目的 研究锦花清热胶囊抗炎、镇咳和镇痛作用。方法 采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验、磷酸组胺致大鼠皮内色素渗出实验观察锦花清热胶囊内容物的抗炎活性;采用氨水致小鼠咳嗽实验、冰醋酸致小鼠扭体实验观察锦花清热胶囊内容物对小鼠的镇咳和镇痛作用。结果 抗炎实验结果显示,大剂量(12 g·kg-1)、中剂量(6 g·kg-1)锦花清热胶囊内容物对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用(
Objective To study the anti-inflammatory, antitussive, and analgesia effects of
健康昆明种小鼠,无特定病原体(SPF)级,体质量(20±2)g,雌雄兼用,哈尔滨医科大学实验动物中心提供,实验动物生产许可证号:SCXK(黑)2013-001,实验动物合格证号:黑动字2015-03-2。Wistar大鼠,SPF级,体质量(200±20)g,雄性,哈尔滨医科大学实验动物中心提供,实验动物生产证号:
SCXK(黑)2013-002,实验动物合格证号:黑动字2015-2-28。实验前均在本实验室适应性饲养3 d,饲养室室温18~24 ℃,相对湿度40%~70%。
锦花清热胶囊(黑龙江仁合堂药业有限责任公司,批号:20140801,规格:每粒含内容物0.5 g),阿司匹林片(大连天宇奥森制药有限公司,规格:每片0.3 g,批号:20140809),麻杏止咳片(吉林双药药业集团有限公司,规格:每片0.26 g,批号:20140502),布洛芬软胶囊(大连天宇奥森制药有限公司,规格:每片0.2 g,批号:20140725),磷酸组胺(上海浦振生物科技发展有限公司,批号:140920),伊文思蓝(上海如吉生物科技发展有限公司,批号:140719),丙酮(哈尔滨市化工试剂厂,批号:140902),二甲苯(哈尔滨市化工试剂厂,批号:140912),冰醋酸(天津市永大化学试剂有限公司,批号:20150104)。
T1000电子天平(常熟市双杰测试仪器厂生产,感量:0.1 mg),AX200分析天平(SHIMADZU CORPORATION JAPAN,感量:0.1 mg),752N紫外-可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司),TDL-80-2B离心机(上海安亭科学仪器厂),YLS-8A多功能诱咳引喘仪(济南益延科技发展有限公司)。
根据小鼠预实验结果,设定本实验锦花清热胶囊内容物大剂量、中剂量、小剂量为12,6,3 g·kg-1,临用前取胶囊内容物,用纯化水配制成0.06,0.03,0.015 g·mL-1溶液,用于小鼠灌胃给药;根据大鼠预实验结果,设定本实验锦花清热胶囊内容物大、中、小剂量为10,5,2.5 g·kg-1,临用前取胶囊内容物,用纯化水配制成0.05,0.025,0.012 5 g·mL-1溶液,用于大鼠灌胃给药。
参照文献[3-5]。取小鼠50只,雌雄各半,随机区组法分为5组,即锦花清热胶囊内容物大剂量、中剂量、小剂量组,空白对照组,阿司匹林组(阳性对照组),每组10只。锦花清热胶囊内容物大、中、小剂量组灌胃给药剂量分别为12,6,3 g·kg-1,阿司匹林组灌胃给药0.2 g·kg-1,空白对照组灌胃给予等体积纯化水。每天按照20 mL·kg-1给药,连续灌胃7 d。于末次给药1 h后,将二甲苯0.05 mL均匀涂抹于小鼠右耳两面,左耳不涂作为对照,致炎0.5 h后处死小鼠,沿小鼠耳廓剪下两耳,用直径6 mm打孔器在两耳相同位置打下耳片,分别称重,左右耳质量之差即为肿胀度。肿胀度=右耳质量(肿胀耳)-左耳质量(对照耳);肿胀抑制率(%)=(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度) /对照组平均肿胀度×100%。
参照文献[6]。取雄性Wistar大鼠50只,分组方法及给药途径同“1.5”项。锦花清热胶囊内容物大剂量、中剂量、小剂量组给药剂量分别为10,5,2.5 g·kg-1,阿司匹林组给药0.2 g·kg-1,空白对照组给予等体积纯化水。每天按照20 mL·kg-1给药,给药前12 h禁食不禁水。给药45 min后,对大鼠脊柱右侧背部脱毛,在脱毛处皮内注射1 mg·L-1磷酸组胺0.1 mL,立刻按5 mL·kg-1舌静脉注射1%伊文思蓝,15 min后处死大鼠,测定注射部位皮内着色面积(长径×短径),剥离脱毛处附有蓝斑的皮肤,剪碎,置于丙酮-水(7∶3)混合液中浸泡24 h,离心,取上清液,用752N紫外-可见分光光度计在波长610 nm处测吸光度(
参照文献[7-8]。除阳性对照组更换为麻杏止咳片组(0.8 g·kg-1)外,实验分组、给药途径、给药剂量均同“1.5”项。 连续给药7 d,于末次给药0.5 h后将小鼠置于诱咳引喘仪中,设定氨水诱咳时间为30 s,测定时间为5 min,观察并记录该过程中小鼠咳嗽潜伏期(从诱咳至发生首次咳嗽的时间)和小鼠在5 min内咳嗽的次数(小鼠腹肌收缩或缩胸,并张大嘴,头向前倾,有时带有咳嗽声)。
参照文献[8]。除阳性对照组更换为布洛芬组(0.04 g·kg-1)外,实验分组、给药途径、给药剂量均同“1.5”项。连续给药7 d,于末次给药1 h后腹腔注射0.8%醋酸溶液0.1 mL·(10g)-1,放入恒温器中(设定温度24 ℃),记录注射醋酸后15 min内各小鼠扭体潜伏期(注射醋酸至发生首次扭体的时间)和小鼠扭体次数(腹部内凹,后肢伸展,臀部抬高)。
采用SPSS18.0 版统计软件分析数据,计量资料用均数±标准差(
各组大、小鼠生活状态与实验前均无明显差别,无精神萎靡或死亡,进食量与饮水量基本稳定,各组体质量增长速度无明显差异。
与空白对照组比较,锦花清热胶囊内容物大、中、小剂量组及阿司匹林组小鼠耳廓肿胀度均被抑制,作用随着药物浓度的增加而增强,其中锦花清热胶囊内容物大剂量组、阿司匹林组差异有统计学意义(
与空白对照组比较,锦花清热胶囊内容物大剂量、中剂量、小剂量组及阿司匹林组大鼠皮内着色面积明显减小,其中锦花清热胶囊内容物大剂量组、阿司匹林组差异有统计学意义(
与空白对照组比较,锦花清热胶囊内容物大、中、小剂量组及麻杏止咳片组小鼠咳嗽潜伏期均明显延长,其中锦花清热胶囊内容物大剂量组、麻杏止咳片组差异有统计学意义(
锦花清热胶囊重用锦灯笼,为君药,其性寒味苦,能清热解毒、利咽化痰、利尿通淋,主治咽痛音哑、痰热咳嗽等病证;药理研究表明其具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用。金银花性寒味甘,能清热解毒、疏散风热,临床常用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等病证;药理研究表明其具有抗病原微生物、抗炎、解热、抗内毒素、增强免疫等作用。桔梗性平味苦、辛,能宣肺、利咽、祛痰、排脓,用于咳嗽痰多、胸闷不畅、咽痛音哑、肺痈吐脓等病证;药理研究表明其具有祛痰、镇咳、解痉、镇痛、解热、抗炎、抗过敏、增强免疫等多重作用。桑叶甘、苦、寒,能疏散风热、清肺润燥,用于风热感冒、肺热燥咳等病证;药理研究表明其具有抗炎、抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、降血压等作用。连翘性微寒味苦,能清热解毒、消肿散结、疏散风热,用于痈疽、瘰疬、乳痈、丹毒、风热感冒、温病初起等病证;药理研究表明其具有广谱抗菌、抗病毒、解热、抗炎等作用。芦根性寒味甘,能清热泻火、生津止渴、除烦、止呕、利尿,临床多用于热病烦渴、肺热咳嗽、肺痈吐脓等病证;药理研究表明其具有解热、镇静、镇痛、抗菌、增强免疫等作用。纵观全方,组方中药物性偏寒凉,味偏苦甘,诸药相合,共奏清热解毒、疏散风热、宣肺利咽、祛痰止咳、养阴生津、消肿止痛之功。该组方药物药理研究提示其具有较强抗炎、抗菌、抗病毒、镇咳、解热、镇痛等药理作用,为本研究提供了理论依据。
本实验根据锦花清热胶囊内容物的组成,选用不同的实验模型,分别进行了抗炎、镇咳和镇痛实验。结果表明,与空白对照组比较,本品大剂量、中剂量抗炎、镇咳、镇痛效果明显。小鼠耳肿胀实验提示大剂量、中剂量锦花清热胶囊内容物可抑制毛细血管扩张、通透性增加、渗出性水肿为主的急性炎症反应,大剂量对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀抑制作用最佳,其次为中剂量;大鼠皮内色素渗出实验提示大剂量、中剂量锦花清热胶囊内容物可拮抗磷酸组胺引起的毛细血管通透性增强,降低局部炎症组织毛细血管通透性,对急性炎症有明显抑制作用,其中大剂量作用效果最好;小鼠镇咳实验中大剂量、中剂量锦花清热胶囊内容物对咳嗽有明显抑制作用,提示该药可能作用于有关化学感受器,保护支气管黏膜免受刺激,达到镇咳效果,其中大剂量作用效果最优;小鼠镇痛实验提示大剂量、中剂量、小剂量锦花清热胶囊内容物对醋酸沉积在小鼠脏层和壁层腹膜、引起深部较大面积较长时间的炎性疼痛有明显的抑制作用,且呈量效关系,大剂量作用效果最好。同时,本课题组对锦花清热胶囊内容物其他药效和作用机制研究也正在进行中,其结果将会陆续报道。
The authors have declared that no competing interests exist.