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美国《化学文摘》《国际药学文摘》
《乌利希期刊指南》
WHO《西太平洋地区医学索引》来源期刊
日本科学技术振兴机构数据库（JST）
第七届湖北十大名刊提名奖
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, 马继文, 陈亚军
目的 观察丁酸氢化可的松乳膏体外透皮吸收情况。方法 采用高效液相色谱法,Agilent C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μg),以水-乙腈-冰醋酸(55:45:0.5)为流动相;流速为1.0 mL·min-1,检测波长为240 nm;以Franz扩散池和巴马香猪皮进行体外透皮实验,将自制乳膏与原研乳膏的结果比较,在不同时间点取样测定Franz扩散池接收液中丁酸氢化可的松的浓度,计算累积透过量和透皮速率。结果 丁酸氢化可的松的标准曲线方程为
Waters600-996高效液相色谱仪(带二极管阵列检测器);Empower工作站;AB135-S分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司); TT-600透皮吸收仪(天津市正通科技有限公司)。
丁酸氢化可的松对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100303-201202, 含量99.7%);自制丁酸氢化可的松乳膏(批号:20130301,规格:0.1%);原研丁酸氢化可的松乳膏(Triax Pharmaceuticals,规格:0.1%,批号: 11078C);乙腈为色谱纯, 其他试剂为分析纯,水为重蒸馏水。
实验用小型乳猪(巴马香猪,重庆宗申医达生物技术有限公司)。
将透皮吸收仪控制器部分摆在左边,磁力搅拌器和水槽部分摆放右边,并用连接管(水管)连接控制器和磁力搅拌器,水槽充满水后开启电源加热,取Franz 立式扩散池6个,分成2 组,自制样品与原研样品各3个。自制样品组取猪皮置于Franz扩散池的两个半池之间,用夹子固定好。皮肤角质层朝上,均匀涂抹自制丁酸氢化可的松乳膏0.12 g,在接收池中加接收液12 mL,使接收池中液面与皮肤刚好完整接触,扩散面积为1.8 cm2,设置水浴温度为( 32.0±0.5)℃、磁力搅拌器定速搅拌(500 r·min-1) ,分别于2,6,12,24 h各取接收液1 mL,每次取样后,随即补加1 mL备用接收液,测定各接收液中丁酸氢化可的松的浓度。同法,将原研乳膏样品涂于猪皮上,制备上述各时间点的接收液,并测定浓度,计算透皮吸收量及透皮速率。
2.2.1 色谱条件 色谱柱: Agilent C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:水-乙腈-冰醋酸(55:45:0.5);二极管阵列检测器波长240 nm;流速1.0 mL·min-1;进样量20 μL。
2.2.2 溶液的制备 对照品溶液的制备:精密称取丁酸氢化可的松对照品适量, 加甲醇溶解,用0.9%氯化钠溶液定量稀释,制成每毫升中约含1.0 μg 的溶液, 作为对照品溶液。
供试品溶液的制备:分别取自制乳膏和原研乳膏各时间点的接收液用孔径0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。
空白基质溶液的制备:取丁酸氢化可的松乳膏空白基质(不含丁酸氢化可的松)0.12 g,均匀涂布于Franz 扩散池的猪皮上,24 h 后取接收液适量,用孔径0.45 μm 滤膜滤过,取续滤液作为空白基质液。
2.2.3 专属性实验 分别取空白基质溶液、对照品溶液、24 h透皮接收液各20 μL注入液相色谱仪,记录色谱图,结果见
2.2.4 线性关系考察 精密称取丁酸氢化可的松对照品10.80 mg置量瓶中, 加甲醇溶解并稀释每毫升含丁酸氢化可的松10.80 μg,摇匀, 作为储备液。分别精密量取储备液1.0,4.0,5.0,6.0 mL置50 mL量瓶中, 4.0 mL置10 mL量瓶中, 加0.9%氯化钠溶液稀释至刻度, 摇匀得浓度为0.216,0.864,1.08,1.296,4.32 μg·mL-1的系列浓度标准溶液。分别精密量取20 μL注入液相色谱仪, 记录色谱图, 以浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线。结果回归方程为
2.2.5 定量限及最小检测限 取线性关系项下丁酸氢化可的松对照品溶液,用0.9%氯化钠溶液逐级稀释成浓度0.02 μg·mL-1的溶液,精密量取20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,根据信噪比(
2.2.6 精密度实验 取线性关系项下0.864,1.08,1.296 μg·mL-1丁酸氢化可的松对照品溶液进行测定,RSD分别为0.37%,0.52%,0.34%。日间精密度:取线性关系项下0.864,1.08,1.296 μg·mL-1丁酸氢化可的松对照品溶液进行测定(3 d),RSD分别为0.76%,0.93%,0.69%。
2.2.7 溶液稳定性 取24 h样品接收液在室温下放置24 h,分别于0,4,8,16,24 h量取20 μL注入液相色谱仪,考察透皮接收液在室温条件下存放的稳定性,结果丁酸氢化可的松峰面积RSD 为1.34%。结果表明: 丁酸氢化可的松乳膏透皮接收液在室温条件下放置24 h内稳定。
2.2.8 回收率实验 取线性关系项下对照品溶液,精密加入丁酸氢化可的松对照品适量, 用空白基质液稀释制成供试品溶液,测定。结果平均回收率98.88%,RSD=0.91%。见
表1 丁酸氢化可的松对照品回收率实验结果
2.2.9 样品测定 分别精密量取对照品溶液、透皮接收液各 20 μL注入液相色谱仪,记录峰面积,并用下面公式[3]计算各时间点的累积透皮释放量。结果见表2,3。
式中
表2 丁酸氢化可的松乳膏不同时间的累积释放量及释放率
表3 丁酸氢化可的松乳膏透皮吸收速率
本透皮吸收试实验采用与人体皮肤接近的乳猪皮肤作为体外透皮吸收介质,模拟人体皮肤吸收过程。本实验观察到离体巴马香猪皮的质量对透皮吸收试验有很大影响,要求离体皮肤无伤痕;并要求将皮下结缔组织、脂肪、肌肉清除干净;实验最好用同一动物同一部位的皮肤(最好用腹部的皮肤),这样可以避免个体差异造成的误差[3]。
考虑到人体血液成分、渗透压等因素,采用与人体液相近0.9%氯化钠溶液作为透皮实验的接收液。由于丁酸氢化可的松在水中的溶解度很低(几乎不溶),采用甲醇溶解后再用0.9%氯化钠溶液稀释样品。同时,为保证试验结果的可靠性、准确性,采用灵敏度较高的HPLC法测定接收液中丁酸氢化可的松的浓度,方法学研究也证明本方法专属性强、准确度高。
The authors have declared that no competing interests exist.
