist.