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医药导报
HERALD OF MEDICINE, 2018, 37(4): 434-437
doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2018.04.006
壮医方白花丹消蛊汤对食蟹猴肝纤维化的干预作用及机制
Effect and Mechanism of Zhuang Medicine Baihuadan Xiaogu Decoction on Treating Experimental Liver Fibrosis in Macaca Fascicularis
赵湘培1,2,, 陈少锋2, 黄卫宣3, 苏华4, 阳明3, 余胜民2, 覃子瑞3, 钟鸣2,4,
1.中央民族大学中国少数民族传统医学研究院,北京 100081
2.广西壮族自治区民族医药研究院,南宁 530001
3.广西防城港市常春生物技术有限公司,防城港 538000
4.广西中医药研究院,南宁 530012
ZHAO Xiangpei1,2,, CHEN Shaofeng2, HUANG Weixuan3, SU Hua4, YANG Ming3, YU Shengmin2, QIN Zirui3, ZHOGN Min2,4,
1.Institute of Chinese Minority Traditional Medicine, Minzu University of China, Beijing 100081,China
2.Guangxi Institute of Minority Medical, Nanning 530001,China
3.Guangxi Fangchenggang Evergreen Biological Technology Development co., LTD, Fangchenggang 538000,China
4.Guangxi Institute of Chinese Medicine and Pharmaceutical Science, Nanning 530012,China
通信作者 钟鸣(1964-),男,广西南宁人,研究员,主要从事民族药药理学研究。电话:0771-3137645,E-mail:gxmyszm@126.com。

作者简介 赵湘培(1986-),女,广西南宁人,助理研究员,在读博士,主要从事民族药药理学研究。电话:0771-3137645,E-mail:zhaoxiangpei@126.com。

基金资助: 广西科学研究与技术开发计划课题(桂科能14123006-6)
中图分类号: R285.5;R657.31     文献标识码: A     文章编号: 1004-0781(2018)04-0434-04
摘要:

目的 研究壮医方白花丹消蛊汤对食蟹猴肝纤维化的干预作用及其机制。方法 将食蟹猴随机分为4组,除空白对照组外,其余各组每周2次皮下注射60%四氯化碳(CCI4)油剂0.5 mL·kg-1,同时辅以高脂饲料喂养,建立食蟹猴肝纤维化模型。造模6个月后,各组相应给药,白花丹消蛊汤小、大剂量组分别灌胃给予1.0,4.0 g·kg-1(按处方生药量计算)汤药,空白对照组和模型对照组给予等体积纯化水。给药2个月后,静脉采集食蟹猴血液样本,检测各组食蟹猴血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(T-BiL)含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测食蟹猴血清中转化生长因子-β(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平,免疫组化观察肝组织TGF-β1 的表达情况。结果 与模型对照组比较,白花丹消蛊汤能降低肝纤维化食蟹猴血清ALT、AST、T-BiL含量,能降低其血清中α-SMA及相关基质金属蛋白酶水平,能调控肝纤维化食蟹猴肝组织TGF-β1的升高。结论 壮医方白花丹消蛊汤具有抗肝纤维化作用,降低TGF-β1、α-SMA表达、调节肝脏细胞外基质的代谢是其发挥抗肝纤维化作用的部分机制。
关键词: 白花丹消蛊汤 ; 壮医方药 ; 肝纤维化/食蟹猴

Abstract:

Objective To investigate the effect and mechanism of Baihuadan Xiaogu decoction (BHD) in liver fibrosis. Methods Macaca fascicularis were divided into four groups: the normal control group, the model control group, the BHD-L group and BHD-H group.Hepatic fibrosis models establish by CCl4 (0.5 mL·kg-1) twice a week for 6 month, at the same time, high fat diet was feed.After six months, BHD-L and BHD-H (1.0,4.0 g·kg-1) were administered orally to groups respectively, whereas the normal control and model control groups were orally administered with pure water.Two months later, the blood sample was collected for the examination of alanine aminotransferase (ALT), glutamic oxalacetic transaminase (AST), and total bilirubin (T-BiL).The contents of transforming growth factor-β (TGF-β), alpha-smooth muscle actin (α-SMA), matrix metalloprotein (MMP-2) and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) in serum were analyzed by ELISA assay.The expression of TGF-β1 in liver biopsy specimens was detected by immunohistochemical staining. Results Compared with model control group, both BHD groups can reduce the levels of Macaca fascicularis serum ALT, AST, T-BiL.It can reduce the levels of TGF-β1, α-SMA and related matrix metalloprotein, regulatory effects on the expression of TGF-β1. Conclusion BHD can prevent liver fibrosis in Macaca fascicularis by reducing the level of TGF-β1, α-SMA and regulate the liver extracellular matrix metabolism.
Key words: decoction ; Traditional Zhuang medicine ; Liver fibrosis/macaca fascicularis

肝纤维化是肝硬化的前趋阶段,具有可逆转的特点,发病机制非常复杂[1]。以往的啮齿类肝纤维化模型,虽然能模拟肝纤维化临床特征,但都因其与人类遗传学上的相似性差距较大,从疾病发生的种属性、疾病的诊断、疾病进展的了解及临床药物的筛选上均不能满足要求,得出的结论难以完全推广至人类,从而无法满足研究的需要,限制肝纤维化的研究[2]。因此,从人类近缘的动物模型上找到突破口具有重要的现实意义和必要性。食蟹猴属于哺乳纲灵长目猕猴属,是目前国内外使用量最大的非人灵长类实验动物。食蟹猴无论是在生理学、遗传学还是生物学特性上与人类都极相似,研究资料表明其许多疾病的机制和所表现出的临床症状也与人类极为相似,建立非人灵长类实验动物食蟹猴肝纤维化模型,为开展肝纤维化的发病进展、发病机制及抗肝纤维化药物研究工作,提供良好的研究工具[3]。目前广西实验食蟹猴的存栏量和生产量均居全国首位,本课题组利用广西独特的食蟹猴资源优势,采用四氯化碳(CCl4)复合高脂饮食诱导法建立食蟹猴肝纤维化模型,探讨壮医方白花丹消蛊汤对食蟹猴肝纤维化的干预作用及部分机制,为该方剂的临床使用提供实验依据。

1 材料与方法
1.1 实验动物

20只雄性食蟹猴来自于广西防城港市常春生物技术公司,年龄为2~5周岁,体质量 4~6 kg。所有试验用食蟹猴饲养于广西防城港常春生物技术公司清洁级动物房,实验动物使用许可证号:SYXK(桂)2015-0001。动物均得到了妥善保护和关怀,并且得到动物伦理委员会的许可。

1.2 药物与试剂

白花丹消蛊汤由白花丹、排钱草、车前草、岗梅根、酸藤子、五爪金龙6味壮药组成。称取上述白花丹消蛊汤处方药材(上述药材均为课题组成员采集,并由广西民族医药研究院蓝日春主任药师鉴定)共13 kg,加水10~12倍量,室温浸泡1 h,加热煮沸1 h,滤过。以上方法共提取2次,合并滤液,浓缩到5 L。按照成人剂量65 g/70 kg换算,食蟹猴剂量应为0.975 1 g·kg-1·d-1。结合预实验结果,本次实验设定白花丹消蛊汤小剂量组给药剂量为 1.0 g·kg-1·d-1、大剂量组为 4.0 g·kg-1·d-1。丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(T-BiL)均为中国深圳迈瑞试剂盒,生产批号分别为150116012,150216009,150616014。TGF-β1、α-SMA、MMP-2、TIMP-1 ELISA试剂盒均为R&D公司产品,生产批号均为 201602。

1.3 主要仪器

BS-350E型全自动生化分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司),18G L-130mm型肝穿刺活检枪(日本TSK株式会社),EG1150H型石蜡包埋机、RM2255型组织切片机、DM2500型光学显微镜均为Leica公司产品,V4.6高清晰度彩色医学图文分析系统(LAS公司),高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂),Multislcan MK3型酶标仪(赛默飞世尔上海仪器有限公司)。

1.4 肝纤维化食蟹猴模型的建立

采用 CCl4 复合高脂饮食诱导法建立食蟹猴肝纤维化模型[3,4]。具体造模方法如下:选取雄性食蟹猴20只,实验前均采集动物静脉血液,随机抽取3只作为空白对照组,除空白对照组外,其余动物均以0.5 mL·kg-1 皮下注射CCl4油剂(60% CCl4 橄榄油剂)造模,每周2次,同时辅以高脂饲料(配方:基础饲料69.3%、猪油10%、甲硫氧嘧啶0.2%、蛋黄粉10%、胆固醇10%、胆酸钠0.5%)。造模前及造模后每隔3个月,所有动物进行快速穿刺肝活检并采集其静脉血液,根据相关血液指标及肝组织苏木精-伊红(HE)、Masson染色结果判定成模情况[5,6,7,8]。造模6个月后,动物肝穿组织均出现肝小叶结构破坏、纤维组织增生、胶原纤维沉积等现象,判定造模成功。造模的17只食蟹猴中,12只被判定造模成功。

1.5 分组及给药

未造模的3只食蟹猴即为空白对照组,成模的食蟹猴按照肝纤维化程度的轻重分级,再随机分为3组,即模型对照组3只、白花丹消蛊汤小剂量组(BHD-L)3只、白花丹消蛊汤大剂量组(BHD-H)3 只。空白对照组和模型对照组灌胃给予等体积纯化水,汤剂组分别给予相应的药物剂量。所有剂量组均给药每天1次,根据体质量连续给药2个月。

1.6 一般情况记录

从造模开始,每1 个月记录实验动物体质量一次,根据体质量给予造模剂及相应药液,观察造模剂和药物对食蟹猴一般情况的影响。

1.7 血清学检测

于末次给药后采集外周血。采血前1天晚21:00 开始禁食不禁水,次日上午9:00 采集外周血5 mL,于常温下放置2 h,3 000 r·min-1(r=3 cm)分离血清。全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST、T-BiL水平;按照ELISA试剂盒说明书步骤操作,测定TGF-β1、α-SMA、MMP-2、TIMP-1水平。

1.8 肝组织TGF-β1 免疫组织化学染色

采集末次给药后肝穿组织标本,多聚甲醛溶液中浸泡固定,常规石蜡包埋,切片厚5 μm。采用链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC法)对TGF-β1蛋白表达进行检测。一抗分别采用TGF-β1兔抗人多克隆抗体,苏木精进行复染,以PBS代替一抗作为阴性对照,棕色颗粒为阳性表达。免疫组化结果分析,根据细胞染色程度及染色细胞百分率进行分析评定:基本不着色为0分,着色淡黄为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;着色细胞占计数细胞百分率:5%以下为0分,>5%~25%为1分,>25%~50%为2分,>50%为3分。显色指数=整张切片染色程度得分×染色细胞百分率得分[9,10]。

1.9 统计学方法

采用SPSS19.0版软件统计学分析。结果采用均数±标准差(\(\overline{x}\)±s)表示,所有的统计进行方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 对肝纤维化食蟹猴体质量的影响

造模及药物干预对肝纤维化食蟹猴体质量的影响:随着造模时间的延长,食蟹猴食欲变差,活动减少,体质量增长较空白对照组缓慢,甚至体质量逐渐减轻。造模6个月后,从第7个月开始白花丹消蛊汤干预,药物组食蟹猴的体质量有所回升,但仍低于空白对照组。

2.2 对肝纤维化食蟹猴肝功能的影响

ALT和AST是反映肝细胞受损的指标,ALT和AST水平升高反映肝细胞受损,其增高程度越大,病变越严重[11]。由表1可见,与空白对照组比较,模型对照组食蟹猴血清ALT、T-BiL水平显著性升高(P<0.05或 P<0.01),AST水平高于空白对照组,但差异无统计学意义。应用白花丹消蛊汤治疗后,肝纤维化食蟹猴血清ALT水平(P<0.05)及T-BiL水平(P<0.05)显著降低。

表1 4组食蟹猴血清肝功能相关指标的比较
Tab.1 Comparison of serum index of liver function among four groups of Macaca fascicularis \(\overline{x}\)±s,n=3
组别 ALT AST T-BiL/
(μmol·L-1)
(U·L-1)
空白对照组 49.07±2.40 55.53±5.63 0.43±0.15
模型对照组 85.43±11.29*1 67.40±9.67 2.17±0.15*2
BHD-L组 55.63±5.83*3 67.97±7.29 1.97±0.54*2
BHD-H组 64.56±9.65 68.70±6.46 1.47±0.22*3

Compared with blank control group,*1P<0.05,*2P<0.01;compared with model control group,*3P<0.05

与空白对照组比较,*1P<0.05,*2P<0.01;与模型对照组比较,*3P<0.05

表1 4组食蟹猴血清肝功能相关指标的比较

Tab.1 Comparison of serum index of liver function among four groups of Macaca fascicularis \(\overline{x}\)±s,n=3

2.3 对肝纤维化食蟹猴血清TGF-β1、α-SMA、MMP-2、TIMP-2含量的影响

结果显示,与空白对照组比较,肝纤维化食蟹猴血清 TGF-β1、α-SMA、MMP-2、TIMP-1 含量均有所升高,白花丹消蛊汤能不同程度降低 TGF-β1、α-SMA、MMP-2、TIMP-1 水平升高。见表2。

表2 4组食蟹猴血清 TGF-β1、α-SMA、MMP-2、TIMP-1 含量的比较
Tab.2 Comparion of the serum content of TGF-β1,α-SMA,MMP-2 and TIMP-1 among four groups of Macaca fascicularis \(\overline{x}\)±s,n=3
组别 TGF-β1 α-SMA
空白对照组 12.22±0.22 24.37±0.30
模型对照组 17.99±5.40*1 25.68±1.94*1
BHD-L组 13.94±0.97*3 27.08±1.49
BHD-H组 12.36±0.38*3 24.09±0.77*3
组别 MMP-2 TIMP-1
空白对照组 12.54±0.25 123.02±4.07
模型对照组 17.55±3.69*1 159.42±30.53*2
BHD-L组 14.60±10.58*3 131.37±2.05*3
BHD-H组 13.07±0.44*3 121.26±4.58*3

Compared with blank control group,*1P<0.05,*2P<0.01;compared with model control group,*3P<0.05

与空白对照组比较,*1P<0.05,*2P<0.01;与模型对照组比较,*3P<0.05

表2 4组食蟹猴血清 TGF-β1、α-SMA、MMP-2、TIMP-1 含量的比较

Tab.2 Comparion of the serum content of TGF-β1,α-SMA,MMP-2 and TIMP-1 among four groups of Macaca fascicularis \(\overline{x}\)±s,n=3

2.4 对肝纤维化食蟹猴肝组织 TGF-β1 表达的影响

TGF-β1蛋白在肝纤维化食蟹猴肝组织中广泛分布,其表达以肝细胞细胞质为主,着色呈均匀的浅棕色至深棕色。空白对照组肝组织仅微弱表达TGF-β1(1.00±0.33),显色极淡,计分较模型对照组显著降低;模型对照组肝组织细胞染色程度为棕褐色(5.67±2.03),阳性染色分布于变性的肝细胞、纤维化区等处,较空白对照组TGF-β1阳性信号明显增强;BHD-L组肝组织细胞染色程度棕黄色(4.67±0.67),着色细胞百分率6%~25%;BHD-H组肝组织细胞染色程度棕褐色(3.33±0.67),着色细胞百分率>51%,TGF-β1蛋白表达明显高于空白对照组,而低于模型对照组。见图1。


图1 4组食蟹猴 TGF-β1 表达情况(×20)
A.空白对照组;B.模型对照组;C.BHDL 组;D.BHDH组

Fig.1 TGF-β1 expression in four groups of Macaca fascicularis(×20)
A.blank control group; B. model control group; C. BHDL group; D. BHDH group

3 讨论

依据壮医理论,方中白花丹是通调龙路要药(龙路与火路是壮医对维持人体生机和反映疾病动态的两条极为重要的内封闭通路的命名,龙是制水的,龙路在人体内即是血液的通道,其功能主要是为内脏骨肉输送营养;火为触发之物,其性迅速,感之灼热,火路在人体内为传感之道),具有祛风毒、除湿毒、散瘀止痛等功用;排钱草是民间壮医治疗腹部结块的良药,具有祛风毒、清热毒、通龙路火路等功用[12]。二药合用,通调龙路、除湿毒蛊毒之功效更著,共为主药、母药。车前草、岗梅根、酸藤子、五爪金龙等,加强除湿毒、清热毒之功,是为帮药、带药。全方主、帮、带三部分药物配合,药力雄厚,入经达灶,疗效显著[13]。

笔者选用与人类亲缘关系较近、适合笼养、体型较小、存栏量较高的实验动物食蟹猴,运用化学损伤混合高脂饮食方法建立能模拟人类肝纤维化发病特点的诱导型食蟹猴肝纤维化模型[14,15,16,17]。考虑时间成本及人工成本,本次造模周期为8个月,造模前、造模后每3个月采集动物血液及快速肝穿刺活检,判定成模情况。造模6个月后,大部分动物均能成模。由于化学试剂的毒性,造模动物均出现不同程度的体质量降低现象。总体来说,CCl4 诱导混合高脂饮食方法建立食蟹猴肝纤维化模型是可靠的和可行的。

本次研究结果证明壮医方白花丹消蛊汤可改善CCl4 诱导的食蟹猴纤维化。其抗纤维化作用与减低TGF-β1、α-SMA表达、调节肝脏细胞外基质的代谢有关。本研究也为该方剂的临床应用提供更为可靠的实验依据。

The authors have declared that no competing interests exist.
参考文献
[1] GRESSNER A M,WEISKIRCHEN R.Modem pathogenetic concepts of liver fibrosis suggest stellate cells and TGF-beta as major players and the rapeutic targets[J].Cell Mol Med,2006,10(1):76-99.
Abstract Hepatic fibrosis is a scarring process that is associated with an increased and altered deposition of extracellular matrix in liver. At the cellular and molecular level, this progressive process is mainly characterized by cellular activation of hepatic stellate cells and aberrant activity of transforming growth factor-尾1 and its downstream cellular mediators. Although the cellular responses to this cytokine are complex, the signalling pathways of this pivotal cytokine during the fibrogenic response and its connection to other signal cascades are now understood in some detail. Based on the current advances in understanding the pleiotropic reactions during fibrogenesis, various inhibitors of transforming growth factor-尾 were developed and are now being investigated as potential drug candidates in experimental models of hepatic injury. Although it is too early to favour one of these antagonists for the treatment of hepatic fibrogenesis in human, the experimental results obtained yet provide stimulatory impulses for the development of an effective treatment of choice in the not too distant future. The present review summarises the actual knowledge on the pathogenesis of hepatic fibrogenesis, the role of transforming growth factor-尾 and its signalling pathways in promoting the fibrogenic response, and the therapeutic modalities that are presently in the spotlight of many investigations and are already on the way to take the plunge into clinical studies.
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肝纤维化是机体对各种病因引起的慢性肝损伤后的一种损伤修复反应，慢性肝病发展至最后将发展 成为肝硬化，肝硬化及其并发症威胁着全球居民的生命健康．在过去的几十年中，人们在肝纤维化的发生机制方面已经取得了很大的进展．HSC的激活是肝纤维化 发生过程中的一个重要事件，同时各类细胞因子与其对应受体：以及各类炎症细胞均在纤维化发展过程中扮演着重要的角色．在肝纤维化的诊断领域，除了传统的肝 活检技术，新型分子标志物以及影像学诊断技术均为临床诊断提供了准确的诊断依据．肝纤维化发生机制与诊断技术领域所取得的重大发现，给慢性肝病患者的纤维 化治疗以及康复带来了新的曙光．
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[3] 郭若涵,白彬.大型动物实验性肝纤维化及肝硬化模型的研究进展[J].世界华人消化杂志,2013,21(5):421-426.
肝纤维化作为一个动态的过程，涉及复杂的细胞和分子机制，所引起的慢性激活组织修复机制，遵循反复的肝组织损伤．无论病因，肝纤维化是慢性肝病的典型特征．进展中的肝纤维化可导致肝硬化、门静脉高压症，并可能最终导致肝癌肝衰竭的形成．肝纤维化，作为一个重大的全球卫生问题没有发现令人满意的治疗方式，所以阻断肝纤维化形成已成为慢性肝病治疗中的关键问题．肝纤维化及肝硬化的动物模型被用于研究纤维化的发生和评价抗纤维化治疗的潜能和可能性．本文重点讨论大型动物，兔、犬、猴、猪肝纤维化及肝硬化模型制作的研究进展．
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[4] 刘辉梅,庾俊雄,丁可,等.食蟹猴肝纤维化不同阶段对丙泊酚代谢的影响[J].实用医学杂志,2012,28(22):3700-3702.
目的:通过制备食蟹猴肝纤维化模型观察不同程度肝纤维化对丙泊酚 代谢的影响.方法:雄性食蟹猴14只,采用四氯化碳皮下注射、高脂饮食和饮酒精造模,于造模前、造模后第4、8、12、16周末将动物分为M0、M1、 M2、M3、M4组,以氯胺酮+东莨胆碱+咪达唑仑肌注麻醉动物30 min后输注丙泊酚8 mg/(kg·h)60 min,B超引导下肝脏穿刺,HPLC法测丙泊酚血浆浓度,记录苏醒时间.结果:S0、S1、S2、S3、S4期分别为14、12、10、8、7只,S4 期与S3、S2、S1、S0期比较,TP、A/G改变明显(P＜0.05)；食蟹猴苏醒时间在S4期比前四期明显延长(P＜0.05)；丙泊酚血浆浓度在 苏醒时无变化(P＞0.05),其余时间的血浆浓度随肝纤维化程度加重而增大,S4期与前4期比较明显增加(P＜0.05).结论:食蟹猴早期肝纤维化不 影响丙泊酚的代谢;但是肝纤维化S4期,丙泊酚的代谢减慢,停药后食蟹猴苏醒时间延长.
DOI:10.3969/j.issn.1006-5725.2012.22.009      URL    
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目的:观察归芍颗粒(Guishao granules,GG)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的SD大鼠肝纤维化的作用。方法:90只雄性SD大鼠,除正常组15只不造模外,其余大鼠背部ih CCl4(1 m L·kg-1),每周2次,共13周制备肝纤维化模型,随机分为5组,分别为模型组,GG低、中、高剂量组(3.5,7.0,14 g·kg-1)和秋水仙碱组(0.1 mg·kg-1),每组15只。13周后,测定大鼠肝脏指数;取部分肝组织做苏木素-伊红(HE)和马松三色(Masson)染色;取血测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;放射免疫法检测血清中透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)的水平;分光光度法检测大鼠肝脏中羟脯氨酸(Hyp)含量;免疫组化法检测肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝损伤,肝纤维化程度明显,肝纤维化大鼠血清中ALT,AST和HA,LN水平明显升高,肝组织中Hyp的含量明显升高,肝组织中α-SMA蛋白的表达明显升高(P0.05,P0.01);GG能明显改善大鼠肝损伤,减轻肝纤维化程度,同时显著降低肝纤维化大鼠血清中ALT,AST和HA,LN水平,GG能降低肝组织中Hyp的含量,抑制肝组织中α-SMA蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:GG可以明显改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能与GG抑制肝星状细胞活化有关。
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[8] 李季,叶军,薛冬英,等.桂枝茯苓丸抗大鼠肝纤维化作用及其机制研究[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(24):171-175.
Objective : Guizhi Fuling Wan which inhibited hepatic fibrosis in rats was observed and its possible mechanism of action was explored. Method : According to the random-number table, wistar rats of 60 were divided into control group of 8 (group A) and model group of 52.The control group was injected subcutaneously with normal saline by a dose of 3 mL·kg, model group was injected subcutaneously with 40% CCl to make rat liver fibrosis model by a dose of 3 mL·kg for the consecutive 6 weeks. And according to the random-number table again, model group rats were divided into the model group(group B) and the treatment group which comprised low dose (group C), middle dose (group D) and high dose (group E). Group A and group B were given normal saline by a dose of 9.0 mL·kg. Group C, group D and group E were given Guizhi Fuling Wan by the dose of 0.45, 0.9, 1.8 g·kg·drespectively, and CCl would be maintained subcutaneously during period of 4 weeks. After 4 weeks of treatment, general condition, body weight, liver and spleen weight and their coefficient of rats were compared in each group;rats of pathological changes in each group were determined by naked eye,light microscopy and electron microscopy,rspectively. The protein expression of α-SMA, TGF-, CTGF, Co-Ⅰ and Co-Ⅲ was detected by using immunohistochemical stains in each group. The mRNA genetic expression of α-SMA, TGF-,CTGF,Co-Ⅰ and Co-Ⅲ was detected by using Real-time quantitative PCR in each group. Result : Immunohistochemical stains and real-time quantitative PCR: In model group, protein and mRNA genetic expression of α-SMA,TGF-,CTGF, Co-Ⅰ and Co-Ⅲ was significantly increased in liver tissue (,CTGF,Co-Ⅰ and Co-Ⅲ in liver tissue of rats. Among the treatment group,group D and group E decreased mRNA genetic expression of α-SMA,Co-Ⅰ and Co-Ⅲ significantly (, CTGF obviously(, CTGF significantly(, CTGF, Co-Ⅰ and Co-Ⅲ gene and protein expression, have a good anti-liver fibrosis.
DOI:10.3969/j.issn.1005-9903.2011.24.049      URL    
[本文引用:1]
[9] 方承康,张一,王志芳,等.土鳖四逆散对肝纤维化大鼠 TGF-β1 和 a-SMA 表达及肝损伤的影响[J].辽宁中医药大学学报,2007,9(6):176-178.
目的:研究土鳖四逆散对肝纤维 化大鼠TGF-β1(转化生长因子)和α-SMA(平滑肌肌动蛋白)的表达及肝损伤的影响。方法:建立大鼠肝纤维化模型,随机分组治疗:土鳖四逆散组、秋 水仙碱组、模型组、空白组。每组10只,各组以药物分别处理8周后处死大鼠取材。结果:土鳖四逆散组TGF-β1和α-SMA的表达极少,秋水仙碱组的表 达稍强,而模型组TGF-β1和α-SMA的表达极强。土鳖四逆散组与模型组相比差异极显著。肝组织病理显示,土鳖四逆散组的肝小叶结构改变不大,模型组 肝内纤维结缔组织增生,假小叶形成;土鳖四逆散组血清转氨酶轻度升高,而秋水仙碱组与模型组血清转氨酶水平明显升高,三者比较有极显著性差异。结论:土鳖 四逆散具有抗肝纤维化及护肝作用,其机理与降低纤维化肝内的TGF-β1和α-SMA的表达有关。
DOI:10.3969/j.issn.1673-842X.2007.06.119      URL    
[本文引用:1]
[10] 吴国琳,陈玖,余国友,等.葛根素对酒精性肝损伤大鼠肝组织TGF-β1和a-SMA 表达的影响[J].中国中药杂志,2008,33(19):2245-2249.
目的:研究葛根素对酒精性肝损伤大鼠肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调控作用,探讨葛根素对酒精性肝损伤的防治机制。方法:将75只SD大鼠随机分成5组:正常组10只、模型组20只(乙醇等混合液,2次/d)、阳性对照组15只(乙醇等混合液+复方鳖甲软肝片,1 g.kg-1.d-1)、葛根素大剂量组15只(乙醇等混合液+葛根素片1.5 g.kg-1.d-1)、葛根素小剂量组15只(乙醇等混合液+葛根素片0.75 g.kg-1.d-1),8周后抽取股静脉血并处死,观察肝脏组织病理变化,检测肝组织TGF-β1和α-SMA的表达。结果:模型组大鼠肝组织病理变化和肝纤维化积分与其他各组相比都有显著性改变(P0.05);葛根素大、小剂量组肝组织TGF-β1和α-SMA表达水平明显低于模型组(P0.01);且葛根素大剂量组α-SMA水平明显低于对照组(P0.05),小剂量组与模型组相比无显著性差异。结论:酒精性肝损伤大鼠肝脏组织TGF-β1和α-SMA有不同程度的升高,葛根素对其有调控作用,葛根素对酒精性肝损伤有保护作用。
DOI:10.3321/j.issn:1001-5302.2008.19.024      URL    
[本文引用:1]
[11] 魏洁,李开济,骆广玲,等.姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝损伤的保护作用[J].吉林大学学报(医学版),2015,41(2):225-229.
<strong>目的:</strong>观察姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。<strong>方法:</strong>采用胆管结扎法诱导大鼠肝纤维化模型,将21大鼠随机分为假手术组(不建模,只给予生理盐水)、肝纤维化模型组(建模后给予生理盐水)和姜黄素给药组(建模后给予姜黄素400 mg&middot;kg<sup>-1</sup>),每组7只,给药2周后检测大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和总胆红素(Tbil) 水平;HE染色观察大鼠肝脏组织病理形态学;Massion染色观察大鼠肝脏组织胶原沉积;Western blotting法检测大鼠肝脏组织中转化生长因子&beta;1 (Tgf-&beta;1)和 &alpha;-平滑肌肌动蛋白(&alpha;-Sma)表达水平。<strong>结果:</strong>与假手术组比较,肝纤维化模型组和姜黄素给药组大鼠血清中ALT、AST活性和Tbil水平明显升高(<em>P</em>&lt;0.05);与肝纤维化模型组比较,姜黄素给药组大鼠血清中ALT、AST活性和Tbil水平明显降低 (<em>P</em>&lt;0.05)。肝纤维化模型组大鼠肝脏组织明显破环,大量炎症细胞浸润、胶原沉积及胆管增生,姜黄素给药组大鼠肝纤维病理变化明显减轻。Western blotting 检测,与假手术组比较,肝纤维化模型组大鼠肝脏组织中Tgf-&beta;1和 &alpha;-Sma蛋白表达水平升高(<em>P</em>&lt;0.05);与肝纤维化模型组比较,姜黄素给药组大鼠肝脏组织中Tgf-&beta;1和&alpha;-Sma蛋白表达水平降低(<em>P</em>&lt;0.05)。<strong>结论:</strong>姜黄素有治疗肝纤维化的作用,有望成为预防和治疗胆汁淤积性肝纤维化的药物。
DOI:10.13481/j.1671-587x.20150204      Magsci    
[本文引用:1]
[12] 黄汉儒. 壮医理论体系概述[J].中国中医基础理论杂志,1996,2(6):3-7.
[本文引用:1]
[13] 钟鸣. 壮药理论的研究现状与述评[J].中国民族医药杂志,2011,4(4):65-67.
壮药是指主产于壮族地区并按壮医实践经验及理论使用的传统药物，是壮族人民与疾痛作斗争的有力武器，也是我田独特的卫生资源。本文对近年来壮药理论的研究概况进行了综述与评价，介绍在壮药的命名、分类、鉴定、性味与功用理论。组方与用药、解毒药、补虚药、鲜药应用原则等方面的研究进展。提出要大力挖掘整理壮荮基础理论，加强壮药应用研究，提升壮医药的学术地位，为壮药资源的开发提供强有力的理论支撑。
DOI:10.3969/j.issn.1006-6810.2011.04.043      URL    
[本文引用:1]
[14] 李艳,曹文富.益气化瘀化痰养阴方剂对肝纤维化大鼠TGF-β1表达的影响[J].中成药,2012,34(8):1437-1442.
目的观察益气化瘀化痰养阴方剂对主要以CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝组织TGF-β1表达的影响,探讨益气、化瘀、化痰、养阴单剂与合剂治疗肝纤维化的疗效评价。方法将130只雄性SD大鼠随机分为正常对照组10只,肝纤维化模型组、益气组、化瘀组、化痰组、养阴组、合剂组各20只。除正常对照组外,各实验组采用皮下注射四氯化碳＋低蛋白高脂饮食＋酒精饮料的方法制备肝纤维化模型。模型成功后,根据组别分别灌服生理盐水、益气的黄芪白术饮、化瘀的川芎姜黄饮、化痰的半夏海藻饮、养阴的鳖甲白芍饮和上述8药合煎的具有益气化瘀化痰养阴作用的合剂。于12周末,进行心脏灌注。通过Masson三色胶原染色和电镜以观察肝组织结构的变化,采用RT-PCR及West-ern Blot方法观察各组TGF-β1的基因和蛋白表达变化。结果与肝纤维化模型组相比,益气、化瘀、化痰、养阴单剂均有效降低肝组织内纤维化程度,也可以降低大鼠肝组织TGF-β1基因和蛋白表达（P〈0.05）。在单剂治疗中,与其它3组相比,益气组疗效最差（P〈0.05）,养阴组疗效最好（P〈0.01）,化瘀与化痰两组差异不大（P〉0.05）。与单剂相比,合剂更能有效降低大鼠肝组织纤维化程度,降低TGF-β1基因和蛋白表达（P〈0.05）。结论单剂治疗都可以降低肝组织内纤维化程度,但也有程度差异;合剂更能够明显降低肝组织内纤维化程度,说明益气化瘀化痰养阴法对肝纤维化能达到更好的疗效。
DOI:10.3969/j.issn.1671-8194.2013.16.235     
[本文引用:1]
[15] 文彬,彭齐荣,贺松其,等.清香散对肝纤维化大鼠转化生长因子β1及Smad4免疫组化的影响[J].江苏中医药,2006,27(3):55-57.
[本文引用:1]
[16] 王天才,张国,王波.和络舒肝胶囊对大鼠慢性肝损伤的保护作用及分子机制研究[J].华中科技大学学报(医学版),2002,31(2):171-173.
探讨中药制剂和络舒肝胶囊的抗慢性肝损伤作用及作用机制.采用四氯化碳皮下注射8周制作大鼠慢性肝损伤模型,用生理盐水配制的和络舒肝混悬液灌胃,2粒/(只@次),每天1次,连续8周.观察肝组织病理变化,检测血清ALT、AST、AKP、γ-GT值,放免法检测透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)和Ⅳ型胶原水平,免疫组化检测肝组织转化生长因子β1(TGFβ1)表达,RT-PCR检测肝组织Smad3 mRNA水平.结果,和络舒肝能减轻慢性肝损伤的组织病理改变,显著降低肝损伤大鼠血清ALT、AST、AKP值及肝纤维化指标水平,P＜0.05或P＜0.01.四氯化碳诱导的慢性肝损伤中TGFβ1表达增加,使用和络舒肝胶囊可抑制肝组织中TGFβ1蛋白表达.正常组、和络舒肝组以及模型组Smad3 mRNA表达亦明显不同,其转录水平呈现依次增高趋势.和络舒肝胶囊对大鼠慢性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与影响TGFβ1蛋白表达水平有关,而且可能是通过抑制信号转导分子Smad3mRNA的转录水平来实现.
DOI:10.3870/j.issn.1672-0741.2002.02.020      URL    
[本文引用:1]
[17] 闫训友,薛冲,刘志敏,等.基质金属蛋白酶及其组织抑制剂研究进展[J].生物技术通讯,2004,15(3):302-305.
基质金属蛋白酶家族是细胞外基质降解过程中的重要酶类,组织金属 蛋白酶抑制剂是基质金属蛋白酶的天然抑制物.研究证实,细胞外基质中基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的失衡与多种病理机制有关,尤其与肿瘤的侵袭和转移密切 相关.本文就基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的性质、结构以及功能进行了综述.
DOI:10.3969/j.issn.1009-0002.2004.03.029      URL    
[本文引用:1]
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