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医药导报
医药导报, 2017, 36(7): 774-777
doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2017.07.013
珠卡赛辛乳膏制备工艺*
Preparation Technology of Zucapsaicin Cream
白光耀, 塔娜, 熊慧, 梅之南
中南民族大学药学院,武汉 430074
BAI Guangyao,, TA Na, XIONG Hui, MEI Zhinan,
College of Pharmacy,South Central University for Nationalities,Wuhan 430074,China
通信作者 梅之南(1970-),男,湖北麻城人,教授,博士,研究方向:民族药物药效物质基础及创新药物。电话:027-67843713,E-mail:meizhinan@163.com。

作者简介 白光耀(1989-),男,蒙古族,河北承德人,硕士,研究方向:药物合成及制剂。E-mail:15072350489@163.com。
基金资助: 湖北省高端人才计划资助项目(RBZY13001)
中图分类号: R943     文献标识码: B     文章编号: 1004-0781(2017)07-0774-04
摘要:

目的 筛选珠卡赛辛乳膏制备工艺,并与Zuacta乳膏进行对比。方法 以耐寒稳定性、耐热稳定性、离心稳定性、外观作为指标,对处方配比进行筛选,通过正交实验对工艺条件进行优化。采用改良Franz扩散池法,考察自制品与Zuacta乳膏的体外透皮吸收情况。结果 优化后的工艺条件为,乳化温度70 ℃、搅拌速度2 000 r·min-1,乳化时间30 min,主药加入油相中。自制品与Zuacta乳膏外观、透过速率以及累积透过率差异无统计学意义。结论 所制备的珠卡赛辛乳膏处方配方合理,质量稳定,体外透皮效果好,与Zuacta乳膏基本一致。
关键词: 珠卡赛辛乳膏 ; Zuacta乳膏 ; 制备工艺 ; Franz扩散池

Abstract:

Objective To select the optimal preparation technology of zucapsaicin cream and compare it with zuacta cream. Methods Cold stability,thermal stability,centrifugal stability,and appearance were used as indicators to select the ratio of prescription.In this study preparation technology was optimize by using orthogonal experiment method,and transdermal absorption of the homemade zucapsaicin cream and zucata cream were investigated by employing modified Franz diffusion pool. Results The optimized preparation technology was as follows,emulsifying temperature was maintained at 70 ℃,the stirring speed was set at 2 000 r·min-1,the main medicine was added into the oil phase,emulsifying time was 30 min.The results showed that there was no significant difference between the homemade zucapsaicin cream and the reference Zuacta cream. Conclusion The homemade zucapsaicin were tested to have reasonable ratio of prescription,stability,and definite transdermal effect,which was basically in accordance with zuacta cream.
Key words: Zucapsaicin cream ; Zuacta cream ; Preparation technology ; Franz diffusion pool

辣椒素(capsaicin)是辣椒中主要呈辣物质,具有镇痛、抗炎、抗氧化等作用,主要用于治疗肌肉、关节及神经疼痛,但在给药初期用药部位易出现皮肤烧灼、刺痛感及潮红等不良反应,限制临床应用[1]。珠卡赛辛(zucapsaicin)是人工合成的顺式辣椒素,与Capsaicin相比,表现出更强的镇痛活性及更低的刺激性[2],具有广阔的应用前景。WINSTON研发了珠卡赛辛乳膏(商品名:Zuacta),并由Sanofi-Aventis公司在美国及加拿大等国家生产销售。笔者尚未见该品种在国内上市。鉴于此,笔者制备了珠卡赛辛乳膏,并对其质量进行评价,现报道如下。

1 仪器与试药
1.1 仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪,RAJ-6A型药物透皮吸收扩散实验仪器(上海黄海科技有限公司)。

1.2 试剂

鲸蜡醇(北京百灵威科技有限公司,批号:LTC0L05,含量:98%);凡士林(北京百灵威科技有限公司,批号:L7C0L05,含量:98%);肉豆蔻酸异丙酯(北京百灵威科技有限公司,批号:LF70O36,含量:96%);单硬脂酸甘油酯(北京百灵威科技有限公司,批号:LE40Q145,含量:98%);PEG-100单硬脂酸甘油酯(上海梯希爱化成工业发展有限公司,批号:SD7CB-QI,含量:98%);苯甲醇(北京百灵威科技有限公司,批号:LK10Q72,含量:99.5%);山梨醇(北京百灵威科技有限公司,批号:LG90L28,含量:98%);乙腈、甲醇(美国Tedia,含量:99.9%);水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

珠卡赛辛原料药为本实验室自制,经MS、1H-NMR和13C-NMR确定结构,高效液相色谱法(HPLC)峰面积归一化法测得纯度>99.5%。Zuacta乳膏(Sanofi-Aventis Canada Inc,批号:FLBF)。

1.3 实验动物

无特定病原体(SPF)级Wistar大鼠,体质量180~200 g,雄性,合格证号:42000600014921,实验动物生产许可证号:SCXK(鄂)2015-0018,购于湖北省实验动物研究中心。

2 方法与结果
2.1 基质处方

在预实验的基础上结合文献[3],初步确定以下5个基质处方。通过实验对这5个处方进行筛选,处方成分及用量见表1。将珠卡赛辛原料药磨成细粉,精密称取45 mg,苯甲醇溶解,加入基质。

表1 基质处方
Tab.1 Formulation for the matrix g
处方号 鲸蜡醇 凡士林 肉豆蔻酸
异丙酯		 单硬脂酸
甘油酯		 PEG-100
硬脂酸甘油酯
1 3.0 1.2 3.0 1.8 2.4
2 1.2 2.4 6.0 1.8 3.0
3 2.4 9.0 3.0 1.2 1.8
4 3.0 12.0 4.0 2.4 3.0
5 1.2 6.0 3.0 3.0 3.0
处方号 苯甲醇 山梨醇 超纯水 总计
1 0.06 3.0 45.54 60
2 0.06 6.0 39.54 60
3 0.06 9.0 33.54 60
4 0.06 6.0 29.54 60
5 0.06 6.0 37.74 60

表1 基质处方

Tab.1 Formulation for the matrix g

2.2 评分标准

以外观(光泽度、细腻度、涂布性)、离心实验、耐寒耐热实验作为乳膏质量评价的指标,采用综合加权评分法对各个基质进行评分[4]。综合评分=外观评价得分×30%+离心实验得分×30%+耐寒实验得分×20%+耐热实验得分×20%。评分标准见表2。

表2 乳膏评分标准
Tab.2 Evaluation criteria for cream
乳膏实验结果 得分 乳膏实验结果 得分
外观 有粗颗粒 10
有光泽 30 离心稳定性实验
光泽中度 20 无油水分离 100
光泽灰暗 10 部分无油水分离 50
易涂抹 30 全部油水分离 25
涂抹有涩感 20 耐寒耐热稳定性
涂抹不易化开 10 无油水分离 100
均匀细腻 40 部分油水分离 50
有小颗粒 25 全部油水分离 25

表2 乳膏评分标准

Tab.2 Evaluation criteria for cream

2.3 基质的制备方法

将水相、油相分别加热溶化,两相均保持温度为70~80 ℃;趁热将油相缓慢加入水相,转速800~1 000 r·min-1,搅拌20 min使乳化完全,即得乳膏基质。按照上述方法制备“2.1”项5个处方,并按照“2.2”项评分标准对5个基质进行评分。结果显示3号基质质量最优。因此,最佳处方配比为珠卡赛辛45 mg,鲸蜡醇2.4 g,凡士林9.0 g,单硬脂酸甘油酯1.2 g,肉豆蔻酸异丙酯3.0 g,PEG-100单硬脂酸甘油酯1.8 g,苯甲醇0.06 g,山梨醇9.0 g,加纯化水制成60 g。

2.4 正交实验优化工艺条件

通过单因素实验以及文献[5]报道,设计4因素3水平的正交实验,以期筛选出最佳乳化条件。正交实验及其结果见表3~5。

表3 因素水平
Tab.3 Factors and levels
水平 乳化温度
(A)/℃		 乳化时间
(B)/min		 搅拌速度(C)/
(r·min-1)		 药物加入
方式(D)
1 60 10 1 000 油相
2 70 20 1 500 水相
3 80 30 2 000 两相之间

表3 因素水平

Tab.3 Factors and levels

表4 正交实验结果
Tab.4 Results of orthogonal test
实验号 乳化温度
(A)/℃		 乳化时间
(B)/min		 搅拌速度(C)/
(r·min-1)		 主药加
入方式(D)		 得分
第1次 第2次 总和
1 60 10 1 000 油相 54.5 55.5 110.0
2 60 20 1 500 水相 75.5 72.5 148.0
3 60 30 2 000 两相之间 90.0 90.0 180.0
4 70 10 1 500 两相之间 77.0 75.5 152.5
5 70 20 2 000 油相 82.5 80.5 163.0
6 70 30 1 000 水相 75.5 77.0 152.5
7 80 10 2 000 水相 72.5 75.5 148.0
8 80 20 1 000 两相之间 60.5 62.0 122.5
9 80 30 1 500 油相 90.0 92.5 182.5
K1 438 410.5 385 455.5
K2 468 433.5 483 448.5
K3 453 515 491 455

表4 正交实验结果

Tab.4 Results of orthogonal test

表5 正交实验结果方差分析
Tab.5 Variance analysis of orthogonal test
因素 离差
平方和		 自由度 均方 F P
乳化温度(A) 75.5 2 37.75 18.88 >0.05
乳化时间(B) 1 005.08 2 502.54 251.27 <0.01
搅拌速度(C) 1 161.33 2 580.67 290.33 <0.01
药物加入方式(D) 5.08 2 2.54 1.27
误差 18.00 9 2

F1-0.05(2,9)=19.4,F1-0.01(2,9)=99.4

F1-0.05(2,9)=19.4,F1-0.01(2,9)=99.4

表5 正交实验结果方差分析

Tab.5 Variance analysis of orthogonal test

方差分析表明,乳化时间和搅拌速度对乳膏质量评价影响差异有统计学意义(P<0.01),而主药加入方式及乳化温度差异无统计学意义。结合直观分析和方差分析最终得出乳化的工艺条件为C3B3A2D3,即乳化时间30 min,搅拌速度2 000 r·min-1,乳化温度70 ℃,主药加入油相。

2.5 验证性试验

按照“2.4”项优化乳化出的工艺条件平行制备3组珠卡赛辛乳膏,按照“2.2”项评分标准对3组乳膏评分,得综合评分的均值为99.0,RSD为1.75%,证明处方配比和乳化条件优化稳定可行。

2.6 体外透皮吸收试验

2.6.1 大鼠离体皮肤的制备 将3只大鼠处死,立即用电动剃须刀刮去大鼠腹部毛,剥离皮下血管、脂肪以及筋膜,0.9%氯化钠溶液将大鼠皮肤冲洗干净,0.9%氯化钠溶液浸泡约30 min,取出,滤纸吸干备用。

2.6.2 方法 采用改良Franz扩散池,将离体大鼠皮肤固定于接收室与供给室之间,角质层面朝上,将珠卡赛辛乳膏1.0 g均匀涂抹在角质层,接收室内注入接收液至满,排尽气泡,使得接收液与大鼠皮肤完全充分接触,接收液为乙醇-0.9%氯化钠溶液(30:70),透皮吸收温度设置为(37.0±0.1) ℃,搅拌速度为200 r·min-1。实验过程中分别于1,2,4,6,8,10,12 h从接收室吸取1 mL溶液,并加入相同量接收液,并排除接收室内气泡。取出的溶液用孔径0.45 μm滤膜滤过。精密吸取20 μL,注入高效液相色谱仪,测出峰面积,计算相应珠卡赛辛含量(含量测定方法将另文报道),并计算累积透过量(Q)以及累积透过率(Q%)[6]。

2.6.3 结果 笔者在本实验中使用Zuacta乳膏作为对照乳膏来考察自制珠卡赛辛乳膏体外透皮吸收情况。所得累积透过率(Q%)结果见表6。

表6 自制品和对照品累积透过率
Tab.6 Accumulated permeation rate of homemade and reference cream %,x¯±s,n=3
时间/h 自制乳膏 对照乳膏
1 14.1±0.4 14.2±0.3
2 21.7±1.1 22.4±1.0
4 34.9±1.8 35.8±1.6
6 50.8±1.1 49.7±2.2
8 65.4±2.3 62.2±3.2
10 75.3±2.2 74.0±1.2
12 85.7±1.7 84.5±1.8

表6 自制品和对照品累积透过率

Tab.6 Accumulated permeation rate of homemade and reference cream %,x¯±s,n=3

使用SPSS 18.0版软件对自制品和对照品各时间点累积透过率进行t检验,结果表明在12 h内各时间点自制品和对照品在累积透过率上没有统计学差异。将累积透过量(Q)分别对时间t进行回归分析,得到相应的渗透动力学方程,所得到的回归方程的斜率即为各自的渗透速率。实验结果见表7。

表7 自制品和对照品渗透动力学方程
Tab.7 Osmotic dynamic equation of homemade and reference cream
药品 渗透动力学方程 J/
[μg·(cm2)-1·h-1]		 r
对照品 Q=18.127t+27.232 18.127 0.998 4
自制品 Q=18.792t+25.234 18.792 0.997 0

表7 自制品和对照品渗透动力学方程

Tab.7 Osmotic dynamic equation of homemade and reference cream

在12 h内,自制品较对照品体外累积透过量相似或者略高,由渗透动力学方程得知二者平均渗透速率分别为18.792和18.127 μg·cm-2·h-1。透皮吸收实验结束后,刮去皮肤表面剩余膏剂,用接收液将皮肤冲洗干净,剪碎,研磨。转移至50 mL量瓶中,超声提取25 min,加接收液定容至刻度。用孔径0.45 μm滤膜滤过,取续滤液,精密吸取20 μL,注入高效液相色谱仪,计算相应的珠卡赛辛含量,通过计算得出二者在离体大鼠皮内滞留率分别为(4.81±0.14)%,(4.92±0.18)%,通过SPSS18.0版软件进行t检验。结果二者在离体大鼠皮内滞留率差异无统计学意义。

3 讨论

笔者参照已上市的Zuacta乳膏,对自制乳膏的处方配比及工艺条件进行研究。由于珠卡赛辛不溶于冷水,所以把主药的加入方式也作为一项指标,考察主药的加入是否影响乳膏细腻度及涂展性。研究发现珠卡赛辛透皮速率很快,所以将之前24 h的体外透皮吸收实验缩短为12 h。由于珠卡赛辛水溶性差,所以接收室内接收液要适当增加乙醇比例,但又不能对皮肤造成影响,对几组配比进行筛选最终确定乙醇-0.9%氯化钠溶液的比例为30:70。

The authors have declared that no competing interests exist.
参考文献
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Neuropathic pain (NP) is a chronic disease that stems from a primary lesion or dysfunction of the central or peripheral nervous system. Zucapsaicin is a synthetic cis isomer of natural capsaicin that has shown therapeutic efficacy in pain accompanying osteoarthritis of the knee. It is also currently under investigation for the relief of severe pain in adults suffering from NP.The authors provide an overview of the pharmacological properties of zucapsaicin based on available data from both preclinical and clinical trials. They also discuss its mechanism of action.The mechanism of action and clinical indications of zucapsaicin are similar to that of its naturally occurring isomer, capsaicin. However, in contrast to capsaicin, zucapsaicin is better tolerated. In the future, zucapsaicin could become a valuable drug for treating pain relief. Indeed, it is possible, in addition to providing NP relief, that it may have a use in treating osteoarthritic pain, headaches and pain that accompany intestinal diseases.
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[本文引用:1]
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