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医药导报
医药导报, 2023, 42(6): 789-796
doi: 10.3870/j.issn.1004-0781.2023.06.003
富马酸丙酚替诺福韦及其代谢物替诺福韦在中国健康受试者体内生物等效性研究
Bioequivalence Study of Tenofovir Fumarate and Its Metabolite Tenofovir in Chinese Healthy Subjects
陈红1,, 邱雯2,, 吉兴芳3, 王志鹏3, 骆平英4, 刘海艳4
1.成都医学院第二附属医院·核工业四一六医院中西医结合科,成都 610057
2.兰州大学第二医院国家药物临床试验机构,兰州 730030
3.兰州大学药学院,兰州 730030
4.湖南科锐斯医药科技有限公司,长沙 410205
CHEN Hong1,, QIU Wen2,, JI Xingfang3, WANG Zhipeng3, LUO Pingying4, LIU Haiyan4
1. Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,the Second Affiliated Hospital of Chengdu Medical College,China National Nuclear Corporation 416 Hospital,Chengdu 610057,China
2. National Drug Clinical Trial Institution,the Second Hospital,Lanzhou University Lanzhou 730030,China
3. School of Pharmacy,Lanzhou University,Lanzhou 730030,China
4. Hunan Creates Pharmaceutical Technology Co.,Changsha 410205,China
通信作者 邱雯(1973-),女,上海人,主任药师,博士,研究方向:临床药理学。ORCID:0000-0002-6807-1898,E-mail:1040208234@qq.com。

作者简介 陈红(1981-),女,四川广安人,主治医师,学士,研究方向:中西医临床医学、临床药理学。 ORCID:0000-0003-0252-3406,E-mail:31375003@qq.com。
中图分类号: R978.7;R969.1;R512.6     文献标识码: A     文章编号: 1004-0781(2023)06-0789-08
摘要:

目的 研究富马酸丙酚替诺福韦及其代谢物替诺福韦在中国健康受试者体内的药动学特征,并评价受试制剂和参比制剂在空腹和餐后给药时的生物等效性。 方法 在健康成年受试者中采用随机、开放、两制剂、两序列、四周期、完全重复交叉试验设计。空腹和餐后分别入组健康成年受试者32例和36例,每周期单次给予受试制剂或参比制剂25 mg,清洗期14 d。采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定人血浆中富马酸丙酚替诺福韦及其代谢物替诺福韦,并评估两种制剂的生物等效性。 结果 平均生物等效性(ABE)评价标准,空腹试验中丙酚替诺福韦受试制剂与参比制剂AUC0-t、AUC0-∞几何均数比值90%置信区间分别为86.39%~103.42%,86.42%~103.42%;参比制剂标度的平均生物等效性(RSABE)评价标准,受试制剂与参比制剂峰浓度(Cmax)的几何均值比约为88.39%,单侧95%置信区间上限为-0.010 4,符合高变异药物生物等效性要求;替诺福韦分别为87.73%~98.58%,91.44%~101.38%,92.57%~103.29%。餐后试验中丙酚替诺福韦受试制剂与参比制剂Cmax、AUC0-t、AUC0-∞几何均数比值90%置信区间分别为82.98%~109.89%,91.17%~102.21%,91.46%~102.94%;替诺福韦分别为94.65%~103.19%,96.68%~103.73%,96.87%~104.11%。RSABE评价结果表明,餐后试验受试制剂与参比制剂Cmax几何均值比值为95.49%,单侧95%置信区间上限为-0.201 0,符合高变异药物生物等效性要求。 结论 空腹和餐后条件下单次口服富马酸丙酚替诺福韦受试制剂和参比制剂具有生物等效性。
关键词: 富马酸丙酚替诺福韦; 替诺福韦; 生物等效性; 药动学; 高效液相色谱-串联质谱法

Abstract:

Objective To study the pharmacokinetic characteristics of tenofovir fumarate alafenamide and its metabolite tenofovir in healthy Chinese subjects and to evaluate the bioequivalence of test and branded preparation when administered under fasting and fed condition. Methods A randomized,open-label,two-preparation,two-sequence,four-period and fully replicated crossover bioequivalence trial was performed in healthy Chinese adult subjects.A total of 32 and 36 healthy subjects were enrolled in the fasting and fed trials,respectively.A single dose of test or reference tenofovir fumarate (25 mg) was administered under fasting or fed condition with a 14-day was hout period.The concentration of tenofovir fumarate and its metabolite tenofovir in human plasma was determined by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS).Then,the bioequivalence of the two preparations was evaluated. Results Average-bioequivalence analysis demonstrated that 90% confidence intervals for the geometric mean ratio of AUC0-t and AUC0-∞of the tenofovir alafenamide in fasting condition were 86.39%-103.42% and 86.42%-103.42%,respectively.In addition,the point estimation for the geometric mean ratio of Cmax was 88.39% and upper bound of 95% confidence interval was -0.010 4 by using the reference-scaled average bioequivalence (RSABE) method.On the other hand,90% confidence intervals for geometric mean ratio of Cmax,AUC0-t and AUC0-∞of tenofovir in fasting condition were 87.73%-98.58%,91.44%-101.38% and 92.57%-103.29%,respectively.Under fed conditions,90% confidence intervals for geometric mean ratio of Cmax,AUC0-t and AUC0-∞ between the test and reference preparation for tenofovir alafenamide were 82.98%-109.89%,91.17%-102.21% and 91.46%-102.94%,respectively.For tenofovir,these parameters were 94.65%-103.19%,96.68%-103.73% and 96.87%-104.11%,respectively.RSABE analysis demonstrated that the point estimation for the geometric mean ratio of Cmax was 95.49% and the upper bound of 95% confidence interval was -0.201 0.All results also met the bioequivalence acceptance criteria. Conclusion This study demonstrated that 25 mg tenofovir fumarate test formulation is bioequivalent to the formulation marketed in healthy Chinese subjects under fasting and fed conditions.
Key words: Tenofovir alafenamide fumarate; Tenofovir; Bioequivalent; Pharmacokinetic; HPLC-MS/MS

开放科学(资源服务)标识码(OSID)

慢性乙型肝炎(简称乙肝)是一种影响全球公共卫生的传染病,由于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)持续感染导致的常见慢性肝脏疾病。据世界卫生组织(WHO)报道,截至2019年,全球慢性HBV感染者约2.5亿例[1]。目前,慢性乙肝已成为我国社会负担最大的疾病之一[1]。富马酸丙酚替诺福韦(tenofovir alafenamide fumarate,TAF)作为近10年批准用于治疗慢性乙肝的第一个药物,通过被动扩散以及肝脏摄取性转运体OATP1B1和OATP1B3进入原代肝细胞。丙酚替诺福韦主要通过羧酸酯酶1水解形成替诺福韦,随后经过磷酸化,形成药理学活性代谢产物二磷酸替诺福韦。二磷酸替诺福韦借助HBV逆转录酶整合嵌入病毒DNA(这会导致DNA链终止),从而抑制HBV复制[2,3,4]。目前,关于替诺福韦的血药浓度测定及药动学研究报道较少[5,6,7,8,9],丙酚替诺福韦在健康中国志愿者体内药动学呈现高变异性[10]。笔者在本研究建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定丙酚替诺福韦及其代谢物替诺福韦浓度,评价TAF片国内仿制药与国外原研药的生物等效性。报道如下。

1 材料与方法
1.1 药品与试剂

受试制剂:TAF片(成都倍特药业有限公司,规格:每片25 mg,批号:180101,含量:99.6%);参比制剂:TAF片(商品名:Vemlidy®,Gilead Sciences公司,规格:每片25 mg,批号:011928,含量:96.9%);TAF对照品(中国食品药品检定研究院,批号:430025-202101);替诺福韦对照品(AOCS公司,批号:EST-007-15-E);阿哌沙班(内标,HST公司,批号:A009000-201905);外消旋替诺福韦-d6(内标,TRC,批号:12-JLI-109-1)。甲醇、乙腈(色谱纯,Merck公司),乙酸、乙酸铵、异丙醇(质谱纯,ACS公司),其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器

LC-20AD型UPLC系统(日本Shimadzu公司,配有LC-20AD型高压恒流输液泵、CTO-20AC柱温箱、CBM-20A控制器、DGU-20A3脱气机、SIL-30AC MP进样器);LCMS-8050三重四级杆质谱仪(日本Shimadzu公司);Labsolution数据采集工作站;电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司,感量:0.01 mg);ULTS1490型超低温冰箱(美国Thermo Scientific公司);TGL16M、TGL18型离心机(长沙英泰仪器有限公司)。

1.3 受试者选择

本研究共入组中国健康受试者68例。其中空腹试验入组32例,男21例,女11例,年龄(21.71±1.64)岁,身高(165.63±8.24)cm,体质量(59.23±7.29)kg,体质量指数(BMI)为(21.53±1.47)kg·(m2)-1。餐后试验入组36例,男22例,女14例,年龄(22.39±2.98)岁,身高(168.22±7.60)cm,体质量(61.83±7.23)kg,BMI为(21.80±1.48)kg·(m2)-1。所有受试者性别、年龄、身高、体质量等人口学特征均符合入组要求,受试者在试验前14 d及试验期间未曾服用过任何其他药物。试验前受试者均签署知情同意书,自愿参加,服药的依从性良好,本试验方案经兰州大学第二医院药物临床试验伦理委员会批准(伦理批件号:[2018]第20号、21号)。

1.4 给药方案与血样采集

本试验采用随机、开放、两制剂、两序列、四周期、完全重复交叉的生物等效性试验设计,每周期清洗期为14 d。所有受试者于试验前1 d入住病房,统一生活管理,禁服茶、咖啡及其他含咖啡和醇类饮料,并禁止吸烟。试验当天早上随机发放受试制剂或参比制剂,受试者在端坐姿态下空腹单次口服用药(至少空腹10 h),餐后组在服药前30 min开始进食高脂餐,30 min内进餐完毕,温开水240 mL送服。服药前后1 h内禁止饮水(服药时饮水240 mL除外),服药4 h内禁食。服药4,10 h后统一进标准餐。受试者服药后应避免剧烈运动,亦不得长时间卧床。

空腹和餐后试验组分别在给药前(0 h)以及给药后5,10,20,30,40,50 min及1,1.25,1.5,1.75,2,2.5,3,4,5,6,8,12,24,48,72 h,采集前臂静脉血3 mL,置于肝素钠抗凝管中,轻柔颠倒混匀。采集的血样在30 min内4 ℃条件下离心(2000×g,10 min),离心后取上层血浆0.8 mL,转移至含2%乙酸16 μL的冻存管中,混匀5 s后置于-80 ℃冰箱内保存。血样采集前以及血样采集后到低温离心操作之前,真空采血管均须置于冰水浴内。分取血浆过程中及分取血浆后到置于冰箱之前的过程中,冻存管均置于冰水浴内。

1.5 测定方法

1.5.1 色谱条件 色谱柱:ACQUITY UPLC®HSS T3(2.1 mm×75 mm,1.8 μm);流动相A:5 mmol·L-1乙酸铵(含0.1%甲酸),流动相B:甲醇:乙腈(1:1);梯度洗脱(丙酚替诺福韦:0.01~0.40 min,15% B;1.00~2.50 min,95% B;2.60~3.80 min,15% B。替诺福韦:0.01~0.50 min,1% B;0.60~2.50 min,12% B;3.00~4.00 min,90% B;4.30~6.00 min,1% B);流速:0.3 mL·min-1;柱温40 ℃;进样量5.0 μL。

1.5.2 质谱条件 离子源:ESI,离子化方式:正离子模式;扫描方式:MRM;监测离子对:丙酚替诺福韦(m/z)为477.05/346.10,阿哌沙班(内标,m/z)为460.05/443.00,替诺福韦为(m/z)288.10/176.10,替诺福韦-d6(内标,m/z)为294.40/181.95;接口温度:400 ℃,DL温度:250 ℃,加热块温度:400 ℃,接口电压:4.5 kV。

1.5.3 对照品储备液的制备 精密称取适量TAF对照品置于棕色玻璃瓶中,甲醇溶解并定容,配制成含丙酚替诺福韦10.00 mg·mL-1的储备液;精密称取适量替诺福韦对照品置于透明玻璃瓶中,溶解于适量体积水中,配制成含替诺福韦1.000 mg·mL-1的储备液。在2~8 ℃条件下保存。

1.5.4 内标工作溶液的制备 精密称取阿哌沙班对照品适量,加入适量二甲亚砜(DMSO)溶解并摇匀,再加入等量甲醇稀释,用乙腈稀释至10.00 ng·mL-1;精密称取替诺福韦-d6,加入适量DMSO溶解并摇匀,将其用甲醇稀释至10.00 ng·mL-1。2~8 ℃保存。

1.5.5 标准曲线溶液的制备 取适量丙酚替诺福韦储备液,用甲醇-水(50:50)逐渐稀释,配制成标准曲线溶液,将其加入空白人血浆中(含2%乙酸)稀释,得到浓度为1.000,2.500,10.00,20.00,40.00,100.0,200.0,400.0 ng·mL-1的系列校正标样。取适量替诺福韦储备液,用甲醇-水(50:50)逐渐稀释,配制成标准曲线溶液,将其加入空白人血浆(含2%乙酸)中稀释,得到浓度为0.400 0,0.800 0,2.000,5.000,10.00,20.00,32.00,40.00 ng·mL-1的系列校正标样。

1.5.6 血浆样品前处理 ①丙酚替诺福韦:吸取待测血浆样品80.0 μL至1.5 mLEP管中,加入阿哌沙班内标工作液(双空白样品替换为纯乙腈)500 μL,涡旋振荡3 min后,于4 ℃、12 000 r·min-1(2000×g)条件下离心10 min,取上清液50.0 μL至96孔进样板,加入纯水稀释液150 μL,混匀后进样分析。②替诺福韦:吸取待测血浆样品100 μL至1.5 mL EP管中,加入替诺福韦-d6内标工作液(双空白样品替换为纯甲醇)300 μL,涡旋振荡3 min,于4 ℃、12 000 r·min-1条件下离心10 min,取上清液150.0 μL至96孔进样板,加入纯水稀释液150 μL,混匀后进样分析。

1.5.7 统计学方法 利用WinNonlin软件,采用非房室模型法(non-compartment model,NCA)计算丙酚替诺福韦与替诺福韦药动学参数,并采用平均生物等效性或参比制剂标度的平均生物等效性置信区间法进行评价。利用SPSS 23.0版软件,采用独立样本t检验法分析不同性别的受试者之间主要药动学参数峰浓度(Cmax),血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)及AUC0-∞之间的差异,采用非参数检验法比较不同性别受试者之间达峰时间(tmax)之间的差异。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 方法学考察及评价

2.1.1 选择性 取6个不同来源的空白血浆,按照“1.5.6”项血浆样品前处理中双空白样品进行处理后进样。要求双空白样品中待测物峰面积不超过定量下限样品待测物峰面积的20%,内标峰面积不超过定量下限样品内标峰面积的5%。在本研究条件下,丙酚替诺福韦保留时间约为2.25 min,替诺福韦保留时间约为2.35 min,内标阿哌沙班保留时间约为2.25 min,替诺福韦-d6保留时间约为2.35 min。结果表明,空白血浆中内源性物质均不干扰代谢物和内标的测定,色谱图见图1,图2。


图1 丙酚替诺福韦及内标(阿哌沙班)色谱图
A.空白血浆;B.定量下限(1.000 ng·mL-1);C.定量上限(400.0 ng·mL-1)。

Fig.1 Chromatograms of tenofovir alafenamide and internal standard (apixaban)
A.Blank plasma;B.Lower limit of quantification (1.000 ng·mL-1);C.Upper limit of quantification(400.0 ng·mL-1).


图2 替诺福韦及内标(替诺福韦-d6)色谱图
A.空白血浆;B.定量下限(0.400 0 ng·mL-1);C.定量上限(40.00 ng·mL-1)。

Fig.2 Chromatograms of tenofovir and internal standard (tenofovir-d6)
A.Blank plasma;B.Lower limit of quantification (0.400 0 ng·mL-1);C.Upper limit of quantification(40.00 ng·mL-1).

2.1.2 标准曲线及定量限 使用空白人血浆新鲜制备下列浓度的血浆样品,丙酚替诺福韦:1.000, 2.500, 10.00, 20.00, 40.00, 100.0, 200.0, 400.0 ng·mL-1,替诺福韦:0.400 0, 0.800 0, 2.000, 5.000, 10.00, 20.00, 32.00, 40.00 ng·mL-1,对响应值Y(分析物与内标的峰面积比值)与分析物理论浓度(C)进行线性回归,权重为1/C2。丙酚替诺福韦在1.000~400.0 ng·mL-1范围内线性良好(R2>0.98),标准曲线:Y=0.012 654X-0.000 491 645;替诺福韦在0.4000~40.00 ng·mL-1范围内线性良好(R2>0.98),标准曲线:Y=0.101 627X -0.005 181 01。

2.1.3 精密度及准确度 使用空白人血浆新鲜制备定量下限、低、中、高共4个浓度的血浆样品,每个浓度各6份,按照“1.5.6”项血浆样品前处理后测定,至少2 d内连续测定3个批次。以单个分析批内测得浓度计算批内精密度及准确度,以3个分析批测得浓度数据计算批间精密度及准确度,结果见表1。

表1 丙酚替诺福韦及替诺福韦精密度及准确度考察结果
Tab.1 Precision and accuracy of tenofovir alafenamide and tenofovir
待测物 浓度/
(ng·mL-1) 		批内(n=6) 批间(n=18)
测定值/
(ng·mL-1) 		精密度(CV) 准确度偏差(RE) 测定值/
(ng·mL-1) 		精密度(CV) 准确度偏差(RE)
% %
丙酚替诺福韦 1 0.961 2±0.102 1 10.72 -3.11 1.020 0±0.109 10.25 4.02
3 2.880 0±0.208 7.56 3.93 2.911 0±0.256 8.79 -2.96
30 29.170 0±1.35 4.94 -2.10 30.300 0±1.51 4.98 1.02
300 283.400 0±10.7 4.07 -4.21 294.800 0±13.6 4.73 -1.30
替诺福韦 0.4 0.368 2±0.033 3 9.31 -7.76 0.424 2±0.068 9 16.10 6.04
1 1.041 0±0.068 6.53 4.10 1.074 0±0.087 8.10 7.40
4 3.871 0±0.174 4.74 -3.02 4.084 0±0.315 7.71 2.10
30 29.200 0±1.22 4.16 -2.50 30.940 0±2.35 7.6 3.13

表1 丙酚替诺福韦及替诺福韦精密度及准确度考察结果

Tab.1 Precision and accuracy of tenofovir alafenamide and tenofovir

2.1.4 基质效应 分别取6个不同来源的空白人血浆(含2%乙酸),按照“1.5.6”项双空白样品进行处理,向其中添加低、中、高浓度分析物及内标制得基质样品,每个浓度重复6份。另配制低、中、高浓度纯溶液样品。对比基质样品与纯溶液之间的内标归一化基质效应因子。结果丙酚替诺福韦及替诺福韦低、中、高3个浓度水平,内标归一化的基质因子变异系数均≤15%,表明在本研究条件下,各样品的基质效应均一。

2.1.5 稳定性 血浆稳定性结果见表2。丙酚替诺福韦:储备液(甲醇配制)室温存放19 h稳定,工作溶液(50%甲醇水配制)室温存放41 h稳定。血浆样品室温21 h稳定,-80 ℃冻融3次稳定,制备后样品2~8 ℃存放73 h稳定。替诺福韦:工作溶液(50%甲醇水配制)室温存放41 h稳定;血浆样品室温44 h稳定,-80 ℃冻融3次稳定,制备后样品2~8 ℃存放116 h稳定。

表2 丙酚替诺福韦及替诺福韦血浆稳定性考察结果
Tab.2 Plasma stability of tenofovir alafenamide and tenofovir %,n=6
条件 丙酚替诺福韦-
准确性偏差(RE) 		替诺福韦-
准确性偏差(RE)
LQC HQC LQC HQC
-80 ℃冻融3次 -6.63 0.37 -13.17 -8.10
室温存放21 h(44 h) 0.90 -0.47 -8.82 -4.00
2~8 ℃存放 73 h(116 h) 4.90 1.17 -4.03 -3.23

表2 丙酚替诺福韦及替诺福韦血浆稳定性考察结果

Tab.2 Plasma stability of tenofovir alafenamide and tenofovir %,n=6

2.2 药动学

本试验共入组68例受试者(空腹32例,脱落3例;餐后36例),共65例受试者完成试验。试验过程中未发生对受试者安全与权益、数据科学性评价有影响的方案偏离或违背。本试验未发生严重不良事件,9例(24.32%)受试者发生10例次不良事件,均为轻度。不良事件的组织器官和系统归类主要为各类检查、血液及淋巴系统疾病、各类神经系统疾病和代谢及营养类疾病等,首选术语主要为贫血、头晕和高尿酸血症等。

不同性别健康受试者空腹或餐后单次口服TAF片25 mg后,丙酚替诺福韦体内暴露存在显著性别差异,主要药动学参数,见表3~4。如AUC0-t和AUC0-∞经t检验,P值均<0.01。

表3 健康受试者空腹单次口服TAF片后丙酚替诺福韦和替诺福韦主要药动学参数
Tab.3 Main pharmacokinetic parameters of tenofovir alafenamide and tenofovir after a single oral administration of tenofovir fumarate tablets in healthy subjects under fasting states $\bar{x}±s$
项目 例数 Cmax(CV%)/
(ng·mL-1) 		AUC0-t(CV%) AUC0-∞(CV%) tmax/h λz
(CV%) 		t1/2
(CV%)/h
(ng·h·mL-1) 中位数 范围
丙酚替诺福韦
男 19 268.8±141.3(52.18) 155.4±62.9(39.77) 156.3±62.1(39.83) 0.333 0.25~1.25 1.552±0.395(25.46) 0.606 8±1.134 4(186.95)
女 10 441.6±243.1(55.21)① 248.7±189.6(76.10)② 249.4±189.7(76.04)② 0.333 0.25~2.00 1.471±0.396(26.91) 0.506 4±0.150 3(29.67)
替诺福韦
男 19 8.168±2.084(25.49) 179.21±35.51(19.93) 232.23±47.74(20.56) 1.00 0.67~8.00 0.020 77±0.003 635(17.50) 34.30±5.60(16.32)
女 10 9.703±1.921(19.72) 211.60±41.47(19.69) 278.54±52.34(18.79) 1.125 0.67~1.75 0.019 48±0.003 663(18.81) 36.68±6.22(16.97)

①与男性比较,P<0.05;②与男性比较,P<0.01。

①Compared with male,P<0.05;②Compared with male,P<0.01.

表3 健康受试者空腹单次口服TAF片后丙酚替诺福韦和替诺福韦主要药动学参数

Tab.3 Main pharmacokinetic parameters of tenofovir alafenamide and tenofovir after a single oral administration of tenofovir fumarate tablets in healthy subjects under fasting states $\bar{x}±s$

表4 健康受试者餐后单次口服TAF片后丙酚替诺福韦和替诺福韦主要药动学参数
Tab.4 The main pharmacokinetic parameters of tenofovir alafenamide and tenofovir after a single oral administration of tenofovir fumarate tablets in healthy subjects after meal $\bar{x}±s$
性别 例数 Cmax(CV%)/
(ng·mL-1) 		AUC0-t(CV%) AUC0-∞(CV%) tmax/h λz
(CV%) 		t1/2
(CV%)/h
(ng·h·mL-1) 中位数 范围
丙酚替诺福韦
男 22 222.84±127.70(57.31) 207.81±71.37(34.34) 208.36±71.52(34.32) 1.000 0.167~3.000 1.899±0.410(21.61) 0.383 8±0.093 1(24.27)
女 14 281.58±229.50(72.72) 284.52±127.83(44.93)① 288.93±129.32(44.76)① 1.000 0.25~3.50 1.667±0.505(30.30)② 0.468 9±0.193 7(41.30)②
替诺福韦
男 22 7.88±1.77(22.44) 226.53±36.68(16.19) 308.00±51.68(16.78) 2.000 0.667~4.500 0.019±0.002(13.02) 36.771 1±5.020 0(13.65)
女 14 9.51±2.69(28.23)① 274.83±71.64(26.06)① 384.72±98.33(25.56)① 3.000 0.833~5.000 0.019±0.003(15.19) 38.240 5±5.767 0(15.08)

①与男性比较,P<0.05;②与男性比较,P<0.01。

①Compared with male,P<0.05;②Compared with male,P<0.01.

表4 健康受试者餐后单次口服TAF片后丙酚替诺福韦和替诺福韦主要药动学参数

Tab.4 The main pharmacokinetic parameters of tenofovir alafenamide and tenofovir after a single oral administration of tenofovir fumarate tablets in healthy subjects after meal $\bar{x}±s$

受试者在空腹和高脂餐后服用TAF片25 mg,丙酚替诺福韦和替诺福韦平均血药浓度-时间曲线见图3,4,药动学参数见表5,6。


图3 健康受试者口服TAF片25 mg后丙酚替诺福韦血药浓度-时间曲线($\bar{x}±s$)

Fig.3 Mean plasma concentration-time profiles of tenofovir alafenamide after oral administration of 25 mg TAF tablets in healthy subjects($\bar{x}±s$)


图4 健康受试者口服TAF片25 mg后替诺福韦血药浓度-时间曲线($\bar{x}±s$)

Fig.4 Mean plasma concentration-time profiles of tenofovir after oral administration of 25 mg TAF tablets in healthy subjects($\bar{x}±s$)

表5 空腹试验和餐后试验健康受试者体内丙酚替诺福韦的主要药动学参数
Tab.5 Main pharmacokinetic parameters of tenofovir alafenamide in healthy subjects under fasting and food conditions $\bar{x}±s$
项目 例数 Cmax(CV,%)/
(ng·mL-1) 		AUC0-t(CV,%) AUC0-∞(CV,%) tmax(CV,%)/h λz
(CV,%) 		t1/2
(CV,%)/h
(ng·h·mL-1) 中位数 范围
空腹 29
受试制剂 248.51±127.01(51.11) 148.13±67.87(45.81) 148.42±67.87(45.73) 0.42 0.167~1.25(46.14) 1.945 5±0.430 0(22.10) 0.37±0.08(22.31)
参比制剂 275.72±133.38(48.37) 157.80±71.31(45.19) 158.10±71.37(45.14) 0.42 0.167~0.833(36.35) 1.810 5±0.410 8(22.69) 0.40±0.10(23.77)
餐后 36
受试制剂 244.64±183.13(74.86) 230.40±80.12(34.77) 233.20±82.62(35.43) 1.00 0.167~3.5(68.61) 1.840 5±0.475 9(25.86) 0.41±0.15(36.98)
参比制剂 246.73±170.02(68.91) 244.89±123.33(50.36) 246.19±124.26(50.47) 0.83 0.250~3.5(65.32) 1.777 3±0.449 1(25.27) 0.42±0.14(33.41)

表5 空腹试验和餐后试验健康受试者体内丙酚替诺福韦的主要药动学参数

Tab.5 Main pharmacokinetic parameters of tenofovir alafenamide in healthy subjects under fasting and food conditions $\bar{x}±s$

表6 空腹试验和餐后试验健康受试者体内替诺福韦的主要药动学参数
Tab.6 Main pharmacokinetic parameters of tenofovir in healthy subjects under fasting and food conditions $\bar{x}±s$
项目 例数 Cmax(CV,%)/
(ng·mL-1) 		AUC0-t(CV,%) AUC0-∞(CV,%) tmax(CV,%)/h λz
(CV,%) 		t1/2
(CV,%)/h
(ng·h·mL-1) 中位数 范围
空腹 29
受试制剂 9.46±3.05(32.29) 221.49±55.69(25.14) 282.27±73.55(26.06) 1.25 0.833~3(38.23) 0.022 0±0.003 3(15.1128) 32.230±5.24(16.25)
参比制剂 10.17±3.11(30.53) 232.39±63.69(27.41) 290.78±79.63(27.39) 1.25 0.583~4(38.90) 0.022 7±0.002 9(12.7211) 31.080±4.19(13.46)
餐后 36
受试制剂 8.47±2.37(27.98) 245.87±63.51(25.83) 338.89±86.84(25.62) 2.50 0.667~5(49.33) 0.018 9±0.002 8(14.798 1) 37.430±5.52(14.75)
参比制剂 8.57±2.25(26.32) 244.75±52.10(21.29) 336.78±77.83(23.11) 2.00 0.667~5(46.61) 0.018 9±0.002 5(13.136 3) 37.258±5.22(14.00)

表6 空腹试验和餐后试验健康受试者体内替诺福韦的主要药动学参数

Tab.6 Main pharmacokinetic parameters of tenofovir in healthy subjects under fasting and food conditions $\bar{x}±s$

2.3 生物等效性评价

采用Phoenix WinNonlin(7.0版本)软件评价受试制剂和参比制剂的生物等效性。在空腹及餐后试验中,丙酚替诺福韦的AUC0-t和AUC0-∞及其代谢物替诺福韦AUC0-t和AUC0-∞的个体内标准差SWR<0.294,但丙酚替诺福韦Cmax的SWR>0.294。因此,采用平均生物等效性(average bioequivalence,ABE)评价两种制剂AUC0-t和AUC0-∞的生物等效性,用参比制剂标度的平均生物等效性(reference-scaled average bioequivalence,RSABE)评价其Cmax的生物等效性。结果表明,丙酚替诺福韦及其代谢物替诺福韦的AUC0-t和AUC0-∞的几何均值比值(T/R)的90%CI均在80.00%~125.00%范围内,具体结果见表7。空腹与餐后试验受试制剂与参比制剂的Cmax几何均值比为88.39%,95.49%; Y - T - Y - R 2 - θ s 2 WR 单侧 95%置信区间上限分别为-0.010 4,-0.201 0,均小于0,符合高变异药物生物等效性要求。

表7 丙酚替诺福韦及其代谢物替诺福韦的生物等效性结果
Tab.7 Bioequivalence results of tenofovir alafenamide and its metabolite tenofovir
项目 Cmax AUC0-t AUC0-∞
几何均值及
比值/% 		90%CI Swr 几何均值及
比值/% 		90%CI Swr 几何均值及
比值/% 		90%CI Swr
丙酚替诺福韦
空腹 88.39 79.46~98.33 0.294 3 94.52 86.39~103.42 0.228 3 94.54 86.42~103.42 0.228 1
餐后 95.49 82.98~109.89 0.606 1 96.53 91.17~102.21 0.242 4 97.03 91.46~102.94 0.240 2
替诺福韦
空腹 93.00 87.73~98.58 0.121 1 96.28 91.44~101.38 0.134 3 97.78 92.57~103.29 0.130 6
餐后 98.83 94.65~103.19 0.160 3 100.13 96.68~103.73 0.100 6 100.43 96.87~104.11 0.096 5

表7 丙酚替诺福韦及其代谢物替诺福韦的生物等效性结果

Tab.7 Bioequivalence results of tenofovir alafenamide and its metabolite tenofovir

3 讨论

本试验首次考察性别对丙酚替诺福韦及其代谢物替诺福韦在健康中国人体内药动学特征的影响。研究结果表明(表3),在空腹条件下口服TAF片25 mg后,女性受试者体内丙酚替诺福韦暴露量(AUC)明显高于男性(P<0.01),男性受试者约为女性受试者的62%。男女性受试者Cmax比较亦差异有统计学意义(P<0.05),男性受试者Cmax约为女性受试者的61%。tmax及半衰期未表现出明显的差异。代谢物替诺福韦的主要药动学参数在不同性别受试者间均未表现出明显的差异。

原研药说明书采用群体药动学的方法评估不同影响因素对丙酚替诺福韦的药动学参数的影响,结果未将性别列出的药动学差异视为具有临床相关性。然而,本研究结果提示中国健康女性受试者在空腹服用相同剂量的丙酚替诺福韦制剂后,原型药物体内暴露存在显著性别差异。因原形药物在女性受试者中具有更高的暴露,增加女性患者发生临床不良反应风险,提示在此类药物对临床研究中应关注女性受试者的安全。

试验发现与空腹给药比较,餐后给药丙酚替诺福韦暴露量AUC0-t增加55.19%,Cmax降低10.51%,且tmax推迟约0.41 h,而代谢物替诺福韦Cmax降低15.73%,tmax推迟约0.75 h,AUC0-t基本无明显变化,说明饮食对富马酸替诺福韦的药动学存在明显影响,结果与国内外文献报道结果一致[11,12]。

本研究在健康中国成年受试者中采用随机、开放、两制剂、两序列、四周期、完全重复交叉试验,证明空腹和餐后条件下单次口服富马酸丙酚替诺福韦受试制剂和参比制剂具有生物等效性。此外,本研究发现性别对替诺福韦艾拉酚胺在健康中国人体内药动学特征的影响,但其代谢物替诺福韦的主要药动学参数在不同性别受试者间均未表现出明显的差异。同时,饮食也会对丙酚替诺福韦及其代谢物替诺福韦在健康中国人体内药动学特征产生影响。本研究结果可为富马酸替诺福韦在中国人群的安全合理用药提供重要参考依据。

参考文献
[1] NICOLINI L A, ORSI A, TATARELLI P, et al. A global view to HBV chronic infection:evolving strategies for diagnosis,treatment and prevention in immunocompetent individuals[J]. Inter J Environ Res Public Health, 2019, 16:3307.
Hepatitis B Virus (HBV) is a significant public health challenge. Around 250 million people live with chronic HBV infection. With a global approach to this issue, we focus on new perspective in diagnosis, management and prevention of HBV chronic infection. Precise diagnosis of HBV status is crucial to guide patient management. Although available drugs reduce the risk of liver disease progression, they are not able to definitely eradicate HBV, and new therapeutic options are urgently needed. Thus, prevention of HBV infection is still the most effective strategy to achieve the control of the disease. Key aspects of prevention programs include surveillance of viral hepatitis, screening programs and immunization strategies. In spite of the high success rate of licensed HBV vaccines, a need for improved vaccine persists, especially in order to provide coverage of current non-responders.
DOI:10.3390/ijerph16183307      URL    
[本文引用:2]
[2] RUANE P J, DEJESUS E, BERGER D, et al. Antiviral activity,safety,and pharmacokinetics/pharmacodynamics of tenofovir alafenamide as 10-day monotherapy in HIV-1-positive adults[J]. J Acquir Immune Defic Syndr, 2013, 63(4):449-455.
DOI:10.1097/QAI.0b013e3182965d45      URL    
[本文引用:1]
[3] PHUNG B C, SOGNI P, LAUNAY O. Hepatitis B and human immunodeficiency virus co-infection[J]. World J Gastroenterol, 2014, 20(46):17360-17367.
DOI:10.3748/wjg.v20.i46.17360      URL    
[本文引用:1]
[4] LOVETT G C, NGUYEN T, ISER D M, et al. Efficacy and safety of tenofovir in chronic hepatitis B:Australian real world experience[J]. World J Hepatol, 2017, 9(1):48-56.
DOI:10.4254/wjh.v9.i1.48      URL    
[本文引用:1]
[5] 顾琳, 陶春蕾, 杨亚楠, 等. LC-MS/MS法测定人血浆中丙酚替诺福韦和替诺福韦的质量浓度[J]. 沈阳药科大学学报, 2021, 38(2):133-140,161.
[本文引用:1]
[6] 王宝莲, 扈金萍, 盛莉, 等. HPLC-MS/MS法定量研究比格犬灌胃替诺福韦酯后替诺福韦血浆药动学[J]. 药学学报, 2013, 48(3):390-394.
[本文引用:1]
[7] 胡伟, 杨乐婷, 蒋学华, 等. HPLC-MS/MS法同时测定人血浆中替诺福韦艾拉酚胺及其代谢物替诺福韦的浓度和临床应用[J]. 药物分析杂志, 2019, 39(7):1200-1206.
[本文引用:1]
[8] ZHAO L Z, LI Z, ZHOU Z, et al. Simultaneous determination of tenofovir alafenamide and tenofovir in human plasma by LC-MS/MS and its application to pharmacokinetics study in clinc[J]. J Chromatogr B, 2019, 1117:148-157.
DOI:10.1016/j.jchromb.2019.04.011      URL    
[本文引用:1]
[9] HUMMERT P, PARSONS T L, ENSIGN L M, et al. Validation and implementation of liquid chromatographic-mass spectrometric (LC-MS)methods for the quanti-fication of tenofovir prodrugs[J]. J Pharm Biomed Anal, 2018, 152:248-256.
DOI:10.1016/j.jpba.2018.02.011      URL    
[本文引用:1]
[10] LI X, TAN X Y, CUI X J, et al. Pharmacokinetics of teno-fovir alafenamide fumarate and tenofovir in the Chinese people:effects of non-genetic factors and genetic variations[J]. Pharmacogen Pers Med, 2021, 14 :1315-1329.
[本文引用:1]
[11] CRAUWELS H M, BAUGH B, VAN LANDUYT E, et al. Bioequivalence of the once-daily single-tablet regimen of darunavir,cobicistat,emtricitabine,and tenofovir alafenamide compared to combined intake of the separateagents and the effect of food on bioavailability[J]. Clin Pharmacol Drug Dev, 2019, 8(4):480-491.
DOI:10.1002/cpdd.v8.4      URL    
[本文引用:1]
[12] YAMADA H, IKUSHIMA I, NEMOTO T, et al. Effects of anutritional protein-rich drink on the pharmacokinetics of elvitegravir,cobicistat,emtricitabine,tenofovir alafenamide,and tenofovir compared with a standard meal in healthy Japanese male subjects[J]. Clin Pharmacol Drug Dev, 2018, 7(2):132-142.
DOI:10.1002/cpdd.v7.2      URL    
[本文引用:1]
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Tenofovir alafenamide fum...
Tenofovir
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Pharmacokinetic
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陈红
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王志鹏
骆平英
刘海艳
CHEN Hong
QIU Wen
JI Xingfang
WANG Zhipeng
LUO Pingying
LIU Haiyan