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医药导报
HERALD OF MEDICINE, 2018, 37(6): 735-740
doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2018.06.020
青蒿琥酯自微乳的制备与质量评价
Preparation and Quality Evaluation of Artesunate Self-microemulsions
柯云玲, 潘金明, 席建军, 张建康, 孙晶晶, 潘旭旺, 庄让笑
杭州市西溪医院制剂室,杭州 310023
KE Yunling,, PAN Jinming, XI Jianjun, ZHANG Jiankang, SUN Jingjing, PAN Xuwang, ZHUANG Rangxiao,
Manufacturing Laboratory, Xixi Hospital of Hangzhou City, Hangzhou 310023, China

作者简介 柯云玲(1982-),女,浙江台州人,药师,学士,从事医院制剂和肝病药物开发研究。电话:0571-85463955,E-mail:120957555@qq.com。

通信作者 庄让笑(1972-),男,浙江温州人,主任药师,学士,从事医院制剂和肝病药物开发研究。电话:0571-85463955,E-mail:zhuangrangxiao@163.com。
基金资助: 杭州市医疗科研及重点专科专病项目(20110733Q20,20142013A60)
中图分类号: R978.61;TQ460.6     文献标识码: A     文章编号: 1004-0781(2018)06-0735-06
摘要:

目的 制备青蒿琥酯自微乳,并对其进行质量评价。方法 考察青蒿琥酯在不同油、乳化剂、助乳化剂中的平衡溶解度,利用伪三元相图,筛选青蒿琥酯自微乳的处方组成并进行优化,并对制备的青蒿琥酯自微乳进行质量评价和稳定性考察。结果 最佳处方为Cremophor EL:正丁醇:油酸乙酯=54:36:10,青蒿琥酯质量分数为50 mg·g-1。青蒿琥酯自微乳化后平均粒径为(15.48±0.66) nm,Zeta电位为(-5.78±0.34) mV,体外释放结果表明青蒿琥酯自微乳能明显提高药物的溶出率,而且初步稳定性较好。结论 所制备的青蒿琥酯自微乳粒径小,其体外释放较原料药明显改善,稳定性良好。
关键词: 青蒿琥酯自微乳 ; 伪三元相图 ; 体外释放 ; 制备 ; 质量评价

Abstract:

Objective To prepare the artesunate self-microemulsion and evaluate its quality. Methods The equilibrium solubility of artesunate in oils, emulsifier and co-emulsifier was investigated, respectively. The prescription composition of artesunate self-microemulsion was screened by using the pseudo-ternary phase diagrams. The stability and quality of artesunate self-microemulsion were studied. Results The optimal artesunate self-microemulsion formula was composed of Cremophor EL: n-buty alcohol: ethyl oleate (54:36:10), and the quality fraction of artesunate was 50 mg·g-1. The average particle size was (15.48±0.66) nm, while the Zeta potential was (-5.78±0.34) mV. The result of drug release showed that artesunate self-microemulsion could improve the drug dissolution rate significantly in vitro, and the preliminary stability was good. Conclusion The self-microemulsion with small particle size is stable, the drug release in vitro was significantly improved as compared with artesunate API, and has a good stability.
Key words: Artesunate self-microemulsion ; Pseudo-ternary phase diagram ; Release ; Preparation ; Quality evaluation

青蒿琥酯(artesunate)是抗疟药青蒿素的衍生物成分,具有抗疟、抗肝纤维化[1]等多方面的药理作用[2,3,4,5]。虽然青蒿琥酯的临床疗效确切、药理作用广泛,但由于其水溶性差、口服生物利用度低等特点,影响青蒿琥酯的临床应用。自微乳给药系统(self-microemulsion drug delivery system,SMEDDS)是由乳化剂、助乳化剂和油相组成的均一透明浓缩液,口服后在胃肠道的蠕动下自发形成粒径为10~100 nm的乳滴,能够有效改善难溶性药物的溶解度生物利用度[6,7,8,9]。因此笔者在本研究借助药剂学手段将青蒿琥酯制备成青蒿琥酯自微乳,并进行初步质量评价和体外释放考察,以期提高青蒿琥酯的溶出度。

1 仪器与试药
1.1 仪器

1200型高效液相色谱分析仪(美国Agilent公司);GL-21M型高速冷冻离心机(上海市机械研究所有限公司);Nano S90型激光粒度分析仪(英国马尔文仪器有限公司);XL30型扫描电子显微镜(荷兰FEI公司);UV-2550(日本岛津有限公司);B-600显微镜(意大利OPTIKA公司);RC806D溶出试验仪 (天津市天大天发科技有限公司)。

1.2 试药

青蒿琥酯原料药(阿拉丁试剂上海有限公司,含量>98%,批号:H1202009);青蒿琥酯对照品(中国食品药品检定研究院,含量99.7%,批号:100200-201003);聚山梨酯-80(温州清明化工有限公司,批号:20130301);聚氧乙烯蓖麻油EL(Cremophor EL)和15-羟基硬脂酸酯聚乙二醇酯(Solutol HS15,德国BASF公司);肉豆蔻酸异丙酯 (IPM,阿拉丁试剂上海有限公司,批号:H1202009);辛酸癸酸甘油三酯(Miglyol 812N,北京凤礼精求商贸有限责任公司,批号:120411);油酸乙酯(EO,英国Croda公司);聚乙二醇辛基苯基醚 (OP-10乳化剂,阿拉丁试剂上海有限公司,批号:C1304005);1,2-丙二醇(如皋市金陵试剂厂,批号:20120316);正丁醇(浙江杭州双标化工试剂厂,批号:20120530);无水乙醇(杭州龙山精细化工有限公司,批号:20121031);其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 青蒿琥酯的HPLC测定方法的建立

2.1.1 色谱条件 色谱柱:Agilent ZORBAXSB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:55%乙腈(用稀醋酸调至pH 值4.5);检测波长:210 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:25 ℃;进样量:20 μL[10,11]。

2.1.2 溶液配制 ①空白溶液:取各种辅料适量,混匀,用流动相稀释后即空白溶液。②对照品溶液:称取青蒿琥酯对照品15.0 mg,精密称定,置于50 mL量瓶中,加流动相溶解并定容,配制成浓度为300.0 μg·mL-1的青蒿琥酯对照品储备液,4 ℃保存备用;精密吸取上述储备液,用流动相稀释配制成浓度分别为6.0,15.0,30.0,60.0,150.0和300.0 μg·mL-1系列的青蒿琥酯对照品溶液。③供试品溶液:称取青蒿琥酯原料药 15 mg,精密称定,置于100 mL量瓶中,再分别加入聚山梨酯-80、Cremophor EL、IPM、Miglyol 812N、Solutol HS15、EO和OP-乳化剂各0.1 g,用流动相充分溶解后定容至刻度,用孔径0.45 μm微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。

2.1.3 方法专属性考察 分别取上述空白溶液、对照品溶液和供试品溶液,在上述“2.1.1”项色谱条件项下进行测定,结果见图1。


图1 空白溶液、对照品溶液和供试品溶液HPLC图
A.空白溶液;B.对照品溶液;C.供试品溶液;1.青蒿琥酯

Fig.1 HPLC chromatograms of blank solution,reference solution and test solution
A.blank solution ;B.reference solution ;C.test solution;1.Artesunate

2.1.4 线性关系考察 取“2.1.2”项溶液配制下系列对照品溶液,在上述色谱条件下进样20 μL分析,并记录色谱图,以峰面积(A)对青蒿琥酯浓度(C,μg·min-1)进行线性回归。结果得到回归方程为:A=53.011 9C+7.075 8(r=0.999 8),结果表明青蒿琥酯在6.0~300.0 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.1.5 精密度实验 ①日内精密度:分别精密吸取6.0,30.0和300.0 μg·mL-1样品溶液,在同一天内不同时间点进行测定,计算日内精密度;②日间精密度:精密吸取上述3种样品溶液,每天测定1次,连续6 d,计算日间精密度,结果见表1。

表1 精密度实验考察结果
Tab.1 The results of precision tests x¯±s,n=6
浓度/
(μg·mL-1)		 日内精密度 日间精密度
测定量/
(μg·mL-1)		 RSD/
%		 测定量/
(μg·mL-1)		 RSD/
%
6.0 6.09±1.25 1.04 5.98±0.98 1.69
30.0 30.11±0.34 0.58 30.04±1.12 1.13
300.0 300.42±0.77 0.71 300.25±0.47 1.48

表1 精密度实验考察结果

Tab.1 The results of precision tests x¯±s,n=6

2.1.6 回收率实验 精密称取青蒿琥酯原料药适量,配置成浓度为1.5 mg·mL-1的溶液,分别量取0.2,1.6和1.8 mL置于100 mL量瓶中,再分别取浓度为300 μg·mL-1青蒿琥酯对照品溶液1,2和10 mL,配制成终浓度为6.0,30.0和300.0 μg·mL-1的低、中、高浓度溶液,每个浓度平行3份,用孔径0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液20 μL分别进样,记录色谱图,计算低、中、高浓度青蒿琥酯溶液的回收率和RSD,结果见表2。

表2 青蒿琥酯回收率实验结果
Tab.2 Results of recovery tests of artesunate n=3
原有量 加入量 测得量 回收率 平均回收率 RSD
μg %
2.95 3.10 5.98 97.74
2.88 3.10 6.08 103.23 99.89 2.93
2.96 3.10 6.02 98.71
24.02 6.09 30.28 102.79
24.18 6.09 30.33 100.99 103.45 2.75
23.85 6.09 30.34 106.57
270.08 29.98 299.64 98.60
269.75 29.98 301.62 106.30 102.57 3.76
270.31 29.98 301.13 102.80

表2 青蒿琥酯回收率实验结果

Tab.2 Results of recovery tests of artesunate n=3

2.2 青蒿琥酯自微乳处方筛选

2.2.1 青蒿琥酯在各辅料中的平衡溶解度 将过量青蒿琥酯分别加入定量(2 g)的EO、橄榄油、IPM、Mig-lyol 812N、Cremophor EL、OP-10乳化剂、聚山梨酯80、HS15中,涡漩混合10 min后,于60 ℃恒温水浴中搅拌,25 ℃恒温振荡平衡48 h后,16 451×g离心10 min。取上清液,用流动相稀释一定倍数,用HPLC测定青蒿琥酯的含量(n=3)。结果表明,青蒿琥酯在EO、Miglyol 812N 、IPM、橄榄油、聚山梨酯-80、OP-10乳化剂、HS15和Cremophor EL辅料中的平衡溶解度分别为(10.48±0.46),(8.24±1.02),(8.12±0.83),(0.74±0.44),(8.51±1.14),(8.22±0.69),(9.13±0.33)和(8.36±0.45) mg·g-1(n=3)。从青蒿琥酯在各辅料中的平衡溶解度结果可以看出,青蒿琥酯在各个辅料中有不同程度的平衡溶解度,而在油相EO中溶解度最大(10.48±0.46) mg·g-1。

2.2.2 不同油相和乳化剂的配伍变化 为了进一步考察不同乳化剂和油相的配伍变化,分别将油相与乳化剂按4:6(W/ W)的比例涡旋振荡混合后观察其分散情况,取适量,用纯化水稀释100倍,轻微振荡,观察乳化后乳液的澄清度,并于550 nm波长处测定其透光率,从而确定油相和乳化剂的配伍情况。将自乳化情况分为5个级别:(A)溶液呈澄清或微泛蓝色;(B)略浊,呈蓝白色;(C)呈亮白色不透明黏稠液体;(D)色泽暗,呈灰白色,略带油状;(E)难乳化,一直有油滴存在。结果见表3。

表3 不同油相和乳化剂的配伍变化
Tab.3 Compatibility changes of different oil phase and emulsifier x¯±s,n=3
辅料 Cremophor EL 聚山梨酯-80 HS15 OP-10乳化剂
级别 透光率/% 级别 透光率/% 级别 透光率/% 级别 透光率/%
EO A 83.14±0.12 A 71.37±0.11 C 35.41±0.06 E 0.95±0.06
IPM A 84.86±0.17 B 57.52±0.09 B 71.24±0.11 D 2.33±0.19
Miglyol 812N B 57.63±0.09 B 2.34±0.10 C 31.40±0.20 D 1.89±0.05
橄榄油 D 1.40±0.10 C 0.53±0.16 E 0.09±0.04 E 1.08±0.20

表3 不同油相和乳化剂的配伍变化

Tab.3 Compatibility changes of different oil phase and emulsifier x¯±s,n=3

从实验结果可以看出,在油相中,IPM和EO与不同乳化剂的自乳化情况较好,分散后所得乳液的透光率明显大于其他组合,但根据“2.2.1”项下平衡溶解度,结果发现青蒿琥酯在IPM中的溶解度不如EO,因此优选EO作为油相;几种乳化剂中,乳化剂Cremophor EL的乳化能力最强,通过比较青蒿琥酯在不同油相、乳化剂中的溶解度大小以及两者的配伍情况综合考虑,选择EO为油相,Cremophor EL为乳化剂进行下一步的研究。

2.2.3 助乳化剂的选择 采用滴定法绘制伪三元相图[12,13],固定油相为EO、乳化剂为Cremophor EL,考察不同助乳化剂无水乙醇、1,2-丙二醇和正丁醇形成自微乳的能力,将乳化剂和助乳化剂按质量比(Km)1.5:1混匀,再与油相按9:1,8:2,7:3,6:4,5:5,4:6,3:7,2:8,1:9的比例混匀,在搅拌状态下用37 ℃纯化水滴定,肉眼观察并借助显微镜,将能形成澄明溶液并具有蓝色乳光的点确定为可形成自微乳的区域,记录溶液由浑浊到澄清时临界点的加水量,计算各组分在临界点的质量百分数,绘制伪三元相图,沿相图中自微乳区边线由水的顶点作切线,朝向混合乳化区顶点区域内的体系可用水无限稀释,为自微乳化区域(图中阴影部分),以相图中自微乳存在区域的大小来筛选助表面活性剂,结果见图2。


图2 不同乳化剂的伪三元相图

Fig.2 Pseudo ternary phase diagrams of different emulsifiers

从实验结果可以看出,以上3种助乳化剂均存在微乳区域,助乳化剂为正丁醇时,具有最大的自微乳区,因此选择正丁醇为助乳化剂,进行处方的进一步优化。

2.2.4 乳化剂和助乳化剂的比例(Km)的确定 以EO为油相,Cremophor EL为乳化剂、正丁醇为助乳化剂,绘制伪三元相图,考察对微乳形成的影响,见图3。从上述结果可见,随着Km的增加,乳化剂的含量增加,微乳形成的区域也在增大。但当Km=2.5时,与Km=1.5时自微乳区域比较相差不大,且溶液黏度变大,自乳化的速度也稍微降低,因此选择Km=1.5。


图3 不同Km的伪三元相图

Fig.3 Pseudo ternary phase diagrams of different Km

2.2.5 不同载药量对SMEDDS形成的影响 将EO、Cremophor EL和正丁醇(Km=1.5)混合均匀后,分别加入青蒿琥酯,使其质量分数为10,50和100 mg·g-1,结果发现不同载药量对自微乳区影响很小,但当青蒿琥酯质量分数为100 mg·g-1时,自微乳加水稀释后,药物有析出现象,因此确定处方中青蒿琥酯的质量分数为50 mg·g-1。见图4。


图4 不同载药量的伪三元相图

Fig.4 Pseudo ternary phase diagrams of different drug loading capacity

2.2.6 含药处方优化 采用选定的处方组成(EO、Cremophor EL、正丁醇)固定油相的比例为10%,15%和20%,配制不同乳化剂和助乳化剂比例组成的SMEDDS,混合均匀后加入适量青蒿琥酯,使其质量分数为50 mg·g-1,涡旋混合10 min使青蒿琥酯全部溶解,取青蒿琥酯-SMEDDS适量用37 ℃纯化水稀释50倍后,以粒径和PDI指数作为评价指标进行分析,结果见表4。

表4 含药处方优化结果
Tab.4 Optimization results of drug containing prescription x¯±s,n=3
处方组成/% 粒径/
nm		 分散指数
处方号 Cremophor EL 正丁醇 EO
1 54 36 10 16.2±0.59 0.064±0.028
2 56 34 15 17.9±1.03 0.114±0.083
3 58 32 20 18.7±0.94 0.092±0.057

表4 含药处方优化结果

Tab.4 Optimization results of drug containing prescription x¯±s,n=3

当油相比例从10%增加到20%时,自微乳化后粒径相应有所增加,结合分散指数最终确定体系处方为Cremophor EL:正丁醇:EO=54:36:10,青蒿琥酯质量分数为50 mg·g-1。

2.3 青蒿琥酯自微乳形态、粒径和电位

取青蒿琥酯-SMEDDS 1.0 g,加水50 mL,于磁力搅拌器上搅拌,待完全自微乳化后,取适量用粒径分析仪测定平均粒径和Zeta电位,结果测得平均粒径为(15.48±0.66) nm,Zeta电位为(-5.78±0.34) mV;另取适量自微乳化后溶液滴在铜网上,用2%磷钨酸(pH值4.47)负染色晾干后电镜观察,液滴均呈圆球形,结果见图5。


图5 青蒿琥酯-SMEDDS透射电镜照片(×100 000)

Fig.5 Transmission electron microscope of AS-SMEDDS(×100 000)

2.4 青蒿琥酯SMEDDS体外释放

取自制青蒿琥酯自微乳胶囊和青蒿琥酯胶囊,按照《中华人民共和国药典》2015年版四部溶出度与释放度测定法(转篮法)测定[14],以0.5%十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液(pH值6.8)500 mL为释放介质(37.0±0.5)℃,搅拌速度为100 r·min-1。分别于5,10,20,30,45,60,90,120 min取样5 mL(同时补充同温等量介质),经孔径0.45 μm滤膜滤过,续滤液以流动相稀释后用HPLC法测定,计算药物累积释放率(Q)并绘制药物累积释放曲线,结果见图6。

青蒿琥酯自微乳体外释放结果表明,青蒿琥酯-SMEDDS在30 min内溶出>80%,而青蒿琥酯原料药30 min溶出仅约27%。SMEDDS能够大大提高青蒿琥酯的体外溶出。


图6 青蒿琥酯-SMEDDS与青蒿琥酯体外释放曲线比较(n=6)

Fig.6 In vitro releasing curve of AS-SMEDDS and AS (n=6)

2.5 初步稳定性考察

将青蒿琥酯-SMEDDS置于带塞西林瓶中,密封后常温放置6个月,分别于第0,1,2,3,6个月末取样,考察样品的稳定性,结果见表5,可以看出,青蒿琥酯-SMEDDS室温下放置6个月后其外观性状、粒径及含量,与0个月比较,均无明显变化,表明青蒿琥酯-SMEDDS稳定性良好。

表5 初步稳定性试验结果
Tab.5 Results of preliminary stability test x¯±s,n=3
时间/
个月		 外观 粒径/
nm		 含量/
(mg·g-1)
0 未见分层,澄明透明 15.48±0.66 49.87±0.43
1 未见分层,澄明透明 15.77±0.72 50.01±1.29
2 未见分层,澄明透明 15.32±1.26 49.84±1.05
3 未见分层,澄明透明 16.04±0.94 49.92±1.84
6 未见分层,澄明透明 15.83±1.12 49.76±0.62

表5 初步稳定性试验结果

Tab.5 Results of preliminary stability test x¯±s,n=3

3 讨论

自微乳制剂作为新型给药制剂,与普通的乳剂比较,具有粒径更小、更快更有效地被胃肠道吸收等特点;并能够提高难溶性或脂溶性药物的溶解度。欧晓霞等[15]通过将熊果酸制备成熊果酸自微乳制剂,与等剂量的熊果酸缓释片和熊果酸混悬液相比,自微乳显著提高其大鼠体内的生物利用度;刘翠等[16]将度他雄胺制备成自微乳制剂,通过对自微乳制剂和度他雄胺软胶囊分别在不同介质中释放行为研究,显示自微乳能够明显改善度他雄胺的溶出。因此,本实验借助自微乳制剂的特点,利用伪三元相图,将难溶性药物青蒿琥酯制备成自微乳制剂提高其体外溶出。

自微乳制剂处方筛选时,油相和乳化剂是微乳形成的重要组成部分,从青蒿琥酯在各种辅料的平衡溶解度可以看出,青蒿琥酯在EO中的溶解度比较大,而在植物油中溶解度较小;另外,从不同油相和乳化剂的配伍结果可以看出,乳化剂Cremophor EL的乳化能力较其他乳化剂强,可能是因为其所含聚氧乙稀基团较多,HLB值大,对油相的增溶能力较大;因此,本实验以微乳的粒径和PDI作为评价指标,结合青蒿琥酯在不同辅料中的溶解度以及油相和乳化剂的配伍变化,并对处方进行优化筛选,最终确定青蒿琥酯自微乳处方为Cremophor EL:正丁醇:EO=54:36:10,得到粒径较小且形态均一的自微乳制剂。

体外释放和稳定性研究也是评价药物质量的重要指标,体外释放结果显示青蒿琥酯自微乳在30 min内溶出达80%,而青蒿琥酯原料药30 min溶出仅约27%,表明自微乳给药制剂能够显著提高青蒿琥酯的溶出;经过6个月的初步稳定性实验,所制备的青蒿琥酯自微乳未见分层,而且含量和粒径较0个月无明显变化,表明青蒿琥酯自微乳制剂在室温放置6个月稳定性良好。

The authors have declared that no competing interests exist.
参考文献
[1] 彭龙希,高思楠,王媛,等.青蒿琥酯在大鼠体内外抗肝纤维化的作用[J].中国药理学通报,2016,32(5):658-663.
目的：观察青蒿琥酯( artesunate, Art)对大鼠肝纤维化的治疗作用及其对大鼠原代肝星状细胞( hepatic stellate cells, HSCs)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法建立牛血清白蛋白( bovine serum albumin, BSA)免疫性肝纤维化大鼠模型,分为正常对照组、模型对照组及青蒿琥酯低、中、高剂量组；给药组分别给予不同剂量的青蒿琥酯灌胃,正常和模型对照组给予同体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续2个月；酸水解法检测其肝组织胶原蛋白含量,测定血清白蛋白( albumin, Alb)、丙氨酸氨基转移酶( alanine amino transfer-ase, ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶( aspartate amino trans-ferase, AST)水平；苏木精-伊红染色法( hematoxylin-eosin staining, HE染色)和胶原染色法对肝组织切片染色。分离大鼠 HSCs,以培养活化 HSCs。用 MTT 法测定 HSCs 增殖率,消化法测定细胞培养上清液中的羟脯氨酸( hydroxypro-line, Hyp)含量,Western blot和RT-PCR法检测HSCs p53表达。结果与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清Alb水平降低(P<0.05),ALT、AST水平增高(P<0．05)；与模型对照组相比,青蒿琥酯低、中、高剂量组血清AST水平降低(P<0．05),大鼠肝组织胶原蛋白含量降低(P<0．05)。青蒿琥酯对培养活化的HSCs有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0．05)；青蒿琥酯作用24 h后,HSCs分泌羟脯氨酸减少( P<0．05), p53 mRNA表达增加( P<0．05)。结论青蒿琥酯在大鼠体内、体外均有抗肝纤维化作用,该作用与其增加HSCs p53的表达有关。
DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.05.013      URL    
[本文引用:1]
[2] 张晓勇,周春祥.青蒿琥酯对大鼠肝 Kupffer 细胞分泌肝纤维化相关细胞因子的影响[J].安徽医学,2014,35(10):1437-1439.
目的探讨青蒿琥酯对大鼠肝巨噬(Kupffer)细胞分泌致炎细胞因子的影响。方法 CCl4皮下注射SD大鼠进行肝纤维化造模,Percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠肝Kupffer细胞,ELISA检测不同浓度青蒿琥酯处理LPS刺激的大鼠肝Kupffer细胞分泌致炎细胞因子TNF-α、TGF-β1和IL-6的变化。结果造模12周后,模型组大鼠出现明显的肝纤维化,Percoll密度梯度离心纯化后的大鼠肝Kupffer细胞在LPS刺激后TNF-α、TGF-β1和IL-6的表达量在模型组较对照组显著增加(P0.05)。0μmol/L、125μmol/L、175μmol/L、225μmol/L 4个浓度的青蒿琥酯处理后,模型组较对照组致炎细胞因子TNF-α、TGF-β1和IL-6的表达量显著下调,并且175μmol/L为最佳抑制浓度(P0.05)。结论青蒿琥酯可以抑制大鼠肝Kupffer细胞分泌致炎细胞因子
DOI:10.3969/j.issn.1000-0399.2014.010.040      URL    
[本文引用:1]
[3] 袁红纲,张生,董自强.青蒿琥酯诱导人前列腺癌细胞凋亡的实验研究[J].现代肿瘤医学,2015,23(4):444-447.
目的：探讨青蒿琥酯（artesunate,Art）对人前列腺癌PC-3细胞株抑制作用及机制。方法：进行前列腺癌PC-3细胞培养,不同浓度Art干预,采用MTT法检测用药后细胞增殖率的改变,流式细胞术（FCM）检测细胞周期的改变和凋亡比。结果：与对照组比较,Art可显著抑制PC-3细胞增殖（P〈0.01）;PC-3细胞主要被阻滞在G0/G1期,FCM检测PC-3细胞凋亡比,各实验组均明显高于对照组（P〈0.01）,且呈时间、剂量依赖性。结论：Art可抑制PC-3细胞增殖,其作用机制可能与调控细胞周期、诱导细胞凋亡有关。
DOI:10.3969/j.issn.1672-4992.2015.04.03      URL    
[本文引用:1]
[4] 梅昕,刘婧,白玫,等.青蒿琥酯的免疫抑制作用及机制研究[J].中国药学杂志,2013,48(11):878-883.
目的初步研究青蒿琥酯体内外发挥免疫抑制的机制。方法体外研究观察青蒿琥酯对小鼠淋巴细胞毒性及对细胞增殖的影响。通过迟发型超敏反应小鼠模型研究青蒿琥酯在体内的免疫效应;采用逆转录一聚合酶链反应与酶联免疫吸附法检测Treg/Th17细胞特异性核因子及相关细胞因子的表达与含量;蛋白质印迹法检测p38丝裂酶原激活蛋白激酶蛋白的表达水平。结果青蒿琥酯明显抑制刀豆蛋白A及脂多糖诱导的淋巴细胞增殖;与地塞米松相比毒性更低。体内给药后,青蒿琥酯能减轻迟发型超敏反应小鼠耳肿胀;上调Foxp3及白细胞介素-10表达量,下调ROR-γt与白细胞介素17水平;抑制p38丝裂酶原激活蛋白激酶的磷酸化活性。结论青蒿琥酯可能通过其抗炎及调节Treg/Th17平衡而发挥免疫抑制作用,是一种新型免疫调节剂。
URL    
[本文引用:1]
[5] 席建军,张建康,潘旭旺,等.青蒿琥酯自微乳在大鼠体内的药动学研究[J].中国现代应用药学,2017,34(3):385-389.
目的建立大鼠血浆中青蒿琥酯的HPLC-MS/MS测定方法,并研究青蒿琥酯自微乳在大鼠体内的药动学特征。方法12只SD大鼠随机分为2组,单剂量分别灌胃(50 mg·kg~(-1))青蒿琥酯自微乳和青蒿琥酯原料药,以格列吡嗪为内标,用LC-MS/MS测定给药后血浆中的药物浓度,并计算药动学参数。结果青蒿琥酯血浆样品的线性范围为1.0~1000.0ng·mL~(-1),回归方程为A=294.74C-439.33(r=0.999 6),定量下限为1.0ng·mL~(-1)。日内、日间变异系数(RSD)均10%,符合生物样品的分析要求。青蒿琥酯原料药和青蒿琥酯自微乳的药动学参数C_(max)、t1/2和AUC_(0→t)分别为:(87.6±8.80)ng·mL~(-1),(1.88±0.33)h和(43.3±1.74)h·ng·mL~(-1);(421±41.6)ng·mL~(-1),(1.48±0.17)h和(282±17.7)ng·mL~(-1)。其中,C_(max)和AUC_(0→t)、存在显著性差异(P0.01)。结论该方法简便灵敏,可用于血浆中青蒿琥酯的含量测定,经灌胃给药后,与原料药比较,青蒿琥酯自微乳能显著提高生物利用度。
URL    
[本文引用:1]
[6] 凌婧,孙明辉,翟雪珍,等.自(微)乳化制剂的固体化技术[J].中国药学杂志,2011,46(4):245-248.
<b>目的</b> 综述固体化技术用于自（微乳化制剂的研究进展。<b>方法</b> 查阅近年来国内外相关文献并进行归纳和总结。<b>结果</b>与<b>结论</b> 利用各种制剂固体化技术可将液态或半固态自（微乳化制剂转变为固态自（微乳化制剂；自（微乳化制剂固体化后不仅改善了液态制剂生产成本高、不便携带、低温储存过程中的药物或辅料的析出以及药物化学稳定性问题，而且保留了液态自（微乳化制剂提高难溶性药物溶出度和生物利用度的特性；此外还可根据药物特性和实际需要，通过添加其他辅料或包衣制备缓释或控释制剂。
Magsci     URL    
[本文引用:1]
[7] 毕肖林,刘璇,祖强,等.口服微载体药物递送系统及其在中药研究中的应用[J].中国中药杂志,2013,38(21):3638-3644.
载药微粒是一类应用前景广阔的定向、定位、控释给药系统载体.各种微载体给药系统在促进吸收,提高稳定性,定位、控制释放方面各有优势,如果能结合中药的特点,构建中药有效成分、有效部位、中药复方口服微载体给药系统,对中药新型给药系统的研究具有深远意义.该文主要介绍了几种可用于口服的微载体药物递送系统的特点和优势,并对其在中药领域中的应用进行了综述.
DOI:10.4268/cjcmm20132108      URL    
[本文引用:1]
[8] 陈吼. 依维莫司自微乳化释药系统的制备及质量评价[J].医药导报,2017,36(5):544-548.
[本文引用:1]
[9] 李海春,王敏,谢鹏,等.塞来昔布自微乳化释药系统的制备及体内外评价[J].医药导报,2017,36(5):549-553.
[本文引用:1]
[10] 夏铮铮,范琪,杨成刚,等.HPLC法测定青蒿琥酯及其片剂的含量[J].药物分析杂志,2006,26(5):656-658.
[本文引用:1]
[11] 张洪,闫士君,张福明.高效液相色谱法测定青蒿琥酯的含量[J].中国医院药学杂志,2012,32(1):65-67.
目的：建立高效液相色谱法，以青蒿素为内标测定青蒿琥酯的含量。方法：采用HPLC法，色谱柱：ASM-Kromasil—C18液相色谱柱（200mm×4．6mm，5μm），流动相：乙腈-醋酸缓冲液（60：40），检测波长：205nm，流速：1mL·min^-1，柱温：30℃，进样量：20μL，内标物：青蒿素。结果：HPLC法的标准曲线线性范围为0．1～1．6mg·mL^-1（r=0．9995），线性方程为A=1．714C＋0．062，平均加样回收率为99．86％（RSD为1．39％，n=9）结论：该法准确、简便、重现性好，可以用于青蒿琥酯原料药的含量测定。
URL    
[本文引用:1]
[12] NGUYEN D H,AMPOL M,KORBTHAM S,et al.Develo-pment of phyllanthin-loaded self-microemulsifying drug delivery system for oral bioavailability enhancement[J].Drug Devel Industr Pharm,2015,41(2):207-217.
(2015). Development of phyllanthin-loaded self-microemulsifying drug delivery system for oral bioavailability enhancement. Drug Development and Industrial Pharmacy: Vol. 41, No. 2, pp. 207-217. doi: 10.3109/03639045.2013.858732
DOI:10.3109/03639045.2013.858732      PMID:24237327      URL    
[本文引用:1]
[13] 郭梦翔,胡海燕,唐仕波,等.银杏内酯B自微乳化释药系统的制备及质量评价[J].中国中药杂志,2010,35(22):2967-2971.
目的:制备银杏内酯B自微乳化制剂,并对其质量进行评价.方法:通过高效液相-电喷雾-质谱(HPLC-ESI-Ms)方法测定银杏内酯B在不同油相、表面活性剂、助表面活性剂中的溶解度,结合伪三元相图,筛选银杏内酯B自微乳化制剂的处方.考察药物含量和分散介质对制剂稳定性的影响以及经0.1 mol·L-1HCl稀释后形成微乳的形态、粒径和成乳稳定性.结果:自微乳化介质处方为油酸乙酯-(cremophor EL-大豆磷脂-无水乙醇,40:60),其中cremophor EL-大豆磷脂-无水乙醇(4:1:2),GB的载药量为2.5%.乳化介质(H2O和0.1 mol·L-1HCl)对制剂自微乳化效率影响不大.银杏内酯B自微乳制剂经0.1 mol·L-1HCl稀释100倍后透射电镜下呈圆球形,分布均匀,粒径(41.6±1.11)nm,自微乳化时间大约在2 min.8 h内制剂稳定,粒径变化不大,无药物析出.结论:银杏内酯B自微乳化制剂制备简单,质量稳定,可以显著提高药物的溶解度.
DOI:10.4268/cjcmm20102207      URL    
[本文引用:1]
[14] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:12.
[本文引用:1]
[15] 欧晓霞,汪征明,封亮.熊果酸自微乳的制备及其生物利用度[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(1):36-39.
目的：制备熊果酸自微乳给药体系,建立HPLC-MS方法研究熊果酸自微乳的生物利用度和药物动力学。方法：以OP乳化剂、吐温-20、异丙醇和油酸制备熊果酸自微乳给药系统,并考察其稳定性、粒径和Zeta电位。通过口服给药,研究其体内的生物利用度和药物动力学。结果：所制备的熊果酸自微乳在1个月内稳定,平均粒径32.74 nm,Zeta电位4.21 mV。自微乳的相对生物利用度326.5%;缓释片的相对生物利用度256.6%;相对与缓释片,自微乳的相对生物利用度为127.2%。结论：所制备的自微乳给药系统能提高熊果酸的生物利用度。
DOI:10.3969/j.issn.1005-9903.2012.01.010      URL    
[本文引用:1]
[16] 刘翠,张涛,黄华,等.度他雄胺自微乳给药系统的制备和体外评价[J].中国医药工业杂志,2013,44(4):357-361.
[本文引用:1]
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柯云玲
潘金明
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PAN Jinming
XI Jianjun
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